超声提取素馨花总环烯醚萜苷的单因素实验研究

杜乾坤，刘东海，杨缓缓，李文宁，郝 婷

(1.承德医学院2009级中药学系，河北承德 067000;2.指导教师)

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超声提取素馨花总环烯醚萜苷的单因素实验研究

杜乾坤1，刘东海2，杨缓缓1，李文宁1，郝 婷2

(1.承德医学院2009级中药学系，河北承德 067000;2.指导教师)

素馨花;总环烯醚萜苷;超声提取

素馨花药材又名耶悉茗花，为木犀科茉莉属植物素馨花(Jasminum officinale L.var. grandiflorum)的干燥花蕾，具有疏肝解郁、行气止痛之功效，在我国民间用于治疗消化不良、十二指肠球部溃疡及慢性肝炎、肝硬化等症[1]。素馨花主要化学成分为环烯醚萜苷类、黄酮类和三萜皂苷类化合物[2-3]，其中环烯醚萜苷类化合物主要为橄榄苦苷，且具有抗HBV活性[4]。本研究以素馨花总环烯醚萜苷含量为考察指标，用紫外分光光度法进行含量测定，考察素馨花总环烯醚萜苷超声提取工艺中的单因素及水平，为正交实验法优选素馨花总环烯醚萜苷的超声提取工艺提供实验依据，为素馨花中环烯醚萜苷类化学成分的进一步分离纯化奠定基础。

1 材料与方法

1.1 仪器与试药 SP-752型紫外分光光度计(上海光谱仪器有限公司);电子分析天平(瑞士梅特勒AG-245型);RE-52AA旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);CHRIST实验室型冷冻干燥机(德国MARTIN CHRIST);素馨花(亳州药材交易中心，军事医学科学院放射与辐射医学研究所药物化学研究室副研究员、生药学博士李彬鉴定);橄榄苦苷对照品(实验室自制，纯度99.5%);试剂均为分析纯。

1.2 方法[5]

1.2.1 标准曲线制定:取橄榄苦苷对照品5.00mg，置100ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1ml含0.0500mg的溶液，作为橄榄苦苷对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液2、4、6、8、10ml，置25ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，在232nm波长处用紫外分光光度计测定吸收度。得回归方程:A=0.0289，C-0.0049，R2=0.9998。

1.2.2 样品测定:五个水平的总环烯醚萜苷含量测定均采用紫外分光光度计测定。取各个水平所得的干浸膏各2.00mg，置50ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成每1ml含0.0400mg的溶液，作为供试液。在232nm波长处用紫外分光光度计测定吸收度，用标准曲线计算出供试液中的总环烯醚萜苷的浓度C1，再用公式:总环烯醚萜苷收率(按药材计算)(%)= (C1/0.0400×M干浸膏)/2.00×100%,计算出总环烯醚萜苷的收率。

2 结果

实验选用了提取时间、提取温度、料液比、提取次数以及乙醇浓度等对总环烯醚萜苷提取率起主要影响的5个因素，以素馨花总环烯醚萜苷的提取率为考察指标，进行了单因素考察。

2.1 提取时间对素馨花总环烯醚萜苷提取率的影响 固定提取温度25℃，提取次数1次，料液比2:20，乙醇浓度30%，考察不同的超声时间对素馨花总环烯醚萜苷提取率的影响，结果见图1。

图1 提取时间对总环烯醚萜苷提取率的影响

2.2 提取温度对素馨花总环烯醚萜苷提取率的影响 固定提取时间20min，提取次数1次，料液比2:20，乙醇浓度30%，考察不同提取温度对素馨花总环烯醚萜苷提取率的影响，结果见图2。

图2 提取温度对总环烯醚萜苷提取率的影响

2.3 料液比对素馨花总环烯醚萜苷提取率的影响 固定提取时间20min，提取温度25℃，提取次数1次，乙醇浓度30%，考察不同料液比对素馨花总环烯醚萜苷提取率的影响，结果见图3。

图3 料液比对总环烯醚萜苷提取率的影响

2.4 提取次数对素馨花总环烯醚萜苷提取率的影响 固定提取时间20min，提取温度25℃，料液比2:20，乙醇浓度30%，考察不同提取温度对素馨花总环烯醚萜苷提取率的影响，结果见图4。

图4 提取次数对总环烯醚萜苷提取率的影响

2.5 乙醇浓度对素馨花总环烯醚萜苷提取率的影响 固定提取时间20min，提取温度25℃，提取次数1次，料液比2:20，考察不同提取温度对素馨花总环烯醚萜苷提取率的影响，结果见图5。

图5 乙醇浓度对总环烯醚萜苷提取率的影响

3 讨论

超声提取的基本原理是利用超声波产生强烈振荡、高速和强烈的空化效应、搅拌作用，破坏植物药材的细胞，使溶剂能渗透到药材细胞中，加速药材中有效成分的浸出提取。与传统提取工艺相比，超声波提取具有时间短、产率高、不需加热(不破坏有效成分)、适应性广、提取的药液杂质少，有效成份易于分离、纯化等优点。超声提取是目前研究中药有效成分时优先选择的提取工艺之一。

前期工作中，我们考察了素馨花中总环烯醚萜苷的水冷浸、水煎煮、醇冷浸、醇回流等传统提取工艺[6]。本实验通过单因素试验对素馨花中总环烯醚萜苷超声提取的5种影响因素进行了优化。比较5种影响因素所得结果，温度对提取率影响最小，可以忽略;乙醇浓度、提取时间、提取次数、料液比等对提取率均有显著影响。相关研究结果可为正交实验法优选素馨花总环烯醚萜苷的超声提取工艺提供实验依据。

[1]南京中医药大学.中药大辞典[M].第二版.上海:上海科学技术出版社,2006.2476

[2]赵桂琴,夏晶晶,董俊兴.素馨花糖苷类化学成分研究[J].药学学报,2007,42(10):1066-1069.

[3]赵桂琴,董俊兴.素馨花三萜皂苷类化学成分研究[J].中国中药杂志,2008,33(1):38-42.

[4]Zhao GQ, Yin ZF,Dong JX. Antiviral ef fi cacy against hepatitis B virus replication of oleuropein isolated from Jaminum of fi cinale L.var.grandiflorum[J].Journal of Ethnopharmacology,2009,125(2): 265-268.

[5]陈文珠，郭伟忠，林茵.栀子药材提取工艺的优化[J].井冈山学院(自然科学)，2008，29(6):75-77.

[6]郝婷，赵桂琴，张树峰.素馨花中总环烯醚萜苷提取工艺的研究[J].时针国医国药，2011，26(6):1353-1355.

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1004-6879(2013)01-0075-02

2012-06-13)