青藤碱微乳的制备及在大鼠体肠吸收的研究

余晓娜 吕耿彬 张 艳

（1广东省中医院药学部，广州510120；2广州中医药大学中药学院，广州510006）

青藤碱微乳的制备及在大鼠体肠吸收的研究

余晓娜1吕耿彬2张 艳2

（1广东省中医院药学部，广州510120；2广州中医药大学中药学院，广州510006）

目的 制备青藤碱微乳，并对青藤碱微乳及其普通混悬剂在体肠吸收特性进行对比。方法 以油酸、吐温80、无水乙醇分别为油相、乳化剂和助乳化剂制备青藤碱微乳。利用大鼠在体肠循环模型，采用HPLC法测定青藤碱微乳及其普通混悬剂在体肠吸收回流液中青藤碱的浓度。结果 青藤碱微乳组在大鼠小肠段的吸收明显高于普通青藤碱混悬液组。结论 微乳制剂对青藤碱在大鼠小肠内吸收有明显的促进作用。

青藤碱；微乳；在体肠吸收

青藤碱为中药青风藤中主要有效成分，具有抗炎、镇痛、抗风湿及免疫抑制等作用，临床用于治疗RA等自身免疫性疾病。但青藤碱在口服后，存在生物半衰期较短、生物利用度低、胃肠道刺激性缺点［1］。微乳（microemulsion）一种由油相、表面活性剂、助表面活性剂以及水相分散自发形成的各向同性、热力学性质稳定的体系，其粒径大小一般为10～100nm［2］。作为新型载药系统，微乳具有提高药物溶解度和药物生物利用度，制备简便等优点［3］。本实验前期已制备一种由油酸、吐温80、无水乙醇所组成稳定的青藤碱微乳，以下将对其质量进行评价，并利用大鼠在体肠吸收实验，探讨口服微乳制剂对青藤碱的肠吸收是否具有促进作用。

1 材料仪器

1.1 药品与试剂 青藤碱对照品（购自四川维克奇生物科技有限公司，批号：110708）；青藤碱原料药（实验室自制）；甲醇（色谱纯，迪马公司）；水为超纯水，其他试剂为分析纯。

1.2 仪器 T01-101电子蠕动泵；Waters高效液相色谱仪（515泵，2487紫外检测器），美国Waters公司；N3000色谱工作站，浙江大学；AUW120D十万分之一分析天平，日本岛津；JB-3型磁力搅拌器。

1.3 实验动物 健康雄性SD大鼠，体重180～220g（广州中医药大学实验动物中心提供，实验动物生许可证号：SCXK（粤）2008-0020，粤监证字2008A002。

2 方法与结果

2.1 试液的配制

2.1.1 空白肠营养液的配制 空白肠营养液（K-R液）：称取NaCL7.8g，KCL0.35g，NaHCO31.37g，NaH2PO40.32g，MgCL20.02g，葡萄糖1.4g，加蒸馏水使成1000mL。

2.1.2 青藤碱微乳及其肠循环液的制备 将青藤碱提取物加入到混匀的处方量油相、吐温80以及无水乙醇中，并使提物充分溶解，将混合溶液置于磁力搅拌器上，调节温度（25±0.5）℃以及合适的转速，逐滴加入水相，搅匀得金黄色澄清透明载青风藤微乳溶液（5mg／g）。精密称取青藤碱微乳1g置于100mL容量瓶中，加入空白肠溶液稀释至刻度，摇匀，即得含青藤碱50mg／L的肠循环供试液。

2.1.3 青藤碱混悬液的制备 精密称取青藤碱5mg加入100ml含有0.5%的羧甲基纤维素钠K-R液中，磁力搅拌器搅匀并超声使青藤碱充分溶解，得到50mg／L的青藤碱混悬液。

2.2 肠循环液中青藤碱含量测定的方法

2.2.1 色谱条件 Waters高效液相色谱仪；色谱柱为AgilentTC-C18ODS柱（5μm，250mm x4.6mm）；Phenomenex保护柱；流动相：甲醇-水（体积比为55∶45），水中加入0.2%的三乙胺；流速1mL／min，检测波长为265nm。分别取对照品、空白K-R液、对照品+空白KR液在该色谱条件下测定，青藤碱的出峰时间8.6min，分离度较好，且空白无干扰，色谱图见图1。

图1 青藤碱HPLC色谱图

2.2.2 标准曲线的制备 精密称取青藤碱12mg，置于10mL的量瓶中，用甲醇稀释至刻度，振摇即得浓度为1.2mg／mL的青藤碱对照品贮备液。分别对标准品贮备液进行倍比稀释，得到青藤碱浓度为12、24、48、96、192、384、768μg／mL对照品溶液。按2.2.1项下方法，均进样10μL。以峰面积（Y）对标准品浓度（X）进行线性回归，分别得回归方程Y＝1596.8X+4033.1，r＝0.9999。结果表明青藤碱在12～792μg／mL范围内呈良好的线性关系。

2.2.3 精密度试验 将上述12μg／mL青藤碱对照品溶液于冷藏（0～4℃）、避光条件下储存，1d内重复测定三次，计算日内精密度；隔天测定一次，连续测定三次，计算日间精密度。结果日内精密度为1.09%，日间精密度为1.69%，说明仪器精密度良好。

2.2.4 回收率试验 精密量取青藤碱对照品贮备液至容量瓶中，加入K-R液稀释成含青藤碱24.0、48.0、96.0μg／mL的溶液，并按2.2.2项下进样10μl，测定其峰面积，平均回收率为99.77%，RSD为1.03%，结果见表1。

表1 回收率试验结果（%）

2.2.5 青藤碱在空白K-R液中的稳定性考察 用空白K-R液配含青藤碱浓度为100.0μg／mL的溶液，置37℃水浴锅中，分别于0、1、2、4、6、8、10h取样，并用0.45μm的微孔滤膜过滤溶液，测定溶液中的青藤碱含量。结果表明青藤碱含量在10h内未发生明显变化，表明青藤碱稳定性较好，见表2。

表2 稳定性试验结果（青藤碱）（%）

2.3 大鼠在体肠吸收实验 大鼠在体肠循环实验方法［4-7］：为消除实验过程中管路对药物的吸附作用，于实验前必须先将管道进行药物饱和处理，在实验开始前用供试液反复冲洗实验管道，直至出液口药液浓度与供试液浓度相等。取禁食不禁水24h的SD大鼠，称重，腹腔注射20%乌拉坦（0.6mL／100g）进行麻醉，置于手术台上固定并用恒温加热垫保持动物并保体温。沿腹中线打开3～4cm，在十二指肠上端和回肠下端各切一个小口，在十二指肠上端以及回肠下端插入硅胶管并用手术线扎紧，将保温至37℃的生理盐水以5mL·min-1流速冲净小肠内容物，最后用空气排净生理盐水，在腹部伤口处用浸有生理盐水的脱脂棉覆盖保湿。

取已配置保温至37℃青藤碱微乳K-R溶液和青藤碱混悬液以5mL·min-1平衡10min后，取样2mL作为0h的样品，然后以2.5mL／min恒速循环。以改变流速时为0时，以后分别在15、30、60、90、120、150min取样2mL，每次取样后立即补加恒温的K-R氏液2mL。在循环回路中用一50mL量筒盛装含药循环液，每到取样时间点读取液体体积，待循环完毕，用空气排尽肠内和管路内液体，即为肠道和管路的死体积。死体积加上每一时间点的量筒读数即为该时间点循环液体积。按下式计算：t（h）累积吸收率（%）＝（0时剩余药量-t时剩余药量）／0时剩余药量x100%。

2.4 在体肠吸收实验结果 将青藤碱微乳和青藤碱混悬液各个时间段的样品用0.45μm的微孔滤膜过滤溶液，按“2.2.1”项方法进样10μL测定峰面积。由结果可知，在150min内，青藤碱微乳组在大鼠小肠段肠吸收累积吸收率明显高于混悬液组，两组具有显著性差异（P＜0.05），表明青藤碱制备成微乳后，能明显提高其在小肠段的吸收，提高生物利用度。见表3和图2。

表3 青藤碱微乳和青藤碱混悬液肠吸收累积吸收率 （n＝5，%）

图2 青藤碱微乳与其混悬液的肠吸收图

3 讨论

青藤碱在口服后存在半衰期短、生物利用度低、有胃肠道刺激性、且经体循环后到达病变部位药量少等缺点［7］，学者一直致力于提高青藤碱口服后的生物利用度，减轻其不良反应，其中制备微乳是通过改变剂型来解决这些问题的方法。微乳是一种表面张力较低的药物载体，由于其特殊结构，易于透过细胞壁的水化层，可使药物和胃肠的上皮细胞充分接触，促进药物在小肠的吸收，提高药物的生物利用度。

通过青藤碱微乳与其混悬液的肠吸收情况进行比较，发现青藤碱微乳组各个时间段在体肠吸收均优于混悬液组，且累计吸收的增幅明显高于混悬液组，说明微乳剂型可有效促进青藤碱在大鼠小肠部位的吸收。这可能是微乳的粒径小，在肠道内易于通过胃肠道的水化层，同时微乳的黏附性较好，可以延长药物与肠黏膜上皮细胞的接触时间，可以促进药物在胃肠道的吸收，但其具体的机制还需要通过更多的实验证明。

［1］李乐，张彩玲，宋必卫．青藤碱的药理研究与临床应用［J］．中药新药与临床药理，2006，7（14）：312．

［2］Huabing Chen，Xueling Chang，Ting Weng，et al．A study of microemulsion systems for transdermal delivery of triptolide［J］．Journal of Controlled Release，2004，9（8）：428．

［3］M．J．Lawrence，G．D．Rees．Microemulsion-based media as novel drug delivery systems［J］．Adv．Drug Deliv．Rev，2000，4（5）：90．

［4］王利胜，涂星，陈豆，等．在体肠循环法研究黄芪提取物对川芎嗪大鼠肠吸收的影响［J］．中国医院药学杂志，2012，32（9）：661-664．

［5］涂星，王利胜，陈豆．在体肠循环法研究川芎嗪自微乳的大鼠肠吸收［J］．中国医药指南，2012，10（9）：2．

［6］李红磊，张忠义，马蕾蕾，等．丹参酮微乳的制备及大鼠在体肠吸收［J］．中国中药杂志，2007，32（11）：1206．

［7］周莉玲，李锐，周华，等．青藤碱制剂药动学试验中药物累积法与血药浓度相关性研究［J］．中成药，1996，18（9）：1761．

Preparation of Sinomenine Microemulsion and Its Absorption in Rat Intestine

Yu Xiaona1Lu Gengbin2Zhang Yan2
(1 Guangdong Province Hospital of Chinese medicine,Guangzhou 510120,China; 2 College of Chinese Traditional medicine,Guangzhou University of Chinese Medicine,Guangzhou 510006'China)

ObjectiveTo prepare the microemulsion of sinomenine，and to compare the absorption kinetics of sinomenine microemulsion with sinomenine powder at small intestine of rats．MethodsThe sinomenine microemulsion formulations were prepared using oleic acid as anoil，Tween 80 as a surfactant and ethyl alcohol as a cosurfactant．Using rat’s in vivo intestinal circulation experiment and HPLC to investigate the concentration of sinomenine in the perfusate．ResultsThe accumulative absorption rate of sinomenine microemulsion was significantly improved compared with sinomenine powder．ConclusionThe sinomenine microemulsion significantly improved the absorption of sinomenine in intestinal of rats．

Sinomenine；Microemulsified；In situ Intestinal Absorption

10.3969／j.issn.1672-2779.2013.14.102

1672-2779（2013）-14-0155-02

杨 佳

2013-05-10）