金属蛋白酶3、抗环瓜氨酸肽和类风湿因子分型对类风湿关节炎临床检测的应用

杨秉潜

广东省梅州市人民医院，广东 梅州 514000

金属蛋白酶3、抗环瓜氨酸肽和类风湿因子分型对类风湿关节炎临床检测的应用

杨秉潜

广东省梅州市人民医院，广东 梅州 514000

目的：基质金属蛋白酶－3（MPP－3）、抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体、类风湿因子分型 （RF）检测对于类风湿关节炎（RA）患者疾病进程的临床预测价值。方法：采用ELISA检测法，测定血清MMP－3、抗CCP抗体、RF lgM、RF lgG、RF lgA的含量。结果：（1）MMP－3、抗CCP抗体及RF lgM、RF lgG、RF lgA在健康对照组均有显著性意义（P＜0.01），抗CCP、RF在RA各组血清水平均高于非RA及对照组（P＜0.01）；MMP－3在RA组具有较高含量，显著高于非RA组、健康对照（P＜0.01）；在RA1组与RA2组中水平比较差别明显（P＜0.01），在RA2组与RA3组中水平比较差别明显（P＜0.01）。（2）RA组中MPP－3、抗CCP抗体、RF lgM＋RF lgG＋RF lgA的敏感度分别为65.3%，68.7%，71.8%。（3）MMP－3、抗CCP与RF lgM＋RF lgG＋RF lgA在RA组中特异性分别为70.2%，95.1%，83.1%。（4）五项指标的联合检测敏感度为32.8%，联合特异度为100%。结论：联合检测五项指标可降低RA的漏诊率。动态联合测定抗CCP抗体、RF lgM、RF lgG、RF lgA、MMP－3能更有效地及时监测RA的疾病进展，对指导临床诊治及干预有积极意义。

类风湿关节炎；基质金属蛋白酶－3；抗环瓜氨酸肽抗体；类风湿因子分型

类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种以对称性、多关节炎症为主要表现的慢性、全身性自身免疫性疾病。RA的靶器官主要是关节滑膜，病理改变是慢性滑膜炎，出现滑膜炎症、增厚、血管翳形成、软骨及软骨下骨质破坏，终导致关节畸形及强直而致残。其中，软骨和骨的进行性、不可逆性破坏是一个不可忽视的特点，造成RA关节破坏的发病机制目前尚未完全阐明［1］。所以，对于RA早期诊断和RA治疗过程有效监测尤为重要。

试验通过检测80例确诊RA患者不同时期血液中抗环瓜氨酸肽（anticycfic citrullinated peptide，anti－CCP）抗体、类风湿因子分型（Rheumatoid factor lgM、lgG、lgA）以及导致软骨降解的最重要蛋白酶［2］基质金属蛋白酶3（matrix metalloproteinasis－3，MMP－3）等指标的含量变化，综合分析它们在RA不同时期临床应用的作用和关系。

1 资料与方法

1.1 标本来源 RA病例均来自本院免疫风湿科门诊及住院病人，其中男性23例、女性57例，年龄在17～79岁、平均年龄49±11岁，其诊断均符合ACR/EULAR2010年RA的诊断标准［3］，并按病程时期分RA1组 （初次诊断）、RA2组（用药治疗3个月）、RA3组（用药治疗6个月）。同时选择41例非RA的其他免疫系统疾病，其中男17例，女24例，年龄15～67岁，平均年龄42±9岁；疾病包括骨关节炎11例、系统性红斑狼疮7例、原发性干燥综合症12例、多发性肌炎3例、系统性硬化症8例，且所有患者均符合相应的临床诊断标准。正常对照组40例，均来自健康体检者的血清，其中男性17例、女性23例，年龄与RA组结构相配，均无肝、肾功能损害、自身免疫性疾病、传染病感染及肿瘤。

1.2 方法 空腹采血，3000r/min离心分离血清，采用ELSIA法定量检测MMP－3、抗CCP、RF lgM、RF lgG、RF lgA。

1.3 仪器与试剂 雷勃MK3酶标仪，MMP－3、CCP、RF lgM、RF lgG、RF lgA检测试剂由德国AESKU公司提供。MMP－3正常女性浓度范围为：18 ng/ml－60 ng/ml；正常男性浓度范围为：24 ng/m l－120 ng/ml；CCP、RF lgM、RF lgG、RF lgA结果判断均是＞18U/m l为阳性，以上试剂均配有标准品与质控品。

1.4 统计学处理 数据均用SPSS 11.0统计软件进行统计，组间率比较采用χ2检验。

2 结果

2.1 RA组与各对照组血清MMP－3、抗CCP、RF分型浓度比较 由表1可知，抗CCP、RF在RA各组血清水平均高于非RA及对照组（P＜0.01），MMP－3、RF在非RA组中水平与正常组比较，（P＜0.01）差别有统计学意义，抗CCP在非RA

组与正常组差别无有统计学意义（P＞0.05）；MMP－3在RA组具有较高含量，显著高于非RA组、健康对照（P＜0.01）；在RA1组与RA2组中水平比较差别明显（P＜0.01），在RA2组与RA3组中水平比较差别明显（P＜0.01）。

表1 RA组和对照组血清MMP－3、抗CCP、RF lgM、RF lgG、RF lgA的含量

2.2 四种血清标准物对检测RA的影响 由表2可知，RA组中MPP－3、抗CCP抗体、RF lgM＋RF lgG＋RF lgA的敏感度分别为65.3%，68.7%，71.8%；MMP－3、抗CCP与RF lgM＋RF lgG＋RF lgA在RA组中特异性分别为70.2%，95.1%，83.1%。

表2 血清MMP－3、抗CCP、RF对检测RA的影响（%）

2.3 五种血清标准物联合对检测RA的影响 由表3可见，CCP＋MMP－3二联、RF分型三联、CCP＋RF分型四联、CCP＋MMP－3＋RF随着类风湿因子分型物质种类的增多，敏感性由58.9%降低到32.8%，但特异性则相反，表现为有所提高。

表3 RA患者MMP－3、抗－CCP与RF联合检测结果（%）

3 讨论

RA患者早期临床表现复杂多变，若不及时诊治，可导致软骨和骨破坏，造成不可逆的骨关节破坏。RA病情发展最快阶段是在发病的第一年，此期存在一个短暂的治疗窗口，这期间RA的炎性是可逆的。因此，只有早期诊断和早期治疗才能减少致残。Fiedomzyk［4］发现早期RA患者治疗前血清MMP－3水平较骨性关节炎及正常人明显增高；Hisashi Yamanaka［5］发现MMP－3增高的早期RA患者，在6～12个月内可出现骨关节破坏。Green［6］发现未接受治疗的早期RA患者，MMP－3水平不仅和疾病活动性相关，还参与RA的发病机制，与RA关节破坏密切相关。Ribbens发现［7］关节液中MMP－3的水平在具有明显破坏病变的RA患者与无关节破坏的RA及ReA患者之间无显著差别，但是关节液中MMP－3的水平与其它的RA活动期的炎症标志物如TNF－α、IL－6、ESR、CRP具有显著相关性。梁柳琴［8］采用敏感的酶联免疫吸附方法检测RA患者血清MMP－3水平，发现RA患者血清MMP－3水平显著升高，它可作为疾病活动性指标之一。本实验表明RA治疗前MMP－3水平高于非RA组及健康对照组（P＜0.01），并随着对RA患者治疗，血清中MMP－3水平降低（P＜0.01）。抗CCP抗体是人工合成的环化瓜氨酸肽，在RA诊断中的应用价值已得到国内外专家的肯定［9－10］。本实验抗CCP抗体对早期RA的诊断敏感性为68.7%，与相关文献报道基本一致。

本实验结果显示，MMP－3、抗CCP抗体、RF lgM、RF lgG、RF lgA可出现在RA的病程各各个时期，且均高于正常对照组，有显著性差异（P＜0.01），RA中晚期的血清水平较早期及对照组均高，有统计学意义 （P＜0.01），提示三者可能与RA的病程有一定相关性，动态检测可预示RA疾病的发展。

综上所述，联合检测抗CCP抗体和RF分型，能提高RA诊断的准确性，减少漏诊，动态联合检测，可有效监测RA病情进展及评价临床疗效。监测血液中的MMP－3的含量，有可能做到早期诊断、及时治疗，对类风湿关节炎的治疗及预后具有较高的评估意义，防止MMP－3等对关节造成的不可逆破坏。说明MMP－3、抗CCP抗体、RF分型联合检测可作为RA临床检验的指标。

［1］Peake NJ，Khawaja K，Myers A，et a1.Levels of matrix meta Uoproteinuse（MMP）－1 in paired ser－8 and synovial fuids of juvenile idiopathic arthritis patients：relationship to inflammatory activity，MMP－3 and tissueinhibitor of metalloproteinases－l in a longitudinal study［J］.Rheumatology，2005，44（11）：1383－1389.

［2］Markku H，Leila R，Jorm aM，et al.Increased type I collagen degradation correlates with disease severity in rheumatoid arthritis［J］.Ann Rheum Dis，1993，52（4）：866－869.

［3］Aletaha D，Neogi T，Silman AJ，etal.2010 rheumatoid arthritis classification criteria：all American College of Rheumatology/European League Against Rheumatism collaborative initiative［J］.Ann Rheum Dis，2010，69（9）：1580－1583.

［4］Fiedorczyk M，Klimiuk PA，Sierakowski S，et al.Serum matrixmetalloproteinases and tissue inhibitors ofmatalloproteinases in patientswith early rheumatoid arthritis［J］.Rheumatol，2006，33（8）：1523－1529.

［5］Hisashi Y，Yuko M，Michi T，et al.Serum matrix metalloproteina－3 as a predictor of the degree of joint destruction during the six months after measurement in patients with early rheumatoid arthritis［J］.Arthritis Rheum，2000，52（4）：852－858.

［6］Green MJ，Gough AK，Devlin J，et al.Serum MMP－3 and MMP－1 and progression of joint damage in early rheumatoid arthritis［J］.Rheumatology，2003，42（1）：83－88.

［7］Ribbens C，Andre B，Kaye O，et a1.Synovial fluid matrix metaIloprotei-Base－3 levels are increased in inflantraatory arthritides whether erosiveor not［J］. Rheumatology（Oxford），2000，39（12）：1357－1365.

［8］梁柳琴，许韩师，杨岫岩，等.类风湿关节炎血清基质金属蛋白酶3检测及其临床意义［J］.中山大学学报，2004，25（3）：128－13.

［9］Schellekens GA，Visser H，de Jong BA，et al.The diagnostic properties of rheumatoid arthritis antibodies recognizing a cyclic citrullinated peptide［J］.Arthritis Rheum，2000，43（1）：155－163.

［10］赵金霞，王志敏，栗占国.以抗环瓜氨酸肽抗体改进对1987年美国风湿病学会关于类风湿关节炎分类标准的探讨 ［J］.中华风湿病学杂志，2009，13（4）：236－239.

Objective：Matrix metalloproteinase－3（MPP－3），anti－cyclic citrullinated peptide（CCP）antibodies，rheumatoid factor scores（RF）detection of clinical predictive value for rheumatoid arthritis（RA）patients with disease progression.Method：Using quantitative ELISA serum MMP－3、anti－CCP antibody RF lgM RF lgG、RF lgA.Results（1）MMP－3，anti－CCP antibodies and RF lgM RF lgG，RF lgA in the healthy control group were significantly significance（P＜0.01），resistance to the CCP and RF in RA serum water were higher than those in non－RA and the control group（P＜0.01）；MMP－3 has a higher content in the RA group was significantly higher than the non－RA group and healthy controls（P＜0.01）；RA1 RA2 group level comparison was significantly different（P＜0.01），in comparison with the level of RA3 group RA2 group was significantly different（P＜0.01）.（2）RA group MPP－3，anti－CCP antibodies，RF lgM＋RF lgG＋RF lgA sensitivity of65.3%，68.7%and 71.8%，respectively.（3）MMP－3，anti－CCP and RF lgM＋RF lgG＋RF lgA in the RA group specificity were 70.2%，95.1%，83.1%.（4）The five indicators of joint detection sensitivity of32.8%，joint specificity of100%.Conclusion：Combined detection of five indicators to reduce the rate of misdiagnosis of RA.Dynamic joint determination of anti－CCP antibodies，RF lgM，RF lgG RF lgA of MMP－3 can be more effective timely monitoring of disease progression in RA guiding clinical treatment and intervention.

rheumatoid arthritis；matrix metalloproteinase－3；anti－cyclic citrullinated peptide antibody；rheumatoid factor typing

R593.22

A

1007－8517（2013）12－0029－02

2013.04.13）