壮医刺血疗法对更年期小鼠免疫系统的影响

曾翠琼 曾振东 吕 琳

广西民族医药研究院，广西 南宁 530001

壮医刺血疗法对更年期小鼠免疫系统的影响

曾翠琼 曾振东 吕 琳

广西民族医药研究院，广西 南宁 530001

目的：壮医刺血疗法对自然更年期小鼠免疫系统的影响。方法：制作自然更年期小鼠模型，观察壮医刺血疗法对不同月龄段自然更年期小鼠血清IL－2水平、胸腺指数、脾脏指数的影响，并与同龄自然组进行比较。结果：壮医刺血治疗后，小鼠血清IL－2水平、胸腺指数、脾脏指数明显升高，与同龄自然组比较差异有统计学意义P＜0.05，0.01）。结论：壮医刺血疗法可在一定程度上改善自然更年期小鼠的免疫衰退，增强免疫器官功能，从多个途径增强或改善机体免疫功能。

壮医刺血疗法；免疫系统；实验研究

更年期综合征是指从卵巢功能开始衰退到完全停止的阶段，会导致患者体液免疫、细胞免疫功能下降和衰退，也是导致发生如感染、自身免疫疾病、心脑血管疾病等并发症的重要原因。因此，免疫系统对维护人体健康、防止衰老、更年期症状及并发症的防治具有重要意义。本研究通过观察壮医刺血疗法对自然更年期小鼠血清IL－2水平、胸腺指数、脾脏指数的影响，探讨壮医刺血疗法对自然更年期小鼠免疫系统的作用机制，为临床提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 10月龄昆明种雌性小鼠56只，体重（39.11±3.52）g，清洁级，室温18～22℃，相对湿度50%～70%。

1.1.2 针刺用具 一次性浅刺针、2%碘酒、75%酒精、棉签。

1.1.3 主要器械和试剂 电子天平、超低温冰箱、低温离心机、小鼠白介素－2（购自北京中宇生物技术研究中心）。

1.2 方法

1.2.1 模型制备 为了与更年期机体各器官的水平相接近，本实验选择鼠龄在12～16个月的自然老化的小鼠为研究对象。

健康10月龄雌性小鼠常规喂养至12月龄，按文献［1］方法连续5天进行阴道涂片检查，呈现不规则动情周期的小鼠为自然更年期小鼠。

1.2.2 取穴及分组

1.2.2.1 取穴：百会、关元等穴。参照林文注主编《实验针灸学》［2］穴位图谱定位。

1.2.2.2 分组：雌性小鼠56只，随机分7组，每组各8只。分别为自然组：将小鼠从购买时起，空养至10、12、14、16月龄后分别取材，分为自然10月龄组、自然12月龄组、自然14月龄组、自然16月龄组。壮医刺血组：分别从小鼠10月龄开始，取小鼠百会、关元等穴位进行刺血，持续8周（2个月，从10月龄到12月龄），并于进入更年期的12、14、16月龄后分别取材。分别为壮医刺血12月龄组、壮医刺血14月龄组、壮医刺血16月龄组。

1.2.3 壮医刺血方法

取穴百会、关元等，常规消毒后用浅刺针点刺挤压放血1滴/穴。每周2次，共8周。自然组与壮医刺血组同步，以手抓放小鼠，每周2次，共8周。

1.2.4 取材

各组小鼠断头取血，胸腺、脾脏。

1.2.5 检测指标及方法

1.2.5.1 行为学

①一般状况：整体精神状态、活动度、毛色、饮食等。

②体重：分别于造模前、治疗后称量小鼠体重并作记录。

1.2.5.2 观察指标 血清IL－2水平、胸腺指数、脾脏指数。

①血清IL－2水平测定胸腺指数、脾脏指数 断头取静脉血2ml，取血2m l置于普通试管内，于4℃静置凝固后，低温离心3500r/min，15min，分离血清，－20℃保存待测。采用双抗体夹心ELISA法测定，测定方法严格按试剂盒说明书操作程序操作。

②胸腺指数、脾脏指数 动物处死，将胸腺、脾脏取出，剥去周围附着的组织，在电子分析天平上称取湿重，按如下公式计算胸腺、脾脏指数：

胸腺指数＝胸腺重量（g）/体重（kg），结果以（% 0）表示。

脾脏指数＝脾脏重量（g）/体重（kg），结果以（% 0）表示。

1.2.6 数据处理和统计学分析

2 结果

2.1 行为学

2.1.1 一般状况 自然组小鼠在造模期间精神萎靡，活动减少，皮毛色泽较晦暗，毛发略显凌乱，饮食明显减少。

壮医刺血后，小鼠活动、饮食增加，皮毛色泽及凌乱程度有改善，机体的整体状况改善。

2.1.2 体重增长情况 自然组小鼠随月龄增长体重增长加快，与自然10月龄组小鼠比较，自然12、14、16月龄组体重明显上升，统计学比较差异有非常显著意义（P＜0.01）。

壮医刺血治疗后，壮医刺血组与同龄自然组小鼠比较，体重增长百分率明显下降，统计学比较差异有显著意义（P＜0.05，P＜0.01）。

2.2 免疫指标的变化

2.2.1 胸腺指数和脾脏指数 胸腺指数自然组内比较，与自然10月龄组比较，自然12、14、16月龄组小鼠胸腺指数呈逐步下降趋势，但四组比较差异无统计学意义（P＞0.05）；壮医刺血治疗后，壮医刺血14月龄组胸腺指数较12月龄组显著上升，两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。与同龄自然组比较，壮医刺血14月龄组显著上升，两组比较差异有统计学意义（P＜0.01），壮医刺血12、16月龄组呈上升趋势，统计学比较差异无显著意义（P＞0.05）。

自然组小鼠脾脏指数随月龄增长呈下降趋势，各月龄组比较差异有统计学意义（F＝13.1652，P＜0.01）。壮医刺血组各月龄组比较差异无统计学意义（P＞0.05），与同龄自然组比较，壮医刺血12、14、16月龄组均呈上升趋势，其中14、16月龄的壮医刺血组与自然组比较差异有统计学意义（P＜0.01；P＜0.05）。见表1。

表1 壮医刺血前后小鼠胸腺指数及脾脏指数（g/kg）（±s）

表1 壮医刺血前后小鼠胸腺指数及脾脏指数（g/kg）（±s）

注：与自然10月龄组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与同龄自然组比较，＃P＜0.05，＃＃P＜0.01。

胸腺指数 脾脏指数组别 n自然组 壮医刺血组 自然组 壮医刺血组10月龄组8 1.21±0.43 8.20±1.13 12月龄组 8 1.07±0.33 1.12±0.33 7.40±0.81 7.87±1.14 14月龄组 8 1.05±0.25 1.56±0.37＃6.11±0.80*7.67±0.66＃＃16月龄组 8 0.90±0.36 0.99±0.26 5.73±0.78**7.91±2.20＃

2.2.2 血清IL－2含量 与自然10月龄组比较，自然12、14月龄组均呈下降趋势，其中自然12月龄组差异有统计学意义（t＝0.0040，P＜0.01）；自然16月龄组呈上升趋势，但两组比较差异无统计学意义（P＞ 0.05）。壮医刺血治疗后，14、16月龄组与自然10月龄组比较呈上升趋势；与同龄自然组比较，刺血14月龄组显著上升，两组比较差异有统计学意义（P＜0.05），自然16月龄组均呈上升趋势，但两组比较差异无统计学意义（P＞0.05），见表2。

表2 壮医刺血前后小鼠血清IL－2含量（ng/mL）（±s）

表2 壮医刺血前后小鼠血清IL－2含量（ng/mL）（±s）

注：与同龄自然组比较，＃P＜0.05。

自然组 壮医刺血组10月龄组组别 n 8 4062.00±667.93 12月龄组 8 2986.03±579.31 3704.16±558.59 14月龄组 8 3862.93±379.06 4795.91±1029.93＃16月龄组8 4131.64±247.22 4386.23±547.75

3 讨论

壮医刺血疗法是壮族民间常用的一种外治法，通过刺血的针具刺人体的一定穴位、病灶处、病理反应点或浅表血络，运用挤压或拔罐等方法放出适量血液，从而达到治病目的。壮医认为百会和关元穴具有补益精血、强壮根本、疏调三道两路的功能，是常用的保健强壮要穴。壮医刺血疗法通过刺激百会、关元穴微血管管壁的神经，加强微血管的调节作用而间接地改善微循环功能，继而改善机体脏腑组织器官的功能，提高机体的免疫机能，增强抗应激能力［3］，均为传统的强壮保健要穴。

本实验结果显示，行为学方面，自然组小鼠在进入更年后精神萎靡，活动减少，皮毛色泽较晦暗，毛发略显凌乱，饮食明显减少，与刺血组比较体重增长较快。免疫系统方面，自然更年期小鼠胸腺指数、脾脏指数、血清IL－2水平随月龄呈下降趋势，其中脾脏指数下降明显（P＜0.01）。壮医刺血治疗后，刺血16月龄组胸腺指数与同龄自然组比较显著上升（P＜0.01）；刺血14、16月龄组脾脏指数与同龄自然组比较显著上升（P＜0.01，P＜0.05）；血清IL－2水平与同龄自然组比较，刺血14月龄组呈上升趋势（P＞0.05），刺血16月龄组明显上升（P＜0.01）。研究说明壮医刺血疗法可良性调节自然更年期小鼠的免疫功能，且对不同月龄段免疫指标的影响具有不同特点，对血清IL－2的影响主要是调动了机体的自稳机制，使紊乱的状态趋于平稳，表现为和缓、持久的远效应。

［1］徐淑云，卞如濂，陈修，等.药理实验方法学 ［M］.北京：人民卫生出版社，2002：1538－1539，826－627.

［2］林文注，王佩.实验针灸学［M］.上海：上海科技出版社，1999.

［3］吕琳.壮医刺血疗法技术操作规范与应用研究 ［M］.南宁：广西科学技术出版社，2007.

R29

A

1007－8517（2013）06－0006－02

2013.01.26）

广西自然科学基金青年基金项目（合同编号：2010GXNSFB013058）。

曾翠琼，女，汉族，医学硕士，主治医师，主要从事中医药、民族医药研究。