盐酸特比萘芬乳膏含量测定的方法研究

占海燕，陈丽华，余斌，胡茂荣，姜淑珍

(1、江西省精神病院，江西南昌330029；2、江西中医药大学，江西南昌330006)

盐酸特比萘芬乳膏含量测定的方法研究

占海燕1，陈丽华2，余斌1，胡茂荣1，姜淑珍1

(1、江西省精神病院，江西南昌330029；2、江西中医药大学，江西南昌330006)

目的建立HPLC法测定盐酸特比萘芬乳膏含量的方法。方法采用Hypersil ODS2 C18柱；以甲醇-pH为7.5醋酸三乙胺溶液为流动相，梯度洗脱进行液相色谱分离，流速为1.0m l/min；检测波长为280 nm；柱温40℃。结果盐酸特比萘芬在8.4～168.0μg/m l与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9998)；平均回收率为99.13%，RSD为1.6%。结论本HPLC法简单、快捷、准确，可作为盐酸特比萘芬乳膏的质量控制方法。

高效液相色谱法;盐酸特比萘芬;乳膏;质量检测

盐酸特比萘芬(terbinafine hydrochloride)是丙烯胺类广谱抗真菌药，对皮肤癣菌，酵母菌、霉菌和一些双相真菌均有显著的杀菌活性，通常制成1%的乳膏，可以皮肤给药达到局部治疗目的[1]。国家药品标准[2]和美国药典第32版[3]均对盐酸特比萘芬乳膏的含量进行了控制。本文通过进一步完善，采用反相高效液相色谱法梯度洗脱对其含量进行测定。

1 仪器与试药

1.1 仪器BP211D Sartorius电子天平(北京赛多利斯科学仪器有限公司)；Agilent 1200高效液相色谱仪(美国安捷伦科技有限公司)；SZ-93自动双重纯水蒸馏器(上海亚荣生化仪器厂)；PHS-3C型pH计(上海雷磁仪器厂)；超声仪(上海科导超声仪器有限公司)。

1.2 试药甲醇色谱纯(Tedia，US)；盐酸特比萘酚(纯度99.6%，中国药品生物制品检定所，批号：100563-200301)；盐酸特比萘酚乳膏(自制，批号：100301，100302，100303)；双蒸水(自动双重纯水蒸馏器制得)；异丙醇(上海国药集团试剂有限公司)；冰醋酸(上海国药集团试剂有限公司)；三乙胺(上海金山亭新化工试剂厂)；无水乙醇(上海国药集团化学试剂有限公司)；氯化钠(上海国药集团试剂有限公司)；磷酸二氢钾(广东汕头陇西化工厂)；磷酸氢二钾(广东汕头陇西化工厂)；氢氧化钠(天津市福晨化学试剂厂)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件色谱柱：Hypersil ODS2 C18柱(250mm×4.6mm，5μm大连依利特有限公司)；以甲醇-pH为7.5醋酸三乙胺溶液为流动相，梯度洗脱，0～4min，90%甲醇溶液；4～11 min，甲醇溶液比例从90%降至85%；11～14 min，甲醇溶液比例从85%升至95%；流速为1.0 ml/min；检测波长为280 nm；柱温40℃；进样量为20μl。色谱图见图1。

2.2 线性关系考察

2.2.1 对照品溶液的制备精密称取盐酸特比萘芬对照品适量，至100m l容量瓶中，流动相超声溶解并稀释至刻度，摇匀，使其为84μg/m l。

图1 盐酸特比萘芬HPLC色谱图

2.2.2 供试品溶液的制备取盐酸特比萘芬乳膏约1.0 g，精密稳定，置50 m l的量瓶中，加流动相40 m l，超声处理使乳膏溶解，加流动相稀释至刻度，摇匀，置冰浴中冷却，取出，迅速过滤，放至室温，作为供试品溶液。

2.2.3 线性关系考察精密量取上述对照品溶液0.5，1，2，4，8，10m l置于10 m l容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，使其浓度为4.2，8.4，16.8，33.6，67.2，84.0μg/m l的对照品溶液，分别吸取20μl，注入液相色谱仪。以对照品浓度C (μg/m l)为横坐标，以峰面积(A)为纵坐标，绘制标准曲线方程为A=0.234C+0.3409，r=0.9998，表明盐酸特比萘芬的浓度在8.4～168.0μg/m l，峰面积与浓度呈良好的线性关系。

2.3 最低检测限考察[4]按照2010版药典规定方法进行最低检测限的测定，以得到信噪比为3的浓度作为检测限，结果显示盐酸特比萘芬的最低检测限为0.042μg/ml。

2.4 精密度考察取浓度为67.2μg/m l的对照品溶液，连续进样6次，记录色谱图，峰面积RSD值为1.80%。结果表明，该方法精密度良好。

2.5 稳定性考察精密称取盐酸特比萘芬乳膏约1.0g，置50 m l的容量瓶中，加流动相40 ml，超声处理使盐酸特比萘芬乳膏溶解，放至室温，加流动相稀释至刻度，作为供试品溶液。取20μl分别于0，2，4，6，8，10，12 h后注入液相色谱仪，记录色谱图，考察盐酸特比萘芬乳膏样品溶液的稳定性，结果峰面积RSD为0.89%，表明盐酸特比萘芬在12 h之内稳定性良好。

2.6 重复性试验取同一批号样品6份，按“2.2.2”项下方法制备供试品液。分别精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，考察盐酸特比萘芬乳膏样品溶液含量，6次测定值的RSD为3.5%，表明本法重复性良好。

2.7 回收率试验取盐酸特比萘芬原料药约0.8，1.0，1.2 g，精密称定，按盐酸特比萘芬乳膏的处方和制法制成三个不同浓度的样品各三个，每个样品共制100g。取上述样品9个样品各1.0g，精密称定，分别精密加入对照品溶液适量，按“2.2.2”项下方法制备供试品液，按“2.1”项下的色谱条件进行测定，按外标法以平均峰面积计算含量并计算回收率，结果平均回收率为99.13%，RSD为1.6%(n=9)，表明该方法准确可靠。

2.8 样品的测定取3批盐酸特比萘芬乳膏，按“2.2.2”项下的方法制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl进样，注入液相色谱仪，按外标一点法计算供试品中盐酸特比萘芬的含量。测定结果见表1。

表1 三批样品中盐酸特比萘芬含量测定结果(n=3)

3 讨论

根据美国药典USP32-NF27建立色谱条件进行检测，盐酸特比萘芬的出峰时间为23min，时间较长，经优化比例，得到检测盐酸特比萘芬的色谱条件，其出峰时间大大缩短为7.5 min。本方法准确、简便、重复性好、快速，可用于其质量控制。

参考国家药品标准，预试验分别采用异丙醇与流动相做提取溶剂，对提取溶剂进行考察，未发现明显差异。

[1]李慎秋,陈映玲,陈春梅,等.特比萘芬软膏治疗浅部真菌病的临床观察[J].同济医科大学学报,1997,26(6):494.

[2]国家食品药品监督管理局.国家药品标准[S].WS1-(X-115)-2004Z.

[3]美国药典委员会.美国药典[S].USP32-NF27，2012:3677.

[4]国家药典委员会.中国药典[S].北京：化学工业出版物,2010:194.

Study on determ ination of terbinafine hydrochloride in crem or by high performance liquid chromatography

ZHAN Haiyan,CHEN Lihua,YU Bin,etal.JiangxiMental Hospital,Nanchang 330006,China

ObjectiveTo develop an effective HPLCmethod for determining the content of terbinafine hydrochloride in cremor.M ethodsThe separation was achieved by using a Hypersil ODS2 C18 column and a gradient elution with themobile phase ofmethanol and acetic acid-triethylamine(pH7.5).The flow rate was 1.0 m l/m in and the column temperature was 40℃.The detection wave length was at 280 nm.The content was quantified by an external standard method.ResultsThe terbinafine hydrochloride in the range of 8.4～168.0μg/m l has a good linear relationship with the peak area(r=0.9998).The average recovery rate was 99.13%,and the RSD was 1.6%.ConclusionThe HPLC method is simp le,rapid and accurate.It can be used as the quality controlmethod for detection of the contentof terbinafine hydrochloride in cremor.

HPLC;Terbinafine hydrochloride;Cremor;Quality examination

R927.2,R978.5,R379,R756

A

1674-1129(2013)05-0465-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2013.05.023

占海燕，女，1972年9月出生，毕业于江西中医药大学，副主任中药师，研究方向为临床药学。

陈丽华，女，1972年3月出生，博士，硕导，教授，江西中医药大学现代中药制剂教育部重点实验室，研究方向为中药新剂型与新技术。