IL-17、COX-2在口腔扁平苔藓和口腔鳞癌中的表达分析

徐佳瑛 杨丽丽 马 超 陈启林

口腔癌是我国常见的恶性肿瘤之一，发病率较高［1］，近年来在东亚国家及地区均有上升的趋势。口腔癌容易复发，复发率为20% ～48%，5年生存率约60%，且部分患者发病年龄较低，有年轻化趋势。近年来研究发现炎性因子可通过改变局部微环境而影响肿瘤的发生、发展，而环氧化酶-2(COX-2)与细胞凋亡、肿瘤发生等密切相关［2］。本研究通过观察白介素-17(IL-17)与COX-2在口腔扁平苔藓、口腔鳞状细胞癌中的表达情况，分析两者的关系和临床意义。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取2009年1月至2012年1月我科初诊的20例口腔扁平苔藓和20例口腔鳞癌患者的病理组织为研究对象，分别纳入扁平苔藓组和鳞癌组。所有病理组织均取自手术切除并经石蜡包埋处理，术前未进行免疫、激素、放疗、化疗等相关治疗，患者本身未合并其他自身免疫性疾病。选取20例正常口腔黏膜组织作为对照组，均取自口腔外伤患者，排除口腔黏膜疾病或全身免疫系统疾病，镜下组织表现为复层鳞状上皮，包括基底层、棘细胞层、颗粒层、角化层。

1.2 方法

1.2.1 仪器和试剂 超净工作台，微型常温离心机，超纯水及除菌系统，电冰箱，OLYMPUS光学显微镜及数码成像系统等。兔抗人IL-17单克隆抗体，购自北京博奥森生物有限公司;抗COX-2多克隆抗体购自美国SantaCruz公司;SP免疫组化试剂盒以及DAB显色试剂盒购自北京中山生物有限公司。

1.2.2 试验步骤 切片机连续切片，厚度取4 μm，并置于经多聚赖氨酸处理的载玻片上。常规脱蜡水洗后置于3%双氧水中约10 min，灭活内源性过氧化物酶。室温下采用柠檬酸缓冲液，微波加热修复抗原，并以正常羊血清封闭20 min，蒸馏水冲洗后将载玻片上的水渍擦干。滴加一抗，37℃下孵育1 h，滴加山羊抗小鼠IgG，37℃下静置30 min，然后滴加SP复合物，静置30 min，DAB浓缩试剂盒显色，显微镜下控制显色时间，冲洗后苏木精复染，然后脱水、透明、封片。所有实验步骤及操作严格按试剂盒说明进行，设立阴性对照并将PBS代替一抗重复操作。

1.3 评价标准

所有切片均在镜下随机选取5个以上高倍视野(×400)观察，浅黄色-棕褐色细颗粒状为阳性表现，计算阳性细胞百分比。按阳性细胞所占的百分比进行分级，阳性细胞表达率＜10%为阴性(-)，≥10% ～20%为弱阳性(+)，＞20% ～50%为阳性 (++)，＞50%为强阳性(+++)。

1.4 统计学处理

研究数据均由SPSS13.0软件进行统计学分析，计数资料采用χ2检验，双侧检验水准 α=0.05，以 P＜0.05为有统计学意义。

2 结果

2.1 IL-17在正常口腔黏膜，口腔扁平苔藓及口腔鳞癌组织中的表达

对照组中14例(70.0%)呈不同程度的阳性表达，主要位于胞质，分布于颗粒层、角化层、部分棘细胞层，间质细胞中可见少量阳性表达;扁平苔藓组19例(95.0%)呈阳性表达，主要在固有层浅层上皮细胞内表达。鳞癌组中均有阳性表达，肿瘤细胞及周围间质细胞均可见阳性表达。经比较发现，IL-17在扁平苔藓组与鳞癌组中的阳性表达率均显著高于对照组(P＜0.05)，但扁平苔藓组与鳞癌组IL-17阳性率无统计学差异(P ＞0.05)，见表1。

表1 IL-17在正常口腔黏膜，口腔扁平苔藓及口腔鳞癌组织中的表达(例)

2.2 COX-2在正常口腔黏膜，口腔扁平苔藓及口腔鳞癌组织中的表达

对照组中未见COX-2阳性表达，扁平苔藓组中10例(50.0%)阳性表达，以细胞胞质或核膜为主，多见于上皮棘细胞层、颗粒层以及角化层，基底细胞未见阳性表达;在鳞癌组中16例(80.0%)阳性表达，鳞状癌细胞中呈强阳性表达。经比较发现，COX-2在扁平苔藓组与鳞癌组中的阳性表达率均显著高于对照组(P＜0.05)，且鳞癌组高于扁平苔藓组(P ＜0.05)，见表2。

表2 COX-2在正常口腔黏膜，口腔扁平苔藓及口腔鳞癌组织中的表达(例)

3 讨论

口腔扁平苔藓是口腔黏膜的慢性非感染性炎性疾病，Th1/Th2失衡等免疫因素在疾病的发生、发展中具有重要作用。因口腔扁平苔藓具有癌变潜能，故WHO将其列入潜在恶性病变范畴。大量研究发现，口腔扁平苔藓病损区以T淋巴细胞聚集为主，包括辅助性和抑制性T细胞，而B细胞、自然杀伤细胞却相对少见。活化的T淋巴细胞可产生多种炎性因子来调控、促进免疫反应过程，引起大量活化的T淋巴细胞在局部组织浸润［3］。部分 T淋巴细胞可分泌 IL-17(Th17亚群)，并可促进炎症反应、调节免疫应答，促进炎细胞因子分泌，在自身免疫性疾病中具有重要作用［4］。

口腔扁平苔藓具有慢性持续性、免疫抑制功能降低，病变区可见毒性T细胞克隆等自身免疫性疾病的特征。目前在实体瘤与周围间质关系的研究中发现，慢性炎症过程中细胞因子的变化可影响局部微环境，进而改变正常细胞的存活、增殖、分化周期，是肿瘤起始、进展并具有侵袭性和转移能力的关键因素之一［5］。在胃癌、非小细胞肺癌、卵巢癌、肝癌、肠癌、乳腺癌恶性肿瘤中均可发现Th17细胞及IL-17;进一步研究局部微环境，发现恶性肿瘤细胞可分泌MCP-1、促炎因子等，促进Th17细胞分化并维持其生长过程［6］。本次研究发现，约30%的正常口腔黏膜组织不表达IL-17，70%阳性表达于胞质，包括颗粒层、角化层、部分棘细胞层以及间质细胞。95%扁平苔藓组织IL-17呈阳性表达，多见于固有层浅层上皮细胞，而鳞癌组织中均有阳性表达，肿瘤细胞及周围间质细胞均可见阳性表达。经比较发现，IL-17在扁平苔藓组与鳞癌组阳性表达率均显著高于对照组，扁平苔藓组与鳞癌组IL-17阳性率无显著差异，但鳞癌组强阳性表达率显著高于扁平苔藓组。IL-17在口腔扁平苔藓、口腔鳞癌中均有高度表达，提示口腔扁平苔藓上皮长期受炎症细胞浸润，随着局部细胞因子水平改变，炎性因子网络化激活可能促进口腔鳞癌的发生。但也有学者认为，IL-17高表达是非霍奇金淋巴瘤预后较好的指标之一［7］。因此，IL-17在癌前病变及鳞癌中的表达水平与预后的关系尚需进一步深入研究。

COX-2属于诱导型酶，在大多数正常组织中不表达，在炎性因素等刺激下可诱导性表达，有学者发现其在癌基因、生长因子的作用下也可表达。COX-2的过度表达在癌前病变组织中较早出现，甚至早于细胞凋亡周期改变。有学者研究发现舌鳞状细胞癌中COX-2表达水平与肿瘤侵袭性、转移能力、预后等相关［8］。近年来对肿瘤微环境及发生、发展的研究发现，COX-2表达水平上升与肿瘤血管形成关系密切［9-10］。本次研究发现，COX-2在正常口腔黏膜细胞中几乎不表达，50.0%的扁平苔藓阳性表达，80.0%鳞癌阳性表达。经比较发现，COX-2在扁平苔藓组与鳞癌组阳性表达率均显著高于对照组，且鳞癌组阳性率高于扁平苔藓组，与其他学者研究结果相近。Pandey等研究发现COX-2在正常口腔黏膜、癌前病变、口腔鳞癌中表达水平逐渐增高［11］。

口腔黏膜癌变的机制是临床研究的热点之一，特别是癌前病变进展为肿瘤的过程，例如局部微环境的变化，细胞因子间的正、负反馈网络，多种因子共同作用引起细胞生长周期变化，刺激肿瘤血管生成等等［12］。本次研究初步发现IL-17与COX-2在口腔扁平苔藓及鳞癌中均有不同程度的表达，但具体机制及对肿瘤微环境的影响尚需进一步深入研究，例如动态观察肿瘤的发生与发展与IL-17、COX-2的关系，从而为临床治疗、预后评估提供参考。

［1］付荣明.原癌基因eIF4E在口腔鳞癌及切缘中的表达及其意义〔J〕.实用癌症杂志，2009，24(5):477.

［2］钱 毅，乔文静，马叶华，等.人健康和炎性牙槽骨成骨细胞 COX-2、PGE2、OPG，RANKL 的表达〔J〕.口腔医学研究，2010，26(4):529.

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［4］Nguyen CQ，Hu MH，Li Y，et al.Salivary gland tissue expression of interleukin-23 and interleukin-17 in Sjogren＇s syndrome:findings in humans and mice〔J〕.Arthritis Rheum，2008，58(3):734.

［5］刘国林，闫 威，陈 勇，等.口腔扁平苔藓癌变的研究进展〔J〕.肿瘤防治研究，2010，37(7):848.

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［11］Pandey M，Prakash O，Santhi WS，et al.Overexpression of COX-2gene in oral cancer is independent of stage of disease and degree of differentiation〔J〕.Int J Oral Maxillofac Surg，2008，37(4):379.

［12］Sudha VM，Hemavathy S.Role of bcl-2 oncoprotein in oral potentially malignant disorders and squamous cell carcinoma:an immunohistochemical study［J］.Indian J Dent Res，2011，22(4):520.