心肌三合一快速诊断试剂盒在手足口病患儿中的临床应用

孔东辉，田瑾瑾，李肖宇，汪园琪，冀文娟，李 萍（安徽省亳州市人民医院检验科 236800）

手足口病（HFMD）是一种由肠道病毒引起的，临床以手、足、口腔疱疹为特征的病毒感染性疾病。引发手足口病的肠道病毒有20多种（型），以柯萨奇病毒A16型（CoxA16）和肠道病毒71型（EV71）最常见。多发生于婴幼儿，该病多数预后良好。个别患者可引起心肌炎、肺水肿、无菌性脑膜脑炎等并发症而导致死亡。有文献报道该病还可引起心脏损害［1－2］。本文选择手足口病流行期间本院住院的60例HFMD患儿为研究对象，分析血浆肌钙蛋白I（cTnI）、肌酸激酶同工酶（CK－MB）检测在手足口病患儿心肌损伤中的临床价值。HFMD的及时诊断对HFMD治疗和预后有重大意义。但心肌酶谱的定量检测受实验条件限制在某些医院无法开展，而有条件开展检测的医院又很难做到全天开启生化分析仪，且检测时间相对较长，需静脉采血，HFMD患儿多为3岁以下，静脉采血患儿及家长不易接受且医疗风险较大。因此寻求一种简便、快速、敏感性和特异性都高的检测试剂和方法迫在眉睫。作者对cTnI、肌红蛋白、CK－MB联合检测试剂盒进行了实验观察，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2011年4～6月来本院就诊的确诊HFMD患儿60例，所有病例均伴发热，手、足、口均有斑丘疹、疱疹，符合《手足口病预防控制指南（2008年版）》诊断标准［3］。对照组为60例同期本院健康体检儿童，年龄1～24月。

1.2 试剂 cTnI、肌红蛋白、CK－MB联合检测试剂盒由杭州艾康生物技术有限公司提供。

1.3 方法 （1）采集所有检测对象血浆或末梢血标本进行检测。（2）cTnI、肌红蛋白、CK－MB联合检测试剂盒测定应用免疫层析法。测试时，将标本滴入试剂盒加样孔，标本中如含有肌红蛋白或cTnI或CK－MB，则标本中的心肌3项指标分别与预先包被在聚酯膜上的金标记的3项指标相应抗体结合，结合物在毛细效应下向上层析，随后会被固定在膜上相应测试区内的3项相应抗体结合捕获，从而在相应测试区出现紫红色条带。如果是阴性标本，则相应测试区内没有紫红色条带出现。（3）cTnI、肌红蛋白、CK－MB联合检测试剂盒测定按照试剂盒说明书进行操作。（4）数据处理分别计算出心肌3项指标的敏感性、特异性和正确诊断率［4］。

2 结 果

2.1 60例HFMD患儿cTnI阴性2例，肌红蛋白阴性1例，CK－MB阴性1例；60例非HFMD患者cTnI阳性0例，肌红蛋白阳性0例，肌酶激酶同工酶阳性1例。该例CK－MB阳性是由于严重溶血或黄疸对检测造成负干扰。因此，应避免标本溶血。

2.2 血浆cTnI检测的敏感性、特异性、诊断正确率分别为96%、95%、94%；肌红蛋白分别为100%、91%、96%；CK－MB分别为98%、95%、97%。由于心肌3项指标均有很高的敏感性，cTnI、肌红蛋白、CK－MB联合检测试剂盒检测，能为临床筛查HFMD心肌损伤提供重要的实验依据。

3 讨 论

1957年新西兰首次报道HFMD。我国于1981年上海首次报道本病。此后，各省均有本病报道。HFMD是由肠道病毒CoxA16、EV71引起的急性传染病，多发生于学龄前儿童，尤以3岁以下龄组发病率最高。患者和隐性感染者均为传染源，主要通过消化道、呼吸道和密切接触等途径传播。主要症状表现为手、足、口腔等部位的斑丘疹、疱疹，以每年5～7月为发病高峰，四季均可见散发病例。HFMD传染性强，可在短期内造成大流行，一般病程短而轻，多在1周内痊愈。多数预后良好，少数病例可出现脑膜炎、脑炎、脑脊髓炎、肺水肿、循环障碍等，多由EV71感染引起。2008年5月2日卫生部正式将HFMD纳入丙级传染病管理，加强了对本病的认识、研究和管理。该病不仅可引起心肌损害，亦可并发暴发性心肌炎导致死亡。王晓华［5］报道HFMD 1 698例，3例死于暴发性心肌炎。研究表明，HFMD严重期心肌酶谱明显升高，其升高的程度与疾病严重程度呈正比，与预后密切相关［6］。当心肌损伤后，肌红蛋白于起病后2h在血液中浓度升高，12h达高峰，24～48 h恢复正常，具有很高的阴性排除价值；心肌cTnI在起病后3～4h后升高，11～24h达高峰，7～10d降至正常；CK－MB在起病后4h内升高，16～24h达高峰，3～4d恢复正常。因为心肌损害首先表现为心肌酶谱的改变，当达到一定程度时才出现电生理紊乱，才表现为心电图异常。当心肌细胞损伤时，细胞质天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、乳酸脱氢酶（LDH）、激酸激酶（CK）、CK－MB释放入血，这时检验血清心肌酶谱会升高。AST广泛分布于人体各组织、器官中，主要在心、肝、骨骼肌、肾、胰、脾、肺、红细胞中，其中以心肌细胞含量最丰富。LDH广泛存在于以心、肾、骨骼肌为主的人体组织内，二者特异性不高；CK、CK－MB在心肌损伤2～6h开始升高，比其他酶出现早，并迅速升至高峰，2周左右即可恢复正常［7］，其中CK在骨骼肌中最多，其次是心肌、脑和平滑肌等组织中也有分布；而CK－MB是特异性同工酶，在心肌细胞中含量高，具有较高的特异性和敏感性，故它的升高可作为心肌损伤早期诊断指标。HFMD引起心肌酶谱升高可能与下列因素有关：（1）病毒感染直接作用导致心肌细胞坏死和炎症细胞反应；（2）机体免疫反应可加剧心肌细胞的损伤；二者使得心肌细胞内酶的释放。LDH、CK、CK－MB是目前常用的与心肌损害有关的酶学检查指标，其中CK－MB是心肌特异性同工酶，在心肌细胞中含量最高，正常血清中含量极微，当心肌细胞受损时释放入血，对判断心肌损害有高度特异性［8］。

一旦发现感染HFMD，则应将患儿隔离，以免传染他人引起流行蔓延，应适当休息，清淡饮食，做好口腔和皮肤护理。如出现心肌酶升高，要提高警惕，尽早行胸片、心电图等检查以免延误最佳治疗时机［9］。

测定肌红蛋白的方法很多，如分光光度法、电泳法。这些方法不能测定低于微克水平的肌红蛋白；免疫化学法比较灵敏，但抗血清必须是对肌红蛋白特异的；对流免疫电泳是一种定性方法，灵敏度只有2mg／mL，不适宜检测心肌梗死；放射免疫试验检测肌红蛋白、CK－MB灵敏度高，特异性强，但使用放射性同位素，会造成对环境的污染；胶乳增强透射比浊法测定肌红蛋白、cTnl灵敏度高，特异性好，测定速度快，但需要自动生化分析仪，成本较高［10－11］。肌钙蛋白测定多用免疫学方法，ELISA法适宜大批量检测，CK－MB测定采用全自动电泳仪，成本较高；免疫抑制法敏感性高于电泳法，能用于急诊，但需要生化分析仪。cTnI、肌红蛋白、CK－MB联合检测试剂盒采用高度特异性的抗体－抗原反应及免疫层析分析技术。心肌3项指标在同一反应板上同时进行检测，10～20min便可读取结果。适合单个标本检测且不需特殊设备。由于心肌3项指标在血液中升高、降至正常的时间不同，cTnI、肌红蛋白、CKMB联合检测试剂盒则结合了肌红蛋白高敏感性和cTnI和CK－MB的较高特异性，有利于提高诊断正确率。作者认为cTnI、肌红蛋白、CK－MB联合检测试剂盒在筛查HFMD时，阴性结果在很大程度上排除了HFMD患儿心肌损伤的可能，而阳性结果则需结合临床表现和心电图检查等进行综合判断。由于cTnI、肌红蛋白、CK－MB联合检测试剂盒具有很高的敏感性、较高特异性和诊断正确率，且方法简便、快速，标本容易采集，故可用于HFMD患儿心肌损伤的急诊筛查，且能减少治疗前的时间延误，对HFMD患儿严密观察心脏体征，对合并心肌损害早期发现，并予保护心肌、促进损伤心肌细胞迅速恢复正常功能，对预后起重要作用［12］。同时可给予营养心肌药物以防止心肌损伤进一步加重或并发心肌炎 。HFMD患儿可检测血浆或末梢血，适用于住院及门诊患儿筛查，两种采血方法供选择，减少了患儿及家长不愿采静脉血的痛苦，降低了医疗安全风险，有利于社会医院和谐发展。

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