RP-HPLC法测定盐酸左氧氟沙星片的含量

洪丽萍 蔡亚兰 黄加秀 石晶萍 朱佳丽 段鹏

RP-HPLC法测定盐酸左氧氟沙星片的含量

洪丽萍 蔡亚兰 黄加秀 石晶萍 朱佳丽 段鹏

目的 建立盐酸左氧氟沙星片中盐酸左氧氟沙星含量测定的RP-HPLC法。方法 色谱柱Agilent XDB-C18柱；流动相为醋酸盐缓冲夜(pH值为3.0)-乙腈(45：55), 流速1.0 ml/min, 检测波长295 nm。结果 盐酸左氧氟沙星在5.00~250.00 μg/ml范围内线性关系良好, r=1.000。平均回收率为99.91%, RSD为0.3%(n=6)。结论 本方法简便, 准确, 其他组分不干扰测定,可以用于盐酸左氧氟沙星片中盐酸左氧氟沙星的定量分析。

RP-HPLC；盐酸左氧氟沙星片；含量测定

盐酸左氧氟沙星片是我公司生产的奎诺酮类抗生素, 该产品为氧氟沙星的左旋体, 其抗菌活性约为氧氟沙星的两倍,它的主要作用机制为抑制细菌DNA旋转酶(细菌拓扑异构酶Ⅱ)的活性, 阻碍细菌DNA复制, 临床上主要用于敏感细菌引起的轻、中度感染。作者参考产品质量标准［1］和中国药典方法对测定产品中盐酸左氧氟沙星的含量方法进行研究分析和方法学验证, 研究结果表明HPLC法简便, 准确, 可以用于控制本制剂产品的质量。

1 仪器与试药

仪器：瑞士梅特勒公司的XS205 电子天平, 昆山公司的KQ-500B型超声波器, 美国安捷伦公司的高效液相色谱仪Agilent1200 Series等仪器。

试药：盐酸左氧氟沙星对照品(批号为：130537)购于美国西格玛公司, 扬子江药业集团有限公司生产的盐酸左氧氟沙星片(批号分别为：12050111, 12060111, 12070111)为,乙腈纯度级别是色谱纯, 其它用到的化试级别均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 方法的色谱条件和系统适应性试验 选用安捷伦公司的XDB C18柱(150 mm×4.6 mm, 5 μm)为色谱柱；以醋酸盐缓冲夜(pH值为3.0)-乙腈(45：55)；流速1.0 ml/min；检测波长为295 nm；柱温：30℃；流速：1.0 ml/min。

对上述色谱条件进行试验分析后发现：盐酸左氧氟沙星色谱主峰与试验样品中的其他组分色谱峰达到了有效分离,试验后方法的理论板数以盐酸左氧氟沙星峰计>2000；阴性对照样品溶液获得的色谱图中在盐酸左氧氟沙星相对应的位置上无色谱峰出现, 表明样品中其他成分不干扰盐酸左氧氟沙星的测定, 上述色谱条件可行。

2.2 配制对照品溶液 取批号为：130537的盐酸左氧氟沙星对照品适量, 加流动相溶解制成每1 ml含5 mg的盐酸左氧氟沙星对照品贮备液。

2.3 线性关系试验 分别精密吸取上述对照品贮备液适量,用流动相稀释制成浓度分别为：5 μg/ml、10 μg/ml、25 μg/ml、50 μg/ml、100 μg/ml、150 μg/ml、 250 μg/ml的溶液, 按上述色谱条件分别进样20 μl, 以盐酸左氧氟沙星浓度为横坐标(X),其峰面积积分值为纵坐标(Y), 得回归方程为： Y= 51.37X-3.076 相关系数r=1.000.

结果表明盐酸左氧氟沙星的浓度和其峰面积呈现良好的线性关系的浓度范围在5.00~250.00 μg/ml之间。

2.4 精密度试验 取浓度为0.05012 mg/ml的盐酸左氧氟沙星对照品溶液20 μl, 按样品测定项下方法操作, 重复进样6次, 结果盐酸左氧氟沙星峰面积均值为6332.84082, RSD值为0.1%, RSD值小于2.0%, 表明该方法精密度良好。

2.5 稳定性试验 取新制备的浓度为0.05039 mg/ml的样品溶液, 在(25±2)℃的环境条件下考察, 按上述色谱条件每隔1 h进样20 μl, 记录每次测定的峰面积, 共测定12次, 盐酸左氧氟沙星峰面积均值为5325.542315, RSD值为0.1%, RSD值<2.0%, 试验结果表明样品溶液在(25±2)℃的环境条件可放置12 h。

2.6 方法重复性 任取批号为12010111的产品, 按样品测定项下方法制备6份供试液, 试验结果表明盐酸左氧氟沙星片含量均值为99.90%, RSD为0.22%。

2.7 加样回收率试验 采用加样回收法。取已知盐酸左氧氟沙星含量的样品(12050111, 12060111, 12070111)适量, 分别精密加入盐酸左氧氟沙星对照品溶液(0.05 mg/ml)10 ml, 按照“2.8”项下方法制备6份供试液, 分别进样20 μl, 按上述色谱条件测定, 平均回收率为99.91%, RSD为0.3%。

2.8 样品含量测定 取本品20片, 精密称定, 研细, 精密称定细粉适量(约相当于盐酸左氧氟沙星5 mg), 置100 ml量瓶中, 加流动相50 ml, 超声处理(功率500 W, 频率40 kHz) 30 min, 放冷, 用流动相稀释至刻度, 摇匀, 滤过, 即得, 精密量取续滤液20 μl。按上述色谱条件测定, 以外标法计算样品中盐酸左氧氟沙星的含量。

2.9 阴性对照样品溶液的制备 阴性对照样品溶液即缺盐酸左氧氟沙星的空白溶液, 其制备按处方比例准确称取除盐酸左氧氟沙星以外的其它物料, 模拟本品的制备工艺和供试品溶液的制备方法, 制成缺盐酸左氧氟沙星的空白溶液。

3 讨论

3.1 色谱条件的选择 分别选取不同配比的醋酸盐缓冲夜(pH值为3.0)-乙腈为流动相, 不同厂家不同规格的色谱柱进行分析, 试验结果表明最佳色谱条件是选择流动相为醋酸盐缓冲夜(pH值为3.0)-乙腈(45:55), 选取安捷伦的XDB C18(150 mm×4.6 mm, 5 μm)色谱柱, 设置参数柱温为30℃,流速为1.0 ml/min, 检测波长为295 nm。

［1］ 中华人民共和国卫生部药品标准(试行).YBH28972005.

225321 泰州, 扬子江药业集团有限公司质量管理部质量检测中心

洪丽萍 E-mail：3845310@qq.com