中药两面针的质量控制研究进展

2013-01-24柏帆

中国民族民间医药 2013年12期

关键词：两面针脂素生物碱

柏帆

广西壮族自治区柳州市食品药品检验所，广西柳州 545006

中药两面针的质量控制研究进展

柏帆

广西壮族自治区柳州市食品药品检验所，广西柳州 545006

概述了1997～2012年来两面针的定性鉴别和含量测定方法质量控制研究的进展及现状，为合理建立两面针的质量评价体系提供参考。

两面针；定性鉴别；含量测定

中药两面针为芸香科花椒属植物两面针［Zanthoxylum nitidum（Roxb.）DC.］的干燥根［1］，别名入地金牛、蔓椒、两背针、双面刺等。最早收载于清代赵其光所著的《本草求原》，名入地金牛［2］，其后在《岭南采药录》、《中药大辞典》、《全国中草药汇编》、《中国药典》均有收载。两面针性味苦、辛，平，有小毒；具有活血化瘀，行气止痛，祛风通络，解毒消肿的功效；用于跌打损伤，胃痛，牙痛，风湿痹痛，毒蛇咬伤，烧烫伤。两面针含有多种活性成分，主要为：生物碱、香豆素、木脂素、甾体及其苷、黄酮及其苷、醌类以及萜类和有机酸类等［3］。

两面针是我国丰富的传统中药资源宝库中的一种重要而有代表性的中草药，广泛分布于广西、广东、云南、台湾等南方省份。目前，两面针市场需求量大，在医药化学和天然产物化学中占有重要地位。现将两面针定性鉴别、含量测定方面的质量控制方法研究进展作如下综述。

1 定性鉴别

1977年版中国药典一部首次收载两面针药材，检测项目有性状鉴别和理化

鉴别1项（试管法检查生物碱）［4］，而1985年版、1990年版中国药典则将该品种删除。

1991年，温尚开［5］针对市场上流通的两面针药材及其伪品进行了药材性状、组织显微、薄层层析，紫外光谱等方面的比较研究。1994年，赖茂祥，饶伟源［6］也报道了两面针（Z．nitidum）茎及三种伪品飞龙掌血（Toddaliaasiaiica）、竹叶椒（Z．armatum）和刺壳椒（Z．echinocarpum）茎的性状、显微特征、薄层层析和紫外吸收光谱鉴定结果。为两面针在采集、流通及应用提供了参考依据。

1996年广西中药材标准（第二册）收载两面针，检测项目有性状鉴别、显微鉴别（根横切面）1项、理化鉴别1项（试管法检查生物碱）。

1995年版中国药典一部重新收载两面针，定性鉴别项目有性状鉴别、显微鉴别（根横切面）1项、理化鉴别1项（试管法）、薄层鉴别2项（检查氯化两面针碱、乙氧基白屈菜红碱）［7］；2000年版［8］、2005年版［9］、2010年版中国药典均继续收载两面针，定性鉴别除取消专属性不强的理化鉴别（试管法）外，其余项目同1995年版中国药典。

近年来，一些新的定性鉴别方法在两面针药材中推广应用。2006年，颜玉贞，谢培山［10］等率先利用高效液相色谱检测两面针药材中的季铵类生物碱，在以ZORBAX XDB－C8（4.6×150mm，5μm）为色谱柱，流动相为3%冰醋酸－二乙胺－甲－乙腈，柱温20℃，体积流量0.8 mL/min，检测波长250 nm、270 nm的条件下，两面针液相色谱主要由白屈菜红碱（Chelerythrine）、氯化两面针碱（Nitidine chloride）等21个色谱峰以其相对稳定的峰与峰的积分比值所提供的以生物碱为主体的成分分布信息组成，且显示生物碱主要分布于根皮部，地上茎部分生物碱含量很低，为有效地分析和评价两面针的质量通过了实验方法。

刘华钢，冯看［11］等对两面针总生物碱进行高效液相色谱法（HPLC）指纹图谱的研究。采用HPLC梯度洗脱测定了33批两面针总生物碱的指纹图谱，在色谱柱为Ultimate TM XB－C8柱（5μm，4.6 mm×250 mm），流动相为乙腈－水相（0.2%磷酸＋0.2%三乙胺），柱温35℃，检测波长为250 nm的条件下，HPLC指纹图谱标定了24个共有特征峰，指纹图谱精密度较高，24 h稳定性较好，重复性良好，为科学评价及有效控制两面针质量提供可靠方法。

刘华钢，雷欣潮［12］等再次以两面针对照药材和鹅掌楸碱、氯化两面针碱、乙氧基白屈菜红碱、L－芝麻素等4个活性成分为指标，通过高效液相色谱建立了两面针药材特征指纹图谱的质量评价分析方法，并对市场上购买的25批两面针药材进行鉴别分析，结果仅有8批药材质量较好，7批药材为次品，7批为伪品飞龙掌血，剩余3批药材也是两面针伪品，其合格率仅占32%。说明两面针的资源已严重匮乏，市场上流通的两面针药材以次品、伪品居多，且该方法能有效的检测市场流通中两面针药材的质量。另外，秦泽慧，谈英［13］等采用液质联用指纹图谱检测方法，分析了15批广西产两面针药材，为完善其质量评价提供依据。

陈铁寓，彭兴［14，15］等采用傅里叶变换红外光谱法建立了2种两面针定性鉴别的新检测方法。第一种是利用傅里叶变换红外光谱法及二维红外相关光谱法对两面针与单面针进行一维、二维红外光谱特征及其差异研究探讨，发现两面针与单面针的一维红外光谱差别甚小，但通过二阶导数光谱结合二维傅里叶红外光谱的方法可以将两者完全区分开采，且方法快速、廉价、有效，是检测单面针冒充两面针的常用方法。第二种是采用衰减全反射傅立叶变换红外光谱法（ATR－FT－IR）分别对不同产地两面针主根和须根的内、外皮以及木部进行研究，利用不同产地、不同部位的两面针样品地红外光谱特征，可将不同产地、不同部位的两面针样品区分开，是快速、简便的检测方法。

2 含量测定

1995年版中国药典两面针含量测定项目（薄层扫描

法）以氯化两面针碱（C21H18NO4·Cl）为对照品，干燥品以两面针碱（C21H18NO4）计，其含量不得少于0.25%。2000、2005年版药典两面针含量测定项目与1995年版相同，而2010年版药典则将检测方法改为灵敏度高、重现性好、操作简便的高效液相色谱法，，控制指标也改为干燥品以氯化两面针碱（C21H18NO4·Cl）计，且含量不得少于0.13%。

除上述药典收载的含量检测方法及指标控制成分外，许多专家学者对两面针其他活性成分含量测定方法进行了研究探讨。张守尧，周本杰［16］等采用高效液相色谱法（HPLC）测定两面针不同部位中L－芝麻脂素和L－细辛脂素的含量，在色谱柱为HYPERSIL BDS C18，流动相为乙腈：水（50：50），检测波长287nm的条件下，L－芝麻脂素和 L－细辛脂素的平均回收率和相对标准差分别为100.13%、1.61%和101.24%、1.46%，且含量以两面针原根部的最高。

刘绍华，覃青云［17，18］等采用HPLC法对广西十个不同产地的两面针中具有抗肿瘤活性的氯化两面针碱、具有镇痛活性的L－芝麻脂素含量及具有镇痛、抗炎和止血活性的新棒状花椒酰胺含量进行了分析和比较。发现在不同产地两面针中的氯化两面针碱和L－芝麻脂素含量差别都较大，广西百色两面针中的氯化两面针碱和L－芝麻脂素含量均最高，分别为0.467%和0.160%，广西金秀的含量均最低，分别为0.0490%和0.0370%；新棒状花椒酰胺的含量亦差别较大，金秀的含量最高，达0.468%，桂林的含量最低，为0.009%。该研究为两面针在抗肿瘤、镇痛、抗炎和止血等方面的开发利用提供了可靠的科学依据，具有重要应用价值。梁广华，张建浩［19］利用HPLC测定两面针中乙氧基白屈菜红碱和氯化两面针碱的含量，在流动相为1 mmol/L庚烷磺酸钠－乙腈（30∶70），检测波长272 nm的条件下，结果重现性较好。

龙盛京，章伟［20，21］等采用酸性染料比色法及紫外分光光度法测定两面针中总生物碱的含量，为无仪器设备条件的基层单位控制两面针质量提供简便快捷，准确易行的方法。曹一帆，程齐来［22］等运用火焰原子吸收分光光度法和石墨炉法测定两面针样品中Fe、Cu、Zn、Mg、Ca、Pb、Sn的含量发现，两面针中Ca、Fe、Zn的含量较高。

王冬梅［23］等应用电感耦合等离子体原子发射光谱法（ICP－AES）对广西10个不同产地两面针药材中的14种微量元素进行测定。通过硝酸－高氯酸消解体系，有效地彻底消解样品中的有机物，在确定的光谱条件下，各元素加样回收率（n＝6）为90.01%～104.14%，精密度均＜3%，且不同产地两面针药材中的各种微量元素含量差别明显，为两面针微量元素和药效相关性提供实验依据。冯洁［24］等应用电感耦合等离子体原子发射光谱法（ICPAES）和原子荧光光谱法（ASF）测定两面针不同入药部位中的20种金属元素含量，结果发现，Na在根中的含量比茎、叶高，而K、Ca、Mn和Mg在叶中的含量较根、茎高，20种元素回收率为93.9%～102.2%，RSDS均小于2.0%。为研究扩大中药两面针药用植物资源及综合开发利用提供科学依据。

3 结语

综上所述，两面针定性鉴别主要是性状、显微、薄层三大常规项目，高效液相指纹图谱和红外光谱法应也用于定性鉴别。两面针含量测定广泛采用高效液相色谱法，HPLC具有灵敏度、准确度和精密度高的特点，是目前分析研究中最为常用的方法，2010年版中国药典做到了与时俱进。而原子吸收分光光度法、电感耦合等离子体原子发射光谱法（ICP－AES）和原子荧光光谱法（ASF）则主要测定药材中的金属元素。特别值得关注的是，近几年来采用高效液相色谱建立两面针药材特征指纹图谱，将指纹图谱中标示物质群特征峰与药效结果对应起来，阐明了指纹图谱特征与药效之间的相互关系，该方法提供了中药质量评价新模式，也为合理建立两面针的质量评价体系提供了参考。另外，两面针的野生资源严重匮乏，人工栽培品种和野生品种功能是否等效，尚未有对农药残留的报道，需要加强对两面针中农药残留、重金属的含量控制，从源头控制其残留量，以保证药材质量。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典（2010年版一部）［S］.北京：中国医药科技出版社，2010：157－158.

［2］广西壮族自治区卫生厅.广西中药材第二册［S］.1996：105－107.

［3］刘延成，程风杰，蒙衍强，等.两面针化学成分、药理活性及抗肿瘤机制研究进展［J］.天然产物研究与开发，2012，24（2）：550－555.

［4］中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典（1977年版一部）［S］.北京：人民卫生出版社出版，1977：287－288.

［5］温尚开.两面针及其伪品的比较鉴别［J］.时珍国药研究，1991，2（1）：20－22.

［6］赖茂祥，饶伟源，严克俭，等.两面针茎及其伪品的生药鉴别［J］.中药材，1994，17（3）：18－20.

［7］中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典（1995年版一部）［S］.广东：广东科技出版社出版，1995：144－145.

［8］国家药典委员会.中华人民共和国药典（2000年版一部）［S］.北京：化学工业出版社，2000：133－134.

［9］国家药典委员会.中华人民共和国药典（2005年版一部）［S］.北京：化学工业出版社，2005：116－117.

［10］颜玉贞，谢培山，田润涛，等.两面针药材HPLC色谱指纹图谱分析与质量评价［J］.中药新药与临床药理，2006，17（6）：440－443.

［11］刘华钢，冯看，叶月华，等.两面针总生物碱HPLC指纹图谱研究［J］.中国中医药信息杂志，2011，18（9）：62－64.

［12］刘华钢，雷欣潮，冯看，等.两面针HPLC特征指纹图谱的研究［J］.中国中药杂志，2011，36（23）：3293－3297.