食品检测试剂盒评价

黄晓蓉

（福建出入境检验检疫局 福建福州 350001）

1 前言

商品化食品检测试剂盒（简称食品检测试剂盒）是指对一种分析方法的主要或关键组成进行了商品化包装并可供销售的检测体系，用以确定一种或多种食品基体中目标分析物的存在或含量[1]。与传统实验室操作相比，采用试剂盒进行样品处理甚至直接获得检测结果的分析模式，最主要的优点和特点就是对基本分析操作技能要求降低，整个检测过程可以实现标准化、流水化工作，简单、快速、方便，适用于现场操作，在很短的时间里可以得到检测结果。

由于试剂盒方法被广泛认可及在某些领域的不可替代性，越来越多的机构投入到试剂盒的研发与生产中。这种状况既存在良性健康发展，也存在着不可忽视的隐患，特别是试剂盒的研发与生产成本较之大型实验设备而言低很多，投入产出值较高，使得一些水平低、规模小、管理差的企业也纷纷加入生产行列，市场良莠不齐。因此，检测试剂盒的质量倍受关注，规范试剂盒的生产和使用，确保检测试剂盒符合实验室相关质量管理与质量控制要求，已经成为需要考虑的重点。本文对国内外食品检测试剂盒的评价制度进行了比较研究，为建立符合我国实际情况的检测试剂盒评价制度打下基础。

2 国内外对食品检测试剂盒的管理与评价

2.1 食品检测试剂盒的定义与分类

20世纪70年代以来，为满足分析实验室对大批量样品的检测需求，生产者开发了一系列商品化方法并投放市场。与传统的方法相比，这些方法更简单、便捷且更经济，被称为“可选分析方法”（alternative analysis methods）、快速分析方法以及更为普遍称呼的“试剂盒”。1994年，美国公职分析家学会（AOAC）发布了“检测试剂盒定义与改进指南”（Test kits definitions and modifications guideline）[2]，为试剂盒的开发研制及不断改进提供一个持续合理的框架，同时发布评估方法以保证试剂盒改进后的有效性。在这份指南中，AOAC将商品化试剂盒定义为对一种分析方法的主要或关键组成进行了商品化包装并可供销售的检测体系，以确定一种或多种食物基体中目标分析物的存在或含量。

目前，已用于食品检测的试剂盒种类繁多，尚无严格规范的分类方法。按试剂盒来源可分成国产试剂盒和进口试剂盒；按检测原理可分成酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒、免疫组化试剂盒、化学发光试剂盒、聚合酶链式反应（PCR）试剂盒；按检测对象可分成化学类物质检测试剂盒和生物类物质检测试剂盒等等。就分析对象来说，已商业化的试剂盒可检测的食品成分主要包括转基因、过敏原、食品添加剂以及如维生素、氨基酸等营养素，可检测的有毒有害物质种类主要有农药残留、兽药残留、重金属、微生物、生物毒素与激素等。

2.2 食品检测试剂盒评价制度

目前国际上已开展了对试剂盒注册及评价确认工作，这些方式归纳起来有两类：一类为官方注册（备案），如中国、美国、加拿大、菲律宾等；一类为有影响力的机构及组织的评价确认，如美国AOAC、法国标准协会集团（AFNOR）以及北欧食品安全分析委员会（NordVal）、荷兰MicroVal等。

2.2.1 官方注册（备案）

从现有资料来看，官方对于试剂盒的管理主要以官方注册的方式进行。对于注册要求各国不一，归纳起来有两类。

一类仅要求生产企业向管理部门申报，以获得注册号，如加拿大。加拿大卫生部（Health Canada）下辖的控制物品办公室（Office of Controlled Substances）针对用于医疗、实验室、工业、教育或研究目的试剂盒提出了管理要求，需要生产企业向其申请试剂盒的注册号。这项管理措施的法律依据为《受控制药品和物质法》（Controlled Drugs and Substances Act，CDSA）及其条例、《食品与药品法》（Food and Drugs Act）及其条例。试剂盒注册号仅仅表明该试剂盒用于医疗、实验室、工业、教育或研究目的，不涉及安全、公共健康或危害。这种管理模式并非对试剂盒的质量或技术性能进行评价，仅当试剂盒中含有加拿大法律CDSA中所包括的受控制物质时，该试剂盒才需要向卫生部申请注册号。

还有一类在申请注册号过程中，需要由官方指定的实验室对试剂盒性能指标进行验证。我国农业部对用于兽药残留检测的酶联免疫试剂盒有相关的备案管理要求，农业部进行此项管理的依据为《兽药管理条例》和《关于加强兽药残留检测试剂(盒)管理的通知》(农办医[2005]3号)，申请备案时需按“关于发布《兽药残留酶联免疫试剂（盒）备案审查技术资料要求》和《兽药残留酶联免疫试剂（盒）备案参考评判标准》的通知”（农医发[2005]17号文）的要求，向农业部提供备案的技术资料。该文分为两部分，前者为对试剂盒产品本身的要求，后者为方法学技术指标要求。这种管理模式对于规范兽药残留检测用的酶联免疫试剂盒起到了积极作用。

法律依据充分、管理对象明确是官方管理最大特点。政府职能部门在一定的法律框架及职责范围内对检测试剂盒进行相应管理，对于促进检测试剂盒的质量提升，保障检测结果的准确性具有积极意义。

2.2.2 机构或组织的评价

自20世纪80年代末起，鉴于试剂盒市场的良好发展趋势及业界对于试剂盒质量评判的需求，世界各知名机构或组织陆续开展了对试剂盒的评价活动，评价结果也被承认。机构或组织的评价活动可归为两大类：一类是对采用试剂盒建立的检测方法进行验证，包括美国AOAC和北欧NordVal；另一类采用产品认证方式，代表有法国AFNOR和荷兰MicroVal。

成立于1884年的美国AOAC于1989年开始对食品检测试剂盒进行评价，并建立了适用试剂盒的性能测试方法程序（Performance Tested Methods Program，PTM），与公定方法程序（Official Methods Program, OMA）和同行确认方法程序（Peer-Verified Methods Program，PVM）共同构成了目前AOAC的方法验证体系统。PTM由AOAC下属的研究所（Research Institute，RI）负责实施。根据“AOAC-RI PTM的政策和程序”（AOAC Research Institute PERFORMANCE TESTED METHODSSM PROGRAM POLICIES and PROCEDURES）[3]，获得AOAC RI标志的试剂盒分为抗菌素、生物化学、食物过敏原、微生物、毒素五大类，AOAC将在其出版的《实验室内部管理（ILM）》杂志上公告通过验证的试剂盒，同时选择性地公布试剂盒的部分性能数据，而被验证的试剂盒方法和评估报告将完整地刊登在AOAC期刊上。截止至2010年1月的数据显示，已有146种试剂盒获得AOAC RI标志，其中微生物检测用试剂盒占绝大部分，共有118种。

出于食品安全考虑，微生物学分析方法作为必要的监控手段，越来越频繁地用于食品生产的每一阶段。传统的检测方法耗时费力，为满足需求，近30年来开发并商业化了许多快速、简便、经济的检测方法，这些方法被称为“可选分析方法”，试剂盒也属于这一范畴。大量商品化试剂盒用于微生物学分析市场，这些试剂盒的用户需要确保这些试剂盒的性能指标符合使用需求。因此，应企业及管理需要，1989年法国AFNOR建立了用于工业食品行业的商品化试剂盒的确认体系，该体系最初被称为“可选分析方法的AFNOR确认”（AFNOR validation of alternative analysis methods）。作为国际上最负盛名的第三方认证机构之一，AFNOR认证服务分为人员认证、体系认证、服务认证和产品认证四大部分，试剂盒认证属于产品认证范畴。AFNOR对试剂盒的认证包括两部分：一是对方法验证依据EN ISO 16140[4]规定的程序进行；二是独立审核人对生产试剂盒企业的质量体系现场审查。由于AFNOR认证符合欧盟条例（EC）2073/2005[5]中第5款所描述的三点基本要求，即依据EN ISO 16140要求制订验证方案，由第三方认证组织进行，同时采用欧盟条例（EC）2073/2005中附录Ⅰ作为方法验证的参考方法。由于（EC）2073/2005是针对食品中微生物要求的欧盟条例，因此，获得AFNOR认证意味着自动获得了欧洲的承认。至2010年，已有95种试剂盒获得AFNOR认证。

MicroVal组织由荷兰联合利华研究实验室始创，现拥有21个成员。2007年3月，MicroVal颁发了首份试剂盒认证证书。MicroVal认证程序基于以下三个核心原则：①开展可选方法和参考方法的方法比较研究，以及可选方法和参考方法实验室间方法性能研究；②试剂盒生产商必须符合EN 29002标准（ISO 9002）框架下的质量保证要求；③定期审查已获认证证书的可选方法。基于EN ISO 16140，MicroVal制定了“MicroVal规定和认证方案”，用于指导检测食品、动物饲料、饮料（水质分析除外）和食品生产环境中的微生物的可选方法（包括试剂盒）的验证工作。另外，MicroVal还要求试剂盒的生产必须获得EN ISO 13485，否则需接受MicroVal 认证机构审查员的现场审查。

2007年3月，NordVal归属于北欧食品分析委员会(Nordic Committee on Food Analysis，NMKL)管理。NordVal/NMKL制定了“可选微生物学方法确认方案（protocol for the validation of alternative microbiological methods）”[6]用于指导食品、水、动物粪便、饲料、设备和加工场地样品、环境样品中的微生物分析方法的确认工作。不论定性还是定量方法的方法确认都分为两个阶段：由专业实验室对检测试剂盒与传统检测方法进行实验室内的比较性研究；由专业实验室组织开展对检测试剂盒的实验室间协同研究。

由此可见，AOAC与NordVal对检测试剂盒的评价仅从方法性能指标角度进行考察，对试剂盒所表现出的性能指标的验证。而AFNOR与MicroVal的认证还包括了对试剂盒生产企业的质量体系审查，涉及产品的认证范畴。

3 总结

食品检测试剂盒有着极大的市场需求，发展前景广阔。2009年，在食品伙伴网（www.foodmate.net）上进行的一次针对食品检测试剂盒使用情况的网络调查显示，操作简单、方便快捷是试剂盒公认的最大优点，并有超过66%的实验室已使用了检测试剂盒替代或部分替代传统方法。然而，稳定性不佳，采用试剂盒的检测结果重现性较差也是反映较多的问题。因此，建立科学规范的评价体系，加强对商品化试剂盒的管理，对于保证检验结果的准确性具有积极作用。

［1］SN/T 2775-2011 商品化食品检测试剂盒评价方法[S].

［2］AOAC Research Institute Test Kit Definitions and Modifications Guideline. http://www.aoac.org/testkits/Appendix_18_Definitions_&_Modification%20Guideline.pdf.

［3］AOAC Research Institute PERFORMANCE TESTED METHODSSM PROGRAM POLICIES and PROCEDURES. http://www.aoac.org/testkits/Policies%20&%20Procedures.pdf.

［4］ISO 16140：2003 Microbiology of food and animal feeding stuffs- Protocol for the validation of alternative methods. http://www.iso.org/iso/iso_catalogue/catalogue_tc/catalogue_detail.htm?csnumber=30158

［5］Commission Regulation(EC)No 2073/2005[S]. http://eur-lex.europa.eu/LexUriServ/LexUriServ.do?uri=CONSLEG:2005R2073:20071227:EN:PDF

［6］Protocol for the validation of alternative microbiological methods[S].http://www.nmkl.org/NordVal/NordValprotocolmarch2009.pdf