奶牛性控冻精低剂量人工授精技术规范

田万强，田成山，林 清，胡建宏，昝林森＊

1 范围

本标准规定了奶牛性控冻精低剂量深部人工授精技术规范涉及的术语（定义）、繁殖技术指标、发情鉴定、人工授精、妊娠检查、系谱档案管理等要求。

本标准适用于奶牛养殖场（户）、配种站（点）性控冷冻精液人工授精操作。

2 说明

1）本规范是在常规冻精人工授精技术规程的基础上制定而成。

2）本规范是对大庆田丰生物科技有限公司生产的奶牛性控冻精采用人工授精技术输入奶牛卵泡发育侧子宫角深部、子宫体分叉部、子宫颈内口前端不同部位受胎效果分析验证后形成的技术规范。

3）本规范旨在为了提高奶牛性控冻精受胎率而对人工授精操作人员制定的规范性文件。

3 术语和定义

3.1 性控冷冻精液

利用流式细胞分离仪获取X或Y精子经过超低温冷冻后保存在液氮（－196℃）中授精能按照人们需要控制性别的非常规冷冻精液。

3.2 性控冻精特征

1）性控冻精活力高于常规冷冻精液。

2）性控冻精细管分装精子的密度240万个／支，常规冻精细管分装精子密度2 500万个／支，性控冻精密度显著低于非性控冻精。

3）奶牛含X染色体性控冷冻精液的存活时间相对于常规冷冻精液要短。

4）生产成本较高，价格比较昂贵。

3.3 性控冷冻精液解冻

性控冷冻精液使用前通过一定手段使冷冻精子重新恢复活力的处理方法。

3.4 性控冷冻精液低剂量深部人工授精

性控冻精细管分装精子的密度显著低于非性控冻精（性控：230万个／0.25mL，非性控：2 500万个／0.25mL），使得有效精子数量偏少，分离时在外界暴露时间较长，含X染色体性控冷冻精液的存活时间相对于常规冷冻精液要短，为了减少宫颈黏液吸附精子数，保证足够的精子达到输卵管壶腹部以利于卵子受精，要求在优势卵泡侧子宫角基部输精受胎率较高，此种授精方法称为低剂量深部授精。

3.5 发情鉴定

通过外观观察结合直肠把握检查法确定授配母牛是否发情及其发情程度的检查方法。

3.6 情期受胎率

同期受胎母牛数占同期输精情期数的百分比。

4 基本要求

4.1 人员要求

1）人工授精人员必须具有家畜繁殖基础理论知识，熟练掌握细管冻精人工授精的各个主要技术环节。

2）配种员应注意个人卫生，输精之前要剪短指甲并磨光，头戴卫生帽，身穿专用服装，脚着消毒胶靴，手套专用软质塑料或胶质手套。

3）对使用的输精器具应及时清洗、消毒，并保存在干净的密封容器内，以免污染。

4）配种员在输精操作时应注意安全，以防止发情母牛对人员的突然伤害。

4.2 授配母牛要求

1）品种：中、高产奶牛及其后代。

2）年龄和胎次：初配母牛和三胎内母牛。

3）体状：膘情适中，健康无传染性疾病和繁殖疾病，繁殖机能正常。

4）牛体卫生：用新洁尔灭液消毒牛外阴部，然后用凉开水清洗牛外阴部，用卫生纸擦干消毒液，牛体干净。

4.3 输精器械要求

4.3.1 输精器械设备 输精枪、外套、一次性塑膜手套、液氮罐、冰箱、干燥箱、消毒锅、酒精灯、电炉、普通显微鏡、专用剪刀、保温瓶、25cm镊子、拷瓷盆、子宫洗涤器、试管、滴管、烧杯、天平、洗涤器、污物桶、玻璃瓶、玻璃棒、药品柜、档案柜。

4.3.2 输精辅助材料 消毒用酒精、消毒液、药品、注射器、温度计；纱布、药棉、滤纸、毛巾、肥皂、卫生纸、载玻片、盖玻片、瓶刷。

4.4 输精器械设备材料清洗消毒

4.4.1 玻璃器皿 使用前用水浸泡和洗涤，若有污物用加洗涤剂的温水或重铬酸钾洗液浸泡数小时后，用水洗净晾干，放置在电热鼓风干燥箱160℃烘烤1h，冷却备用。

4.4.2 金属器械 金属器械洗净后，放置于电热鼓风干燥箱120℃烘烤1h，自然冷却待用。

4.4.3 橡胶、塑料制品 输精用的橡胶、塑料品高压蒸汽消毒灭菌，或用浓度为75%的酒精消毒。

5 输精

5.1 观察发情

1）每天早晚对牛群进行至少半小时的观察，记录接受爬跨的牛号。

2）对观察发情的牛只查阅繁殖记录，剔除产后时间不合适、正在进行繁殖疾病治疗和其它不适合进行配种的牛只。

3）对适合冷配的空怀牛只，在10～12h后进行直肠检查，首先判断子宫的大小和质地，然后检查两侧卵巢是否正常，是否有排卵卵泡，如果有排卵卵泡，根据卵泡的大小和质地推测排卵时间，判断在8 h之内排卵并适合进行冷配的牛只立即用性控冻精配种，并做好包括子宫、卵巢情况和发情时间及输精时间和部位等内容的详细记录。

5.2 输精操作要点

5.2.1 输精时间 使用性控冻精配种时，配种时间控制在排卵前6h之内或排卵后4h之内；使用性控冻精时，尽量缩短解冻与输精之间的时间，最好是解冻一支输一支。

5.2.2 解冻方法 从液氮罐中取冻精时，提漏中的冻精不可超过液氮罐口，如果10s内还没有将冻精取出，应将冻精立刻沉入液氮中然后再提到罐口重复操作；单支冻精取出后在空气中先停留5s左右，然后放入38～40℃清水中10s中后取出用干脱脂棉擦干后剪断封口，装入输精器准备输精。

5.2.3 输精部位 输精部位选择在排卵侧子宫角基部（上1／3处）或者是采用子宫体后拉法，也就是说，如果能够准确判断出排卵侧并能使输精器顺利的放到排卵侧子宫角基部就采用子宫角深部输精，否则，采用子宫体输精器后拉发法输精，保证两侧子宫角都能有精子进入和受精。

5.2.4 输精量 每个情期输入一支性控冻精（0.25 mL／支，有效精子数200万个以上）。

6 跟踪观察

1）对于已经参加配种的牛只，在8h之内进行第二次直肠检查卵泡侧；如果已经确认排卵，做好配种记录；没有排卵的参配牛只采取补救措施。

2）配种后在下个情期继续观察是否有发情表现，如果受配母牛连续两个情期以上没有发情，在配种60d后，直肠检查确定是否妊娠；对于没有妊娠的母牛采取补救措施。

7 补救

1）在冷配8h之内进行第二次直肠检查卵泡侧，对于没有排卵的参配牛只，在推断了排卵时间后要继续适时输精，并根据具体情况结合外源激素的使用。

2）参配母牛在配种后的第一或第二情期观察到了明显的发情表现，在确认发情后要及时进行重复冷配，冷配时如果发现发情黏液不干净或其它繁殖疾病，要停止冷配并采取相应的治疗措施；如果对排卵时间把握不准确，就采用常规冻精进行复配。

8 配种记录

1）每次输精完毕，繁育员及时填写配种记录。

2）记录内容包括母牛号、年龄、体况、胎次、发情时间、产犊间隔、与配公牛号、输精时间、繁育员等。