禽流感（H5N1亚型）灭活疫苗不同剂量免疫对海兰褐蛋鸡抗体效价的影响

魏 军，孙容非，王建明

（甘肃省庄浪县畜牧兽医局，744600）

为探讨政府采购专用疫苗—禽流感灭活疫苗免疫剂量对效价的影响，为科学防疫提供依据，2012年秋结合秋季强制免疫工作，笔者在庄浪县域内选取了2个规模场和2个乡镇的健康海兰褐蛋鸡作为试验动物，进行了重组禽流感病毒灭活疫苗(H5N1亚型.Re～5株)不同免疫剂量的免疫效价对比试验，现将试验情况总结如下。

1 试验材料

1.1 疫苗 系政府采购动物常规防疫禽流感专用疫苗——重组禽流感病毒灭活疫苗(H5N1亚型.Re～5株)，生产厂家：乾元浩生物有限公司郑州生物药厂，批号：2012008，规格：250ml/瓶，生产日期：20120629，2～8℃避光保存，无冻结。

1.2 试验动物 田建民鸡场、康鑫蛋鸡有限公司、南坪乡、朱店镇各选5周龄未免疫禽流感疫苗的健康海兰褐蛋鸡100羽。

1.3 试验试剂 禽流感H5亚型血凝抑制抗原（兰州兽研所生产，批号：20120510），阴性血清（兰州兽研所生产，批号：20120406），阳性血清（兰州兽研所生产，批号：20120406）。阿氏液、1%红细胞悬液、PBS液等均按照《GB/T18936-2003高致病性禽流感诊断技术》规定的标准配制。

1.4 采血器械 5ml一次性针管400余支，真空采血管400个，酒精棉球若干。

1.5 注射器 使用上海市万佳动物保健器械有限公司生产的兽医用可调连续注射器，在使用前进行严格消毒。

1.6 试验器械 无菌离心管、一次性96孔微量反应板、微量移液器、吸头、量筒、烧杯、加液槽、振荡器等。

2 试验方法

选取2个养殖场和2个乡镇的5周龄以上健康海兰褐蛋鸡为试验动物，每个场及乡镇的鸡均分为1～4组，每个组100羽鸡，各场及乡镇的试验鸡均分别进行同群饲养。各场的免疫剂量1～4组均分别为0.3mL／羽、0.4mL／羽、0.5mL／羽和0.8mL／羽。疫苗注射后不改变饲养环境，经21d后采血，根据《GB/T18936-2003高致病性禽流感诊断技术》规定的标准要求进行抗体效价检测。

根据《GB/T18936-2003高致病性禽流感诊断技术》规定的标准,以完全抑制4单位抗原的血清最高稀释倍数作为HI滴度，只有阴性对照孔血清滴度不大于2log2，阳性对照孔血清滴度误差不超过1个滴度，试验有效。HI效价≤3 log2(1：8)判定为HI试验阴性；HI效价=4log2(1：16)判为可疑，需重复试验；HI效价5log2，(1：32)判为HI试验阳性。免疫群体其抗体效价阳性率在70%以上的判群体免疫抗体效价合格。

3 试验结果

田建民鸡场1～4试验组免疫鸡抗体效价阳性率分别为16%、55%、80%、90%；康鑫蛋鸡有限公司1～4试验组免疫鸡抗体效价阳性率分别15%、54%、78%、88%；乡镇农户散养户1～4试验组免疫鸡的抗体效价阳性率分别为南坪乡12%、51%、82%、91%和朱店镇11%、52%、83%、92%。根据试验标准要求,免疫群体其抗体效价阳性率在70%以上的判群体免疫抗体效价合格。本次试验中免疫剂量为0.5mL／羽和0.8ml/羽的试验组均达到免疫合格要求，其余2组均未达标。

4 分析讨论

4.1 本试验所选择的试验动物为各养殖场的同群鸡，各场在免疫前后都分别进行同群饲养。这样就使同一养殖场鸡的饲养水平、饲养环境均相同，仅免疫剂量不同，结果免疫抗体效价合格率差异较大，高的达到92%，而低的仅11%，这说明疫苗免疫剂量对同群试验鸡免疫抗体效价的产生影响最大。

4.2 本试验中，剂量为0.5ml／羽的试验组抗体效价阳性率平均为80.75%，最低78%，完全达到试验标准中群体免疫阳性率达70%以上的免疫合格要求，而疫苗使用说明中的参考剂量要求也是5周龄以上的注射O.5mL／羽。以上充分表明，只要严格按照使用说明的剂量进行免疫，就能达到免疫效果的要求，剂量过小产生的抗体效价阳性率不能达标，过大又造成不必要的浪费。

4.3 因注射禽流感疫苗时使用的是连续注射器，就要求对注射器严格清洗和消毒，特别是注射器注射剂量要严格根据鸡的大小适时调校准确，以保证免疫效果。

4.4 试验中，0.8ml/羽试验组免疫效价相对较高，合格率均达70%以上，达到了免疫合格标准。但是否与免疫抑制临界值有关，有待进一步探讨。

[1]刘秀娟，高莉莉，高娟.产蛋鸡免疫失败的原因及对策[J].中国畜牧兽医文摘,2012,6:13-14.

[2]王健，刘华芳.谈谈商品代蛋鸡的免疫[J].农业技术与装备,2011,7:16-17.