藏药婆婆纳药材薄层鉴别方法学研究

2012-12-23王云红张小梅严倩茹杨荣平

天然产物研究与开发 2012年1期

王云红，张小梅，林芳，胡荣，严倩茹，杨荣平*

1重庆市中药研究院重庆市中药资源学重点实验室，重庆400065;2 成都中医药大学，成都611137

婆婆纳是常用的藏药之一，藏药名冬那端赤，为玄参科婆婆纳属植物长果婆婆纳Veronica ciliata Fiseh 的干燥全草。具有清热，愈疮，生肌，止血的功效，主要用于治疗疮疖，创伤，炎症。婆婆纳被收载在1995 年版《藏药部颁》中，但由于婆婆纳的标准仅有性状描述，没有鉴别，不能很好的控制婆婆纳的质量。为能有效控制婆婆纳药材的质量，本研究首次对婆婆纳的薄层鉴别进行了系统研究，建立了婆婆纳对照药材薄层鉴别的方法，为婆婆纳药材质量控制提供科学依据。

近年来，婆婆纳的研究较少，其有效成分尚不清楚，特征成分不明确，选择单一成分的对照品进行薄层鉴别没有依据。因而，本研究通过建立对照药材的方法对婆婆纳药材进行薄层定性研究。

1 仪器与试药

1.1 仪器

BP121S 电子天平(万分之一，北京赛多利斯科学仪器有限公司);BUG25-12 超声波清洗机(220W，50KHZ，必能信超声(上海)有限公司);数显恒温水浴锅(上海梅香仪器有限公司);高效硅胶G 薄层板，规格:100 ×100 mm、100 ×200 mm，厚度:0.20～0.25 mm，批号:20101102，青岛海洋化工分厂;薄层色谱展开缸(双槽，规格:100 ×200 mm、200 ×200 mm，上海信谊仪器厂)。

1.2 试药及药材

所用试剂均为分析纯(重庆川东(集团)有限公司化学试剂厂);

婆婆纳对照药材为西藏自治区食品药品检验所提供的基地生产对口药材;

婆婆纳药材样品为西藏自治区食品药品检验所提供的不同批次的样品。

2 方法与结果

2.1 婆婆纳对照药材薄层条件的建立

2.1.1 提取溶媒的考察

取婆婆纳对照药材3 g(5 份)，精密称定，置于锥形瓶中，分别加乙醚、乙酸乙酯、三氯甲烷、95%乙醇、甲醇40 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加相应的提取液2 mL 使溶解，作为供试品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010 年版一部附录IV B)试验，分别吸取供试品溶液5 μL，点于同一硅胶G 薄层板上，以环己烷-丙酮(7 ︰3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在110℃加热至斑点显色清晰，并置于日光下检视。结果表明:以甲醇为溶媒提取的供试品斑点较少，反映药材的信息量少;95%乙醇为溶媒提取的样品斑点较乙醚等提取样品的斑点少，且95%乙醇提取的样品粘度较大，点样过程有困难;乙醚、乙酸乙酯、三氯甲烷为溶媒提取的样品斑点信息相似，但乙酸乙酯相对其他两种有机试剂毒性较小。且乙酸乙酯提取的样品展开后斑点较多，斑点清晰，分离度好，且乙酸乙酯毒性较小，拟采用乙酸乙酯作为提取溶媒。

2.1.2 显色剂的考察

取2.1.1 项下的5 个供试品溶液，照薄层色谱法试验，分别吸取供试品溶液5 μL，点于同一硅胶G 薄层板上，以环己烷-丙酮(7 ︰3)为展开剂，三张薄层板同时展开，取出，晾干，分别喷以10%硫酸乙醇溶液、5%香草醛硫酸溶液、磷钼酸溶液，在110 ℃加热至斑点显色清晰，于日光下检视，薄层色谱图见图1。结果表明:在日光下检视，10%硫酸乙醇溶液显色后斑点较清晰，颜色鲜明;5%香草醛硫酸溶液显色后斑点颜色虽然鲜明，但是显示出的斑点较少;磷钼酸溶液显色后斑点虽然清晰，但是不能反映出斑点的颜色。因而，采用10%硫酸乙醇溶液为显色剂。

图1 婆婆纳对照药材薄层鉴别显色剂的考察Fig.1 chromogenic reagents test of Veronica cciliata Fiseh

2.1.3 提取方法的考察

取婆婆纳对照药材3 g(2 份)，精密称定，置于锥形瓶中，加乙酸乙酯40 mL，分别超声处理30 分钟和加热回流处理30 分钟，滤过，滤液蒸干，残渣各加乙酸乙酯2 mL 使溶解，作为供试品溶液。照薄层色谱法试验，取不同提取方法提取的供试品溶液5 μL，点于同一硅胶G 薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯(7 ︰3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，置110 ℃烘箱中显色至斑点清晰，于日光下检视。结果超声和加热回流两种处理方法的结果差别不大。因此，选用操作简便的超声处理为供试品的提取方法。

2.1.4 提取时间的考察

取婆婆纳对照药材3 g，精密称定，置于锥形瓶内，加乙酸乙酯40 mL，分别超声处理10、20、30、40 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯2 mL 使溶解，作为供试品溶液。照薄层色谱法试验，取不同提取时间提取的供试品溶液5 μL，点于同一硅胶G 薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯(7∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，置110 ℃烘箱中显色至斑点清晰，于日光下检视。结果超声处理30和40 min 的样品斑点较超声处理10 和20 min 的样品斑点多，且较之更清晰。因而，选用超声处理30 min 为样品提取的时间。

2.1.5 展开剂选择

对照药材溶液的制备:取本品粉末3 g，精密称定，置于锥形瓶内，加乙酸乙酯40 mL，分别超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯2 mL 使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取对照药材溶液6 μL，点于硅胶G 板上，分别以(1)环己烷-丙酮(6∶4)，(2)环己烷-乙酸乙酯(7∶3)，为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，置110 ℃烘箱中加热至斑点显色清晰，日光下检视，结果:展开剂(1)(2)所展开的对照药材色谱斑点分离度均较好，但展开剂(1)展开后的供试品分离效果较好，斑点清晰，颜色鲜艳，因而确定环己烷-丙酮(6∶4)为展开剂。

2.1.6 点样量考察

吸取2.1.5 项下制备的对照药材溶液各4、6、8、10、12 μL 分别点于同一硅胶G 薄层板上，以环己烷-丙酮(6 ∶4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，结果:点样量为6 μL 时斑点已清晰。因此，确定对照药材溶液点样量为6 μL。

2.1.7 方法耐用性实验

预平衡和预饱和方式的考察:照薄层色谱法，吸取2.1.5 项下制备的对照药材溶液6 μL，点于硅胶G 薄层板上，以环己烷-丙酮(6∶4)为展开剂，不进行预平衡和预饱和操作，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，置110 ℃烘箱中显色至斑点清晰，于日光下检视。结果未经预平衡和预饱和操作得到的薄层色谱图分离度较好，斑点清晰，无明显的边缘效应。因此，本薄层鉴别不需预平衡和预饱和。

展开温度和湿度的考察:照薄层色谱法，吸取上述已制备的对照药材溶液6 μL，点于硅胶G 薄层板上，以环己烷-丙酮(6∶4)为展开剂，在湿度为77%时分别于20、40 ℃环境下及在温度为20 ℃时分别于湿度为77%、32%环境下展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，置110 ℃烘箱中显色至斑点清晰，于日光下检视，结果，温度、湿度对分离效果无显著影响。因此认为温度和湿度对其没有影响，在通常条件下操作即可。

展开距离的考察:照薄层色谱法，吸取上述已制备的对照药材溶液6 μL，点于硅胶G 薄层板上，以环己烷-丙酮(6∶4)为展开剂，展开，展开距离分别为8 cm 和11 cm，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，置110 ℃烘箱中显色至斑点清晰，于日光下检视。结果:展开距离为8 cm 时对照药材已能较好的分离，但展距为11 cm 时效果更好。因此，确定展距在11 cm 左右。

不同薄层板的考察:照薄层色谱法，吸取上述已制备的对照药材溶液6 μL，分别点于预制硅胶G 薄层板(青岛海洋化工厂分厂)和实验室自制硅胶G薄层板上，以环己烷-丙酮(6∶4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，置110 ℃烘箱中显色至斑点清晰，于日光下检视。结果:青岛海洋化工厂分厂生产的预制板和本实验自制的硅胶G 薄层板，对供试品溶液均能起到很好的分离效果，说明该鉴别方法的耐用性好，但相比之下，预制板分离效果更好。

2.1.8 对照药材薄层色谱图

分别吸取上述已制备的对照药材溶液6 μL，点于同一硅胶G 薄层板上，按照拟定的薄层鉴别的方法，展开，晾干，检视。薄层色谱图见图2。结果，婆婆纳对照药材可被分离出7 个清晰的斑点，做为特征斑点。