子宫脱垂患者子宫主韧带和阴道前壁组织神经丝蛋白的表达及意义

欧阳玲 刘 洁 董 武 周 洋 李 博

子宫脱垂患者子宫主韧带和阴道前壁组织神经丝蛋白的表达及意义

欧阳玲＊刘 洁 董 武1周 洋 李 博

（中国医科大学附属盛京医院妇产科，沈阳110004；1辽宁省人民医院妇产科，沈阳110016）

目的 探讨子宫脱垂（Uterine prolapse，UP）患者子宫主韧带和阴道前壁中神经丝蛋白（Neurofilament protein，NFP）组织的表达及其与子宫脱垂临床因素的关系。方法 应用免疫组织化学S-P法对50例子宫脱垂患者的子宫主韧带和阴道前壁组织中神经丝蛋白表达进行测定，并与10例对照组组织对比，结合子宫脱垂的临床参数进行分析。结果 免疫组化结果显示子宫脱垂患者阴道壁、主韧带组织中神经丝蛋白表达的阳性率为28.0%、32.0%，明显低于对照70.0%、80.0%，Ⅱ度子宫脱垂患者阴道壁、主韧带组织中神经丝蛋白表达阳性表达率明显低于Ⅲ＋Ⅳ度子宫脱垂组（45.45%vs14.29%、50.0%vs17.86%）。结论 子宫脱垂患者子宫主韧带和阴道前壁组织中神经丝蛋白表达下降，并与脱垂程度相关，提示神经丝蛋白可能在子宫脱垂的发生发展中起重要的作用。

子宫脱垂；神经丝蛋白；免疫组织化学

盆腔器官脱垂（pelvic organ prolapse，POP）是严重影响中老年妇女生活质量的一种常见病。目前POP的发病机制尚不完全清楚，神经生理学和病理学研究表明，POP患者存在支配盆底组织的神经损伤［1］。神经丝（neurofilament，NF）蛋白是神经元特异性结构蛋白和细胞骨架的主要成分，神经元的结构及功能很大程度上取决于神经丝蛋白的分布及结构变化［2］，这一成分的分布及结构发生改变都可能引起盆腔组织的神经发生退行性改变，致盆底组织的神经调节异常，组织抗张能力下降，对盆底支撑作用减弱，导致盆底脏器脱垂。本研究通过免疫组织化学染色方法检测50例子宫脱垂与10例非子宫脱垂患者的主韧带及阴道前壁组织中神经丝蛋白的表达，探讨神经丝蛋白表达异常与子宫脱垂发生发展的关系。

材料和方法

1.研究对象

50例子宫脱垂患者的主韧带、膨出阴道前壁组织及10例非脱垂患者的主韧带及阴道前壁组织来自2008年11月至2010年11月间中国医科大学附属盛京医院妇科手术切除的组织。依据1996年国际尿控协会公布的POP-Q分度标准，Ⅱ度22例，Ⅲ度13例，Ⅳ度15例，患者年龄为32-76岁，其中绝经前9例，绝经后41例。另取非脱垂组10例作对照，子宫脱垂组与对照组在年龄、产次及绝经状态等方面差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

2.实验方法

2.1 免疫组织化学染色

神经丝蛋白鼠抗人单克隆抗体（NF-L＋H，产品编号：MAB-0136，克隆号：2F11）购自福州迈新生物技术开发有限公司，二氨基联苯胺（DAB）显色剂及S-P试剂盒购自福州迈新生物技术开发有限公司。运用过氧化物酶（S-P）法行免疫组织化学染色。步骤如下：切片常规脱蜡至水，高温高压进行抗原修复，一抗4℃孵育过夜，DAB染色，苏木素复染。用PBS代替一抗作为阴性对照。

2.2 结果判定

结果判定参照文献［3］，神经丛着色定位于胞浆为阳性表达。评分标准：0，不着色；1，淡黄色染色，NF分布稀疏，神经纤维断裂、碎片状分布稀疏无规则；2，棕黄色染色，NF分布较密集，神经纤维完整；3，棕褐色染色，NF分布密集呈网状。0-1：为神经丝蛋白阴性表达；2-3：为神经丝蛋白阳性表达。

2.3 统计学分析

应用SPSS 13.0统计分析软件，神经丝蛋白表达和POP临床病理特征的关系用卡方检验，P＜0.05为有统计学意义。

结 果

1.神经丝蛋白在阴道前壁组织中的表达阳性呈黄色或棕黄色，阳性表达呈规则密集分布，在神经丛组织中也可见阳性表达。神经丝蛋白在脱垂组呈现不规则碎片状稀疏分布（图1），而在非脱垂组呈规则密集连续分布（图3）。在子宫脱垂组患者阴道前壁组织神经丝蛋白表达水平为28.0%，而在非脱垂组阳性表达水平分别为70.0%。二者有显著性差异（P＝0.011），见表2。

2.神经丝蛋白在子宫主韧带组织中的表达阳性呈黄色或棕黄色（图2），而在非脱垂组呈规则密集连续分布（图4）。在子宫脱垂组患者子宫主韧带组织神经丝蛋白表达水平为32.0%，而在非脱垂组阳性表达水平分别为80.0%。二者有显著性差异（P＝0.005），见表2。

3.统计学分析表明，POP-Q分度（ⅡvsⅢ＋Ⅳ，P＝0.015、0.016）子宫主韧带及阴道前壁组织中神经丝蛋白阳性表达率明显下降，见表2。而神经丝蛋白表达与患者绝经状态（P＝0.837、0.643）及阴道分娩次数（P＝0.368、0.710）不相关，见表2。

表1 脱垂组与非脱垂组患者的临床参数比较Table 1 Co mparison of general conditions in POP and contr ol gr oup

表2 脱垂组与非脱垂组神经丝蛋白的表达与临床参数的关系Table 2 The expression of Neur ofilament pr otein in POP and control gr oup

讨 论

POP是中老年妇女的常见疾病，神经生理学和病理学研究表明，POP的发生与盆底组织的神经结构及功能损伤密切相关。近年来，通过对POP大量的神经电生理研究和病理学观察研究，发现支配盆底肌的体神经损伤和功能障碍是导致盆底肌的支托能力下降促使POP的发生重要原因［4，5］。位于盆腔的神经是内脏感觉神经和自主神经纤维，支配平滑肌和腺体［6］。盆腔的体神经和自主神经的走行和分布有一定的相关性，盆腔筋膜、韧带等盆底支持组织受相应神经的支配，如果神经损伤，则其对应支配的盆底支持组织功能障碍，引起组织抗张能力下降，对盆底支撑作用减弱，导致盆腔脏器脱垂［7］。因此，我们推测POP患者可能不仅有盆底肌肉神经分布的减少，也有盆底筋膜、韧带及阴道黏膜神经分布的减少。神经元是神经的基本结构，而神经丝蛋白是神经元特异性结构蛋白和细胞骨架的主要成分，神经元的结构及功能很大程度上取决于神经丝蛋白的分布及结构变化［2］。有学者研究证明，大鼠中有盆底神经纤维的断裂缺失可引起盆底功能障碍［8］。那么在POP患者盆底支持组织是否也存在相应的神经纤维蛋白表达改变呢？本研究发现，POP患者的主韧带及阴道前壁组织神经丝蛋白的表达较对照组显著减少，且在Ⅲ＋Ⅳ度脱垂POP患者的主韧带及阴道前壁组织中表达明显低于Ⅱ度脱垂组织，差异有统计学意义（P＜0.05）。提示神经丝蛋白表达下降，并与脱垂严重程度密切相关。同时，显微镜观察POP组发现神经纤维断裂、碎片状分布稀疏无规则，说明POP患者盆底组织中神经纤维的减少、断裂、无规则稀疏分布，导致支配的盆底组织的有效神经纤维减少，致盆底组织的神经调节异常，组织抗张能力下降，对盆底支撑作用减弱，进而促进POP的发生发展。

综上所述，我们研究发现POP患者盆底结缔组织神经丝蛋白表达下降，并与POP-Q分度相关，盆底组织中神经丝蛋白含量减少可能导致神经元支配区域组织的神经调节异常，抗张能力下降，支撑盆腔脏器能力下降，从而导致POP的发生。但神经丝蛋白在POP发生发展中的具体机制还不清楚，尚待进一步深入研究。

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图 版 说 明

图1 NFP在POP组阴道前壁中阳性表达SP×400

图2 NFP在POP组主韧带中阳性表达SP×400

图3 NFP在对照组主韧带中阳性表达SP×400

图4 NFP在对照组阴道前壁中阳性表达SP×400

EXPLANATION OF FIGURES

Fig.1 Expressions of NFP in Anterior Vaginal Wall Tissue of pelvic or gan prolapse （i mmunohistochemistr y sp method，400× magnification）.

Fig.2 Expressions of NFP in Cardinal Ligament Tissue of pelvic organ prolapse （immunohistochemistry sp method，400× magnification）.

Fig.3 Expressions of NFP in Anterior Vaginal Wall Tissue of non-POP group（i mmunohistochemistry sp method，400× magnification）.

Fig.4 Expressions of NFP in Cardinal Ligament Tissue of non-POP group （i mmunohistochemistry sp method，400× magnification）.

Expressions and significance of neurofilament in car dinal ligament and anterior vaginal wall tissue of uterine prolapse

Ouyang Ling＊，Liu Jie，Dong Wu1，Zhou Yang，Li Bo
（Depart ment of Obstetrics and Gynecology，Shengjing Hospital，China Medical Universit y，Shenyang 110004；1Depart ment of Obstetrics and Gynecology，The People’s Hospital of Liaoning Province，Shenyang 110016，China）

Objective To investigate t he expression of neur ofilament pr oteins in car dinal ligament and anterior vaginal wall of patients with uterine prolapse（UP），and to examine their relationship with clinicopat hologic feat ures.Methods I mmunohistochemical staining was applied t o deter mine neur ofila ment pr otein expression in 50 cases of uterine prolapse and 10 controls；and t he correlation of neur ofila ment pr otein expression with clinical parameters was also analyzed.Results The positive expression rate of neurofilament pr otein 32.0%and 28.0%respectively in car dinal liga ment and anterior vaginal wall of up，significantly lower than in controls（80.0%and 70.0%respectively，P＜0.05）.Patients with lower neurofilament protein expression had advanced stage of up（Ⅱ versusⅢ＋Ⅳ，P＝0.016，0.015）.Conclusion Neurofilament pr otein expression is decreased in car dinal liga ment and anterior vaginal wall of up（P＜0.05）.Its expression is closely correlated with the stage of up，so it may play an i mportant role in the pathogenesis of up.

Uterine pr olapse；Neur ofila ment protein；Immunohistochemistry

R329

A

10.3870／zgzzhx.2012.02.007

2011-02-10

2011-04-01

辽宁省教育厅科研项目资助（L2010648）；中国医科大学附属盛享医院研究基金（MA04）

欧阳玲，女（1964年），瑶族，主任医师。

＊通讯作者：（To who m correspondence should be addressed）