南京紫金山4种蕨类植物不同部位总黄酮含量比较

马 丽，李银川，孙起梦，刘兴剑，李维林

〔江苏省·中国科学院植物研究所(南京中山植物园)，江苏南京210014〕

蕨类植物现存约12 000种，以热带、亚热带地区分布最广。中国有蕨类植物61科223属约2 600种，其中可供药用的有300余种，以华南及西南地区分布较多［1］。据报道，药用蕨类植物具有舒筋活血、除湿镇痛、清热滑肠、止咳化痰、利尿安神、止血、驱虫、解毒、抗菌、抗癌和抗 HIV 等功效［2－7］，其化学成分主要包含酚类、黄酮类、生物碱类、甾体及三萜类等化合物，其中黄酮类化合物是蕨类植物中广泛存在的一类成分，具有一定的分类学意义，且多具有松弛血管痉挛、抗心肌缺血、降血脂、抗肿瘤、抑菌和保肝等生理活性［8－9］。

南京紫金山共有蕨类植物25科36属79种［10］，资源较丰富。为了明确紫金山药用蕨类植物的资源现状，为其进一步深入开发利用提供实验依据，作者对采自紫金山的2科3属4种蕨类植物地上和地下部分的总黄酮含量进行了分析比较。

1 材料和方法

1.1 材料

供试的4种蕨类植物于2010年4月份采自南京紫金山，分别为凤尾蕨科(Pteridaceae)凤尾蕨属(Pteris L.)种类井栏边草(P.multifida Poir.)、鳞毛蕨科(Dryopteridaceae)鳞毛蕨属(Dryopteris Adanson)种类红盖鳞毛蕨〔D.erythrosora(Eaton)O.Ktze〕和阔鳞鳞毛蕨〔D.championii(Benth.)C.Chr.〕以及贯众属(Cyrtomium Presl)种类贯众(C.fortunei J.Smith)，原植物经江苏省·中国科学院植物研究所孙起梦鉴定。

使用的芦丁标准品(纯度≥98%，生产批号R－100105)购自西安旭煌生物技术有限公司，其他试剂均为AR级。

1.2 方法

1.2.1 标准曲线的绘制 标准曲线绘制参照文献［1］的方法并略有改进。用体积分数70%乙醇配制质量浓度0.1 g·L－1芦丁标准品溶液;分别精密吸取芦丁标准品溶液0.00、0.50、1.00、2.00、4.00 和 5.00 mL，用体积分数 70% 乙醇定容至5.00 mL;分别加入质量体积分数5%的NaNO2溶液0.25 mL，摇匀后静置6 min;加入质量体积分数10%的Al(NO3)3溶液0.325 mL，摇匀后静置6 min;加入质量体积分数4%的NaOH溶液2.00 mL，并用体积分数70%乙醇定容至10.00 mL，摇匀后静置12 min;以体积分数70%乙醇为空白，于波长510 nm处测定吸光值。以芦丁质量浓度为横坐标x、吸光值为纵坐标y拟合得到芦丁标准品的回归方程 y=12.530 0x－0.002 7(R2=0.999 2)，在芦丁质量浓度 0.000 0 ～0.050 0 g·L－1范围内线性关系良好。

1.2.2 样品溶液的制备及总黄酮含量的测定 分别将4种植物的地上和地下部分分开，洗净后于50℃烘干，粉碎;取50 g样品粉末，用400 mL体积分数70%乙醇回流提取3次，每次2 h，合并提取液，过滤并减压蒸干，所得浸膏于50℃真空干燥48 h，用体积分数70%乙醇超声波(功率100 W)处理10 min溶解并配制成 0.1 g·L－1待测样品溶液，用0.45 μm 微孔滤膜过滤后待测。精密吸取1 mL待测样品溶液，按照上述标准曲线测定方法于波长510 mm处测定各样品溶液的吸光值，利用标准曲线计算样品中总黄酮的含量(以质量分数计)。

1.2.3 方法学考察

1.2.3.1 精密度实验 取贯众地上部分的样品溶液，按照上述标准曲线测定方法测定吸光值，连续测定5次，RSD值为0.27%，明显小于0.50%，说明仪器的精密度符合测量要求。

1.2.3.2 重复性实验 精密称取贯众地上部分样品粉末5份，按上述方法制备待测样品溶液并按照标准曲线测定方法测定吸光值，RSD值为2.20%，显示本方法的重现性较好。

1.2.3.3 稳定性实验 分别取芦丁标准品溶液1 mL和贯众地上部分待测样品溶液 1 mL，分别于 0、10、30、60、90、120、150和180 min按照上述标准曲线测定方法测定吸光值。在0～180 min内标准品溶液和待测样品溶液的RSD值分别为0.21%和0.60%，表明芦丁标准品溶液和待测样品溶液在3 h内稳定。

1.2.3.4 回收率实验 精密吸取芦丁标准品溶液0.20 mL，精密加入贯众地上部分待测样品溶液2 mL，按上述标准曲线测定方法测定吸光值。回收率为98.21% ～101.90%，平均加标回收率为100.06%，RSD值为1.27%。

2 结果和讨论

同一时期南京紫金山4种蕨类植物地上及地下部分的总黄酮含量见表1。由表1可见:井栏边草的地上及地下部分总黄酮含量均最低，质量分数分别仅为0.31%和0.38%;地下部分的总黄酮含量以贯众为最高，质量分数为2.41%;地上部分的总黄酮含量以阔鳞鳞毛蕨为最高，质量分数为1.05%。4种蕨类植物地下部分的总黄酮含量均高于其地上部分。

研究结果显示:春季采收的红盖鳞毛蕨和贯众地上和地下部分的总黄酮含量差异较大，其中，红盖鳞毛蕨地下部分的总黄酮含量为其地上部分的2.95倍，贯众地下部分总黄酮含量为其地上部分的2.77倍，因此，以这2种蕨类植物春季植株为材料进行总黄酮提取时，以收集地下部分为宜。阔鳞鳞毛蕨的地上和地下部分的总黄酮含量差异不大，其地上部位总黄酮含量在供试的4个种类中最高，因而，若要提取阔鳞鳞毛蕨的总黄酮则可采集其地上部位。井栏边草地上和地下部分的总黄酮含量均比较低。供试4种蕨类植物的总黄酮含量与方云山等［1］的测定结果有一定差异，推测这可能与样品的采收季节以及取样部位不同有关。

表1 南京紫金山4种蕨类植物不同部位总黄酮含量的比较Table 1 Comparison of total flavonoids content in different parts of four fern plants in Zijin Mountain of Nanjing

［1］方云山，杨雪琼，刘劲芸，等.32种云南蕨类植物中的总黄酮测定［J］.云南大学学报:自然科学版，2008，30(4):401－404.

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