五味子乙素抗大鼠肝癌作用机制研究

石军飞 闫超

五味子为木兰科植物五味子(Schisandra)的干燥成熟果实。五味子具有消炎、保护及增强心脏机能、延缓衰老以及抗肿瘤作用。五味子含有挥发油、苯丙素、木质素等成分，目前对其成分研究较多的是五味子多糖、五味子甲素、五味子乙素［1、2］。其中五味子乙素的抗肿瘤作用日益受到学者的重视［3］，但对其作用机制的研究却甚少。

1 材料与方法

1.1 材料 Wistar大鼠，雌雄各半，体重200～210 g，购于北京大学实验动物科学部。五味子乙素购于中国药品生物制品检定所。环磷酰胺(CTX)来源于江苏恒瑞医药股份有限公司，批号20120320。大鼠肝癌细胞购于上海拜力生物科技有限公司。

1.2 方法 50只大鼠随机分为五组，即空白对照组(A)、模型组(B)、环磷酰胺组(C)、五味子乙素组(D)、五味子乙素-环磷酰胺组(E)。将大鼠肝癌细胞复苏并培养3 d，注入传代大鼠右前肢皮下，7 d后取出实体瘤，选择生长旺盛的组织，切成1 mm×1 mm×1 mm的小块备用。将B、C、D、E四组大鼠用2%戊巴比妥麻醉并消毒，于腹正中切口，使肝脏暴露，在其脏面刺一深约5 mm的斜洞，置入切碎的肿瘤块，止血后关腹［4］。

在造模成功14 d后，A组和B组给予生理盐水10 ml，C组给予环磷酰胺20 mg/kg，D组给予五味子乙素20 mg/kg，E组给予环磷酰胺和五味子乙素(1∶1)混合液20 mg/kg。所有实验大鼠连续给药14 d，称量各鼠体重后将其处死，开腹取瘤并称瘤重，计算肿瘤生长抑制率(TIR)，TIR=(对照组平均瘤重-实验组平均瘤重)/对照组平均瘤重。

吸取大鼠心肌血3 ml，置入EP管中，3000r/min离心15 min，采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定大鼠血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)的浓度［5］。

2 结果

2.1 大鼠活动表现及体重、瘤重变化 所有大鼠在实验前均活泼好动，饮食正常，B、C、D、E四组在接种瘤块3 d后，饮食量开始下降，少动，反应迟缓。给药后，大鼠开始骚动不安，皮毛失去光泽，并有脱毛现象，饮食未有明显增加，多拥挤生活，个别大鼠有呕吐现象。模型组大鼠在21 d后很少进食，触之不动。

表1 各组大鼠体重、瘤重变化情况

由于外界对空白对照组大鼠干扰因素较少，且没有病痛折磨，所以空白对照组体重明显高于其他四组，C、D、E组给予抗癌药后，肿瘤生长受到抑制，瘤重小于模型组，但从药物疗效看，环磷酰胺和五味子乙素无显著性差别，也有可能是收样本量少的影响。

2.2 TNF-α水平比较 对五组实验大鼠血清TNF-α水平进行测定，测定结果如下表2。

表2 各组大鼠TNF-α水平比较

B、C、D、E组 TNF-α 水平与 A 组比较 P ＜0.05，具有统计学意义。通过表2可以看出，大鼠在接种肿瘤后，TNF-α水平明显升高，而药物组TNF-α水平也高于空白对照组，但与模型组相比，TNF-α水平有所下降，可能与药物抑制肿瘤细胞生长有关，但环磷酰胺组与五味子乙素组显著性无差别。

3 讨论

五味子乙素(Schisandrin B)属木脂素类，是五味子中抗肿瘤的主要有效成分，由于受实验条件所限，样本量较少，主要采用疗效对比的方法对其抗肿瘤作用进行研究，发现其与抗癌药环磷酰胺无显著性差异，进一步验证了五味子乙素具有较好的抗肿瘤作用。有研究表明，在肿瘤组织中，氧自由基发生脂质过氧化反应增强，自由基产生增多，而自由基又可与蛋白质交联，影响肿瘤细胞的增殖和分裂，而五味子乙素具很强的抗氧化和清除自由基作用［6、7］。另据报道，其抗肿瘤可通过免疫增强作用，抑制肿瘤细胞增殖、诱导分化，诱导细胞凋亡，直接杀伤癌细胞等多途径、多环节的产生作用［8］。在本研究中，其对肿瘤细胞坏死因子(TNF-α)水平的影响，也间接地抑制了肿瘤细胞的增殖。对E组大鼠而言，同时给予环磷酰胺和五味子乙素后，瘤重要比单独给予其中一种药物略轻，抑瘤率比其他两组稍高，可能是五味子乙素抑制了肿瘤化疗药物耐药性的产生［9］。所以，当五味子乙素与其他抗癌药合用时抗癌效果更佳。

五味子乙素目前对其研究报道较少，为了开发和寻找疗效好、毒副作用小的抗肿瘤药物，相信学者们会对其越来越重视，对其作用机制、合理剂量以及毒副作用等的研究也会更加完善，为其单方制剂的开发奠定良好基础。

［1］任佳丽，李林.五味子抗肿瘤活性成分及作用机制研究进展.中国药理学通报，2012，28(1):140-142.

［2］Yu J，Liu PX，Long W，et al.Experimental study on isolation and purification of total lignans from Schisandra Chinensis and theantitumor activity in vitro .China Pharmacist，2009，12(12):1718-1719.

［3］吴海星，侯晓节.五味子乙素抗肿瘤的多种作用机制.吉林医药学院学报，2012，4(33):107-110.

［4］曾承，王珊.对活体状态下大鼠肝癌模型早期诊断的研究.重庆医科大学学报，2010，04:18-20.

［5］Kondo W，Lago EA，et al.Effect of anti-TNF-α on peritoneal endometrial implants of rats.Rev Col Bras Cir，2011，38(4):266-73.

［6］Zhu S，Wang Yl.Protective effect of schisandrin B against cyclosporine A-induced nephrotoxicity in vitro and in vivo.Am J Chin Med，2012，40(3):551-566.

［7］Luo X，Shi YM.Schilancitrilactones A-C:three unique nortriterpenoids from Schisandralancifolia.OrgLett，2012，14(5):1286-1289.

［8］Bartoli A，Chouraqui G.Collective domino approach toward the core of molecules isolated from the genus Schisandra.Org Lett，2012，14(1):122-125.

［9］Hwang D，Shin SY.A compound isolated from Schisandra chinensis induces apoptosis.Bioorg Med Chem Lett，2011，21(20):6054-6057.