骨痹汤对膝骨关节炎患者滑液中MMP－13、IL－1、TNF－α、TIMP－1的影响

侯亚平 陈太金

(1湖南省老年医院中西医结合科，长沙市马王堆路1号，410016;2湖南省老年医院检验科)

骨关节炎(Osteoarthritis，OA)的发病机制至今未完全探明，但近年的研究提示基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinases，MMPs)、白介素 －1(IL －1)、肿瘤坏死因子－α(TNF－α)等软骨损伤因子在OA的发病中起到主要作用。而组织型金属蛋白酶抑制剂(Tissue Inhibitor Metalloproteinases，TIMPs)等对 MMPS 的活性起重要的调节作用，对于关节退变有保护性作用［1］。中药治疗OA在我国应用非常普遍，本研究旨在探讨自拟“骨痹汤”对OA上述细胞因子的影响，以初步了解该方的临床疗效和作用机理。

1 对象与方法

1.1 研究对象 诊断标准采用美国风湿病协会1995年修订的标准［2］。所有病例均来自于我院门诊及住院确诊为原发性膝骨关节炎(KOA)的患者共90例，其中男性53例，69膝;女性37例，50膝;年龄55～65(平均61.2)岁;左膝48例，右膝71例;病程最长者25年，最短者2年，平均6年。90例均有不同程度的关节肿胀、疼痛、跛行，蹲起或上、下楼梯时受限或疼痛加重。X线照片检查均有不同程度的髌骨上下缘或关节边缘唇样改变，骨赘形成，胫骨髁间棘突或变尖，部分患者关节间隙变窄。排除对象:继发性KOA，需服用镇痛药者，近期坚持服他汀类药物者。

1.2 研究方法

1.2.1 分组与给药方法 按随机数字表法将患者随机分为3组，骨痹汤治疗组30例41膝;仙灵骨葆治疗组30例38膝;对照组30例40膝。骨痹汤治疗组煎服自拟汤剂(威灵仙、伸筋草、独活、蜈蚣、怀牛膝、当归、五加皮、鹿衔草等13味)，日1剂;仙灵骨葆治疗组每次服用仙灵骨葆胶囊3片，每日两次;对照组服用硫酸氨基葡萄糖胶囊0.5g/次，每日3次。所有患者均连续观察8周，3组间的性别、年龄及病情分布差异无统计学意义(P＜0.05)(表1)。

1.2.2 标本的采集与保存 患者关节液的采集:分别于治疗前、治疗后8周关节穿刺抽取关节腔内积液，将其离心后取上清液2mL分装于 Eppendorf管中，－20℃低温冰箱保存待测。

1.2.3 MMP－13、IL－1、TNF－α、TIMP－1的测定采用美国R＆D公司提供的酶联免疫吸附试剂盒。采用双抗体夹心ELISA法进行测定。在已预包被抗MMP－13、IL－1、TNF－α、TIMP－1单抗的酶标板内加入标准品(倍比稀释6个梯度)和待测关节液样品，再与HRP标记二抗结合，经彻底洗涤后加底物TMB显色，采用雷杜RT－6000酶标仪于450nm测定吸光度值。以标准品浓度对数为横坐标，以吸光度值为纵坐标，去除空白对照组吸光度值，绘制标准曲线并计算相应的回归方程。

表1 骨痹汤治疗组、仙灵骨葆治疗组和对照组一般资料比较

2 结果

本试验从2011年1月至2012年6月共90例患者入组，随访至少8周，无失访病例。随访结束后所有患者关节肿胀、疼痛、跛行等临床症状均明显改善，生活质量较治疗前提高。

2.1 3组患者治疗前后关节液内MMP－13、IL－1、TNF－α、TIMP－1水平比较 与治疗前比较，各组患者治疗8周后关节液中 MMP－13、IL－1、TNF－α均明显降低(P＜0.05);TIMP－1水平较治疗前明显升高(P＜0.05)(表2)。

2.2 骨痹汤治疗组与仙灵骨葆治疗组、常规治疗组疗效比较 治疗8周后与治疗前关节液中MMP－13、IL－1、TNF－α、TIMP－1含量的差值反映治疗效果。骨痹汤组与仙灵骨葆治疗组、对照组疗效比较，骨痹汤治疗组关节液中MMP－13、IL－1、TNF－α下降幅度较其余2组大(P＜0.05)，TIMP－1水平升高显著高于仙灵骨葆治疗组和对照组(P＜0.05)(表3)。

表2 各组患者治疗前后时间关节液中MMP－13、IL－1、TNF－α、TIMP－1测定值

3 讨论

骨关节炎属中医骨痹范畴［3］，多发于中老年人群，临床表现以反复关节疼痛，关节活动受限为主，极少数发展为关节畸形。临床上的各种治疗方法均不能达到治愈骨关节炎的目标，都是以消除或缓解关节疼痛等症状，阻止和延缓疾病的进展，保护关节功能，改善患者生活质量为目标［4］。其中有两个治疗关键点一是尽快止痛;二是改善或阻止病情进展。

表3 各组患者治疗8周后与治疗前关节液中MMP－13、IL－1、TNF－α、TIMP－1含量的差值(μg/L)

骨痹汤由威灵仙、伸筋草、独活、红花、鸡血藤等药组成，着重活血通络、蠲痹止痛;怀牛膝、鹿衔草、五加皮等药补肾、强筋壮骨以改善病情发展。临床应用疗效很好。本实验研究显示“骨痹汤”与治疗前比较能明显降低MMP－13、IL－1、TNF－α(P ＜0.05)，并且显著升高TIMP－1(P＜0.05)，同时这两方面改善的作用好于对照组与仙灵骨葆治疗组(P＜0.05)，说明骨痹汤对于OA的病变有可靠的治疗作用。其短期疗效好于仙灵骨葆，提示只顾及补肾对于OA患者止痛与改善症状以达到预期治疗目标是有局限性的。我们对于OA的中医病机认识在思考本虚的同时更要注重标实。

骨痹汤可能通过降低关节炎液中MMP－13、IL－1、TNF－α水平，提高TIMP－1水平起到保护关节软骨的作用。骨痹汤治疗KOA短期疗效较仙灵骨葆和硫酸氨基葡萄糖好。但是骨痹汤治疗OA的远期疗效及其它方面的作用机理有待更深入的研究。

［1］杜国辉，贺艳丽，陈建英，等.骨关节炎早期诊断的生化指标［J］.中国生化药物杂志，2009，30(3):209 －211.

［2］美国风湿协会.骨关节炎诊断标准1995年修订［J］.中华风湿病学杂志，2010，14(6):417.

［3］国家中医药管理局.中医病证诊断疗效标准［S］.南京:南京大学出版社，1994:48.

［4］中华医学会风湿病学会.骨关节炎及诊断治疗指南［J］.中华风湿病学杂志，2010，14(6):418.