宫颈人乳头瘤病毒感染快速检测方法及其临床意义

颜 敏 (湖北医药学院附属人民医院检验科，湖北 十堰 442000)

宫颈病变患者生殖道内人类乳头状病毒(HPV)检出率很高〔1〕。HPV是一类具有较强传播能力的病毒，可以通过性接触，还可以垂直传播。HPV高危型基因的感染若在人体内较长时间存在会引发宫颈癌变，在患者身体状况不佳以及生理周期〔2〕、妊娠等免疫力下降时生殖器HPV感染概率会增加，若妊娠妇女感染HPV还会通过母体传播给婴儿引起先天性尖锐湿疣或乳头瘤病等相关疾病〔3〕，故对于HPV的检测至关重要。本文通过对十堰市体检妇女进行宫颈检查及HPV筛查，分析HPV感染与宫颈病变的相关性。

1 资料与方法

1.1 研究对象 选择2007年5月～2011年9月十堰市各大医院妇科门诊就诊的患者2 000例作为研究对象。

1.2 仪器及试剂 采用美国ABI公司生产的全自动荧光PCR仪器ABI 7000进行检测。DNA试剂盒均由中山大学达安基因股份有限公司生产。采用HPV分型DNA杂交技术。

1.3 HPV检测方法〔4～6〕①样本处理：将标本置于生理盐水转移至1.5 ml离心管离心5 min，取沉淀物加50 μl DNA提取物，100℃加热10 min，离心5 min取上清液备用。②PCR基因扩增：PCR 反应体积 25 μl，上清液 5 μl，50℃ 下 15 min，95℃10 min后循环35次，延伸到5 min，72℃进行PCR反应。③严格按照试剂盒上操作说明进行PCR产物的杂交及显色。

1.4 统计学方法 应用SPSS18.0统计软件进行分析，计量资料以s表示，采用t检验;计数资料采用率表示，进行χ2检验;等级计量资料采用非参数检验(Z检验)。

2 结果

2.1 病毒检出率 2 000例受检妇女中发生HPV感染663例，其阳性率为33.2%。感染者中宫颈光滑以及轻度糜烂的患者有132例(19.9%)，中重度糜烂531例(80.1%)。

2.2 不同危险程度基因型宫颈病变程度分析 PCR方法检出包括 HPV16，HPV18等在内的 13类高危基因型 562例(84.8%);包括 HPV11等在内的4种低危基因型81例(12.2%);另外，还有包括HPVCP8304等在内的3种常见基因亚型20例(3.0%)。见表1。

表1 不同危险程度基因型宫颈病变程度(%)

2.3 HPV感染与年龄的相关性 HPV感染发病高峰在26～33岁，且此年龄段的HPV检出率与其他组比较具有明显差异性(χ2=132.525，P=0.001)，50岁以上感染率最低。见表2。

表2 不同年龄段HPV感染情况(n)

3 讨论

宫颈癌近年来高发，在女性生殖系统恶性肿瘤的首位〔7〕。但宫颈癌前病变会经历较长时间，所以它的检出较难，通常都是癌症中晚期才发现，大大降低了患者的5年有效生存率〔8〕。近年来通过大量研究表明宫颈癌的发生与HPV的感染具有相关性〔9〕，且认为通过检测HPV可以增加宫颈癌变的检出率。HPV是一种可以在人及动物体内广泛存在的环状DNA病毒，是一种可以发生特异性感染的小型病毒，可以特异性地感染人类皮肤、黏膜，并引起良性肿瘤以及生殖器官皮肤黏膜组织的病变。通常尖锐湿疣及其他黏膜上的乳头状瘤皆是由HPV引发的。HPV的直径约50～55 mm，主要依靠宿主细胞进行繁殖。在100多种亚型中，发现能从感染的生殖道组织中分离的基因型有30种之多〔10〕。

HPV的感染与年龄具有相关性，魏颖颖等〔11〕研究显示HPV的感染在26～28岁是个高峰，而后随围绝经的出现成为另一个高峰。本研究认为对30岁以上妇女做HPV的检查对宫颈癌早期筛查具有更重要的意义。HPV的发生与感染与早年性生活次数、性伴侣、性行为等均具有密切关系。所以针对与20～50岁妇女进行HPV感染检查，可以更及时地筛查出宫颈病变，减少宫颈癌变的可能，并及时诊治。本研究说明宫颈癌的发生与基因型有关，其中HPV-16亚型趋势最为显著。随感染率上升，宫颈病变级别也在显著升高。故在临床中一定要注意高危型HPV基因的存在，它的持续感染可能是导致宫颈癌的直接因素。

另外，HPV的感染情况在不同地区、不同受检人群中具有显著差异，且目前亚太地区常见检出基因型为HPV-16。最新报道发现HPV-16发生的概率为57.5%，在北美与南非中的发病率为47.7% ～69.5%〔12〕。所以通过在各地开展HPV流行病学调查可以控制宫颈癌的发病率。

此外，还需要注意HPV的多重感染也是增大患者宫颈癌患病危险的重要因素。陈志芳等〔13〕认为，HPV-16基因单纯感染和多重相关感染具有不同的发病危险，HPV的多重感染具有加重宫颈癌变的作用。但通常以HPV-16与HPV-18双重感染占据主导。目前虽然无明显证据证明其交叉作用对疾病发生的作用〔14〕，但在临床诊疗过程中不可忽视其对于HPV感染的促进作用。

综上所述，十堰市HPV感染与宫颈病变严重程度呈正比，高危亚型呈较为明显趋势，所以临床可以通过检测HPV感染病变程度及时发现宫颈病变，做到早发现、早诊断、早治疗。

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11 魏颖颖，李 劼，王 博，等.宫颈重度鳞状上皮内病变和宫颈癌组织中人乳头瘤病毒感染及基因分型的研究〔J〕.实用妇产科杂志，2010;26(7)：507-9.

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13 陈志芳，杜 蓉，韩 英，等.维吾尔族宫颈癌人乳头瘤病毒感染与CD4+CD25+CD127-调节性T细胞的相关性研究〔J〕.实用妇产科杂志，2011;27(6)：439-43.

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