CIP2A在肝癌组织中的表达及其临床意义

麦 聪 唐云强 洪 健 汤凯雯 唐 辉

广州医学院附属肿瘤医院腹外二科，广东广州 510095

CIP2A在肝癌组织中的表达及其临床意义

麦 聪 唐云强 洪 健 汤凯雯 唐 辉

广州医学院附属肿瘤医院腹外二科，广东广州 510095

目的 探讨CIP2A在肝癌组织中表达的临床意义。 方法 选取笔者所在医院2008年7月～2011年8月收治的80例原发性肝癌患者的临床资料，应用RT-PCR法检测肝癌组织、癌周组织及正常肝组织的CIP2A含量，并分析其与肝癌病理特征之间的关系。 结果 在本组80例患者中，肝癌组织CIP2A表达阳性57例，阳性率为71.2%，癌旁组织表达阳性19例，阳性率为23.8%，正常组织中未见CIP2A表达，CIP2A含量与肝癌直径、组织分化及TNM分期有密切相关性。结论 CIP2A在肝癌组织中表达较高，有特异性，与肝癌的病理特征有相关性，可以作为预测肝癌组织诊断、治疗的分子标记物。

肝癌组织；分化程度；CIP2A；临床意义；免疫组化

目前随着我国饮食结构的调整、诊断水平的不断提高，原发性肝癌（primary liver cancer，PLC）在全球的发病率已经升到第3位，并呈逐年上升的趋势，可见肝癌研究的重要性。在目前的诊断中，甲胎蛋白（AFP）是诊断肝癌的重要标准，但是特异性不高[1]，AFP在重症肝炎、脂肪肝等肝脏疾病中均有表达，因此寻求一种诊断标记物及治疗靶点成为研究的热点。蛋白磷脂酶2A（PP2A）的抑癌因子（cancerous inhibitor of protein phosphatase 2A，CIP2A）是近年来被识别的一种癌蛋白，可以抑制PP2A对c-Myc的丝氨酸的脱磷酸化作用[2]，稳定细胞内c-Myc的表达，在人类头颈部、结肠癌、胃癌中均有表达，但是其与肝癌的关系研究较少，本研究回顾性分析80例肝癌患者CIP2A的含量，探讨其在人类肝癌中的生物学意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取笔者所在医院2008年7月～2011年8月收治的80例原发性肝癌患者的临床资料，男57例，女23例；年龄36～72岁，平均（54.4±4.8）岁；所有患者均为手术病理确诊，术前常规检查，未进行放疗、化疗治疗。另收集20例正常肝组织手术患者的肝组织石蜡标本进行对照。

1.2 方法

获取组织标本后-80℃低温保存，免疫组化标本放入甲醛溶液中固定石蜡包埋。主要试剂：CIP2A多克隆抗体，生物素标记的羊抗小鼠二抗由北京中杉金桥生物技术有限公司提供，小牛血清由杭州四季青生物材料有限公司提供，RNAFast200总RNA试剂盒、采用Primer软件设计PCR引物，以β-actin基因表达产物为参照引物。组织标本经甲醛溶液固定，石蜡包埋，对石蜡行4μm切片，柠檬酸加热至95℃，20 min抗原修复，正常非免疫血清封闭30 min，纤维镜下观察成像系统拍照对阳性结果进行分析，染色强度评分：强为3分，中度为2分，弱为1分，0分为阴性。按照Fast200总DNA极速提取试剂盒说明书步骤提取组织中总RNA[3]，溶于无iRNase酶水中，应用PrimeScript反转录试剂盒取1μg总DNA以Oligo dT Orimer为引物，转录合成cDNA，反应条件为94℃预变性5 min，退火30 s，72℃延伸30 s，共进行30个循环，最后72℃延伸5 min，保存产物。CIP2A基因与β-actin比值作为CIP2A的相对表达量。采用Keisuke统计方法，以CIP2A≥0.57记为高转录组，以CIP2A＜0.57记为低转录组。应用RT-PCR法检测肝癌组织、癌周组织及正常肝组织的CIP2A含量，并分析其与肝癌病理特征之间的关系。

1.3 统计学处理

使用SPSS13.0对各项资料进行统计分析，计量资料用（± s）表示，使用t检验，计数资料采用x2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同肝组织CIP2A表达

在本组80例患者中，肝癌组织CIP2A表达阳性（图1）57例，阳性率为71.2%，癌旁组织表达阳性（图2）19例，阳性率为23.8%，正常组织中未见CIP2A表达。见表1。

表1 不同肝组织CIP2A表达

图1 肝癌组织CIP2A表达阳性病理图片

图2 癌旁组织表达阳性病理图片

2.2 不同CIP2A转录水平与肝癌组织病理学对照

高转录组患者瘤体直径大、HBV阳性率高，同时合并肝硬化及门静脉癌栓浸润发生率高，与低转录组患者比较差异显著（P＜0.05），说明CIP2A含量与肝癌直径、组织分化及TNM分期有密切相关性。见表2。

表2 不同CIP2A转录水平与肝癌组织病理学对照

3 讨论

原发性肝癌是消化系统常见的恶性肿瘤之一，流行病学研究表明，肝细胞癌已经成为严重危害人类生命的主要疾病，但是其发病机制尚不明了，其发生、发展是一个涉及多基因的表达过程。CIP2A是近年来被识别的一种癌蛋白，可以抑制PP2A对c-Myc的丝氨酸的脱磷酸化作用，同时c-Myc作为核转录调节因子调节其转录水平的变化，形成一个反馈环路[4]。本研究表明，CIP2A在人肝癌组织中有高表达，肝癌组织的阳性率明显高于癌周组织，在正常肝组织中未见表达，同时CIP2A表达量与癌病理组织学关系密切，提示CIP2A与肝癌的恶性生物学特性相关[5-6]，可能参与肝癌的发展及浸润过程，为进一步研究CIP2A与肝癌的发展，提示其具有调节机制，为肝癌的早期诊断提供了新思路。CIP2A在肝癌组织中表达较高，有特异性，与肝癌的病理特征有相关性，可以作为预测肝癌组织诊断、治疗的分子标记物[7-8]。

[1] 范永卫．hTERT、c-myc、Ki-67在肝癌组织中的表达及意义[J].细胞与分子免疫学杂志，2009，25（4）：338-340．

[2] Vita M，Henriksson M.The Myc oncoprotein as a therapeutic target for human cancer[J].Semin Cancer Biol，2009，16（4）：318-330.

[3] 秦艳茹，李永欣，王立东，等.食管癌和淋巴结转移组织中c-myc，hTERT和c-MET蛋白的表达[J].郑州大学学报（医学版），2010，41（1）：34-36.

[4] 李静，朴云峰，蒋政，等.Survivin基因在人原发性肝癌组织中的表达及其意义 [J].吉林大学学报（医学版），2008，34（3）：495-498.

[5] 游经宏，周凯，黄品助，等. CIP2A在肝细胞癌中的表达及其临床意义[J].中华肝胆外科杂志，2011，17（3）：75-76.

[6] 杨雪，宋涛，杨威，等.CIP2A在肝癌组织中的表达及其临床意义[J].西安交通大学学报（医学版），2011，32（4）：71-72.

[7] 董千泽，王恩华.CIP2A在非小细胞肺癌中过表达并且促进肺癌细胞增殖[C].中华医学会病理学分会2009年学术年会论文汇编，西安：中华医学会病理学分会，2009：321-322．

[8] 李静，朴云峰，蒋政，等.Survivin基因在人原发性肝癌组织中的表达及其意义 [J].吉林大学学报（医学版），2009，34（3）：495-498.

Expression and clinical significance of CIP2A in liver cancer tissue

MAI Cong TANG Yunqiang HONG Jian TANG Kaiwen TANG Hui
Division Ⅱ of Abdominal Surgery,Cancer Hospital Affiliated Guangzhou Medical University,Guangzhou 510095,China

ObjectiveThe clinical significance of CIP2A expressed in liver cancer tissue is discussed in this paper.Methods80 cases with primary liver cancer,receiving a treatment from cancer hospital affiliated to Guangzhou medical university from July 2008 to August 2011,were selected as clinical data of this paper.CIP2A contents of liver cancer tissue,cancerous peripheral tissue and normal liver cancer tissue of these 80 cases were tested with RT-PCR,and also the relationship between CIP2A and liver cancer pathologic features was analyzed.ResultsAmong 80 cases,57 cases(71.2%) had positive CIP2A expression in liver cancer tissue;19 cases (23.8%) had positive CIP2A expression in cancerous peripheral tissue;CIP2A expression was not seen in normal tissue. CIP2A content had a close correlation with liver cancer diameter,tissue differentiation,and TNM staging.ConclusionCIP2A is highly expressed in liver cancer tissue,possesses specificity,and maintains an correlation with liver cancer pathologic features. Therefore,CIP2A can be used as molecular marker for diagnosis and treatment of liver cancer tissue.

Liver cancer tissue;Differentiation degree;CIP2A;Clinical significance;Immunohistochemistry

R735.7

A

2095-0616（2012）11-35-02

2012-03-15）