健脑Ⅰ号对大鼠脑缺血再灌注模型的实验研究

廖磊 刘魁英 李蜀平 刘冬平 刘洋

脑卒中分为缺血性和失血性脑卒中，缺血性脑卒中即广义的脑梗死，是指突然发生的脑组织局部供血动脉血流灌注减少或血流完全中断，停止供血、供氧、供糖等，使该局部脑组织崩解破坏。本文通过用线栓法手术造成大鼠脑缺血再灌注模型来考察健脑Ⅰ号对大鼠脑缺血再灌注的影响。

1 材料

1.1 试剂与药物 健脑Ⅰ号，5 g生药/ml，本所制剂室提供，批号20080910;川芎嗪片，50 mg/片，100片/瓶，北京市燕京药业有限公司，批号20071206;2，3，5-氯化三苯基四氮唑(TTC)，25 g/瓶，上海沪峰生化试剂有限公司专业生产，批号20060826。

1.2 实验动物 SPF级SD大鼠，体重250～300 g，北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号:SCXK 2006-2009号。

1.3 实验仪器和统计软件 BL-2200H电子天平，日本岛津公司。UNIUX-11显微镜，日本。采用SPSS 10.0软件进行统计学处理。

2 方法

对大鼠脑缺血再灌注(线栓法)模型的影响［1，2］将雄性大鼠按体重随机分组:假手术组、模型对照组、阳性对照(川芎嗪片40 mg/kg)组、健脑Ⅰ号1.0、0.5、0.25 g/kg剂量组。分别于术前0.5 h及术后4、8、12 h口服给药。于实验当日给药0.5 h后，腹腔注射10%的水合氯醛溶液(400 mg/kg)进行麻醉，大鼠仰卧位于手术台上，沿颈正中线切开皮肤，分离右侧颈总动脉(CCA)，颈外动脉(ECA)，颈内动脉(ICA)。将ECA结扎，在颈总动脉(CCA)上剪一小口，将一根长4.0cm，直径0.23 mm的圆头硅化尼龙线由此开口插入ICA内约1.8～2.0cm。大脑中动脉阻塞(MCAO)阻断造成缺血2 h后小心抽出尼龙线，实现血流再灌注。阴性对照组进行假手术。于再灌注22 h后进行动物的行为学观察。采用五级评分法(行为完全正常为0分;手术对侧前肢内旋、内收者，为1分;手术对侧抗力下降者，为2分;其行走，围绕手术对侧转圈者，为3分;已无法自主活动者，为4分)，分数越高，说明其神经行为损伤越严重。大鼠缺血2 h，再灌注22 h后，即刻断头取脑，去除嗅束、小脑和低位脑干，将其梗塞侧冠状切成6片，迅速用TTC(2，3，5-氯化三苯基四氮唑)进行染色，正常组织深染呈红色，梗死组织呈白色。用4%中性甲醛固定。将每组脑片排列整齐，拍照保存。应用图象分析系统软件(SPOT3.5软件)处理并统计，求算每片脑面积和梗塞面积，并最终叠加换算成梗塞面积。计算梗塞面积所占大脑半球面积的百分率，即为脑梗死百分率。

3 结果

对大鼠脑缺血再灌注模型的影响各剂量组动物于脑缺血再灌注24 h后，模型对照组行为学评分、梗塞面积百分率与假手术组比较均显著升高(P＜0.01)，模型成立。健脑Ⅰ号1.0、0.5 g/kg组行为学评分、梗塞面积百分率与模型对照组比较均显著降低(P＜0.05、P＜0.01)。表明健脑Ⅰ号1.0、0.5 g/kg剂量能缓解脑缺血再灌注引起的行为改变以及缩小脑梗死面积。结果见表1。

表1 对大鼠脑缺血再灌注的影响(±sD)

表1 对大鼠脑缺血再灌注的影响(±sD)

注:与假手术组相比较△△P＜0.01，△P＜0.05;与模型对照组相比较＊＊P＜0.01，*P＜0.05

组别 剂量g/kg N 梗塞面积百分数(%) 行为学评分(分)假手术组-0.25 9 28.80±8.09 2.32±0.45 10 0 0模型对照组 - 9 37.20±16.90△△ 2.64±0.67△△阳性对照组 0.04 10 9.85±5.50＊＊ 2.13±0.35*健脑Ⅰ号组 1.0 10 11.59±6.49＊＊ 2.09±0.54*健脑Ⅰ号组 0.5 10 14.83±6.85＊＊ 2.15±0.40*健脑Ⅰ号组

4 讨论

大鼠脑缺血再灌注试验，是用MCAO方法造成其供血区域局灶性脑缺血。本试验中，脑缺血再灌注24后，模型对照组动物行为出现异常，动物出现原地转圈、手术对侧抗力下降、手术对侧前肢内旋、内收等现象。脑梗死面积加大与阴性对照组比较有显著差异(P＜0.01)，模型成立。健脑Ⅰ号1.0、0.5 g/kg剂量组动物，同样出现行为改变，但大多数动物仅出现手术对侧抗力下降、手术对侧前肢内旋、内收，没有出现大鼠原地转圈的现象，行为评分与模型对照组比较均明显下降(P＜0.01)。健脑Ⅰ号1.0、0.5 g/kg组动物的脑梗死面积与模型对照组比较均明显缩小(P＜0.01)。

通过本实验，证明健脑Ⅰ号1.0、0.5 g/kg对大鼠脑缺血再灌注有一定保护作用。本次研究结果为下一步的工作提供了的药理学依据，但因中药的药理实验复杂，且动物模型与疾病本身还存在一定的差异，故有待进一步深入研究来了解其作用机理。

［1］徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学.北京:人民卫生出版社，2002:1066-1067.

［2］凌婧，邓文龙，张杰，等.川芎油对脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用.中药药理与临床，2008，24(1):39-41.