愈疡胶囊毒理作用研究

2012-10-22罗伦才季小平张仲林李列平张孝国王利平钟振东

中国中医基础医学杂志 2012年1期

罗伦才，季小平，张仲林，李列平，张孝国，王利平，钟振东

(1.四川凉山州第二人民医院，四川西昌 615000;2.成都医学院，成都 610083;3.四川省人民医院实验动物研究所，成都 610212)

愈疡胶囊系根据我院协定处方研制而成的院内制剂(院内制剂批号川药制字Z20080094)，由山药、蜂蜡等药物并采用特殊炮制和制剂工艺制备而成的纯中药制剂，该制剂具有泄壅滞、逐痰积、消肿毒、排脓腐、生肌健脾等功效。为给临床用药提供安全依据，根据国家新药相关法规和技术规范［1～5］，我们于2010年6月至2011年8月对愈疡胶囊进行了毒理作用研究，现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物昆明种小鼠 56只，体重 18g～22g;SD大鼠120只，体重90g～110g，均雌雄各半(动物合格证号均为 SYXK(川)2008-049号)由成都中医药大学实验动物中心提供。

1.1.2 药物愈疡胶囊细粉，由凉山州第二人民医院制剂室提供(批号20100504)，每1g细粉含有 1.5 g生药。

1.1.3 仪器 KX-21N全自动血液分析仪，由日本东亚Sysmex公司生产;RT-1904C半自动生化仪，由美国Rayto公司生产;Leica-1015切片机，由德国徕卡仪器有限公司生产;TSJ-Q型全自动封闭式组织脱水机、BMJ-Ⅲ型包埋机和HY-Ⅲ型病理组织漂烘仪，均由江苏常州市中威医疗仪器有限公司生产;Motic BA400显微镜，由天津麦克奥迪实业集团有限公司生产。

1.2 方法

1.2.1 小鼠急性毒性试验取合格昆明种小鼠20只，雌雄各半，用改良寇氏法计算 LD和95%的可信区间并测定LD;若无法测定LD则测量最大耐受量，动物禁食不禁水12 h后，用最高的药物浓度(能顺利通过灌胃针头)和动物的最大胃容纳量0.4 mL/10 g，3 次/d 给药，观察 14 d［6］。

1.2.2 大鼠长期毒性试验取90g～110 g大鼠80只，雌雄各半，在动物房适应5 d后，按体重和雌雄随机分为空白对照组(给生理盐水)和用药高、中、低剂量组(分别为 3.6、1.8、0.45 g(kg·d))，每组30只，雌雄各半，分笼饲养，每笼10只。在实验室饲育1周，观察各组动物活动、进食、粪便等情况均无异常后，采用临床给药途径灌胃给药。各剂量组按等容积不同浓度，每100 g体重灌胃1 mL药液，连续13周。每周停药1 d并称重，按体重增减情况调整用药剂量。实验期间，观察动物的行为活动、外观体征、体重、毛发、进食及粪便等情况。末次给药后，每组取20只大鼠，雌雄各半，禁食不禁水12 h，主动脉取血，分别进行红细胞(RBC)、白细胞(WBC)、血红蛋白(HGB)、LPR(淋巴细胞百分率)和凝血酶原时间(PT)等测定;血液离心后取血清进行尿素(UREA)、总胆红素(TBIL)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)等测定;对脏器进行全面肉眼尸检，解剖取心、肝、脾、肺、肾、胸腺、子宫、肾上腺、胃、十二指肠，其中心、肝、脾、肺、肾、胸腺、子宫称取湿重，求出脏器系数，将上述器官用甲醛溶液固定，常规病理切片进行组织学检查。余下的动物停药2周后，按上述方法进行检测，观察有无药物所致的延迟性变化。

1.3 统计学方法

用SPSS 13.0统计软件，组间比较用t检验。

2 结果

2.1 小鼠急性毒性试验

结果发现，愈疡胶囊的最大耐受量(MTD)为42g/kg，按60 kg人计算相当于临床用量的933倍。在观察期内，未发现动物有明显的中毒症状和死亡发生，14 d后体重均有所增长。

2.2 大鼠长期毒性实验

2.2.1 一般观察试验表1显示，动物活泼健康、皮毛光亮、行为活动、外观体征等未见异常，高剂量组大鼠在每次给药后出现粪便溏烂的现象，1 h～3 h后恢复，其余各组粪便性状未见异常。给药13周及停药2周各组大鼠体重均呈增长趋势，与空白对照组比较差异无统计学意义;所有变化均在动物正常范围值内，无明确生物学意义。

2.2.2 脏器检查表2显示，尸检动物各脏器肉眼观察未见病变，称取心、肝、脾、肺、肾、脑、胸腺，肾上腺等脏器湿重，计算出器官系数。并与空白对照组比较，给药13周时，中剂量组的脾降低，停药2周后高剂量组的脑升高而中剂量组的胸腺降低，且差异有显著性(P＜0.01)，其余各给药组器官系数与对照组比较差异均无统计学意义;所有变化均在动物正常范围值内，无明确生物学意义。

2.2.3 病理组织学检查病理切片观察给药13周和停药后2周(恢复期)各给药组的心、肝、脾、肺、肾、脑、胸腺、肾上腺、睾丸、附睾、子宫及卵巢等均未见典型的炎症、增生或萎缩等病理学改变，与对照组比较均未见异常改变;所有变化均在动物正常范围值内，无明确生物学意义。

2.2.4 血常规检查表3、4显示，给药 13周时及停药2周后，愈疡胶囊各剂量组的血常规指标与对照组比较差异均无统计学意义。血生化检查:给药13周时低剂量组GLU降低，停药2周后中剂量组TBIL升高，且差异有显著性(P＜0.O5);其余各剂量组各指标在给药13周时及停药2周后与对照组比较差异无统计学意义;所有变化均在动物正常范围值内，无明确生物学意义。

表1 愈疡胶囊对大鼠体重的影响(珋x±s)

表2 愈疡胶囊对大鼠器官系数的影响(珋x±s)

3 讨论

愈疡胶囊为医院自制制剂，是由山药、蜂蜡等药物组成，采用特殊炮制和制剂工艺制备而成的纯中药制剂，具有泄壅滞、逐痰积、消肿毒、排脓腐、生肌健脾等功效，临床应用10余年来，证明其对乳腺增生有显著疗效。药效学试验也表明，愈疡胶囊能通过调节大鼠体内的激素分泌水平，减弱雌激素和孕激素在乳腺的生物学效应而明显抑制和治疗大鼠的乳腺增生［7］。

愈疡胶囊临床采用口服给药途径，以最高药物浓度(能顺利通过灌胃针头)和动物的最大胃容纳量0.4mL/10 g，3次/d给药，连续观察14 d未见死亡。急性毒性试验表明，愈疡胶囊的24h最大耐受量为42g/kg，按人临床日用量2.7g/60kg计算，相当于成人临床用量的933倍。

本试验以高、中、低3个剂量(按人临床日用量2.7g/60kg计算，高中低剂量分别相当于人用量的80、40和10倍)连续给大鼠灌胃90d，进行长期毒性实验。通过观察其进食、体重、外观体征和行为活动、粪便性状等一般状况，血常规、肝、肾功能和心、肝、脾、肺、肾、脑、肾上腺、胸腺等脏器系数及病理学组织检查，与对照组比较均未见异常，提示愈疡胶囊对上述器官无病理性损害。就体重而言，给药l3周时与空白组比较，各剂量组动物的体重有所下降，但均无统计学意义(P＞0.05);停药2周后各剂量组体重均比空白组低，中剂量组有显著差异(P＜0.05)。就脏器系数而言，除高剂量组胸腺在停药2周后降低且有显著性差异，其余脏器就血常规指标而言，与空白组比较各组在给药13周及停药2周后，各组各指标变化均无差异。就血生化指标而言，除低剂量组血糖浓度降低、低剂量组总胆红素含量降低且有显著性差异外(P＜0.05)，其余各组各指标变化无差异。组织病理检测结果显示，各组各脏器均无异常病理变化。以上所有变化均在动物正常范围值内，无明确生物学意义。综上，在13周给药期间未见明显毒性反应，亦未见延迟毒性反应。