鸭病毒性肝炎(DVH)精制蛋黄抗体的治疗效果试验

，，， ，黄建，

(余姚市禽畜病防治研究所，浙江余姚 315400)

鸭病毒性肝炎(DVH)由鸭甲肝病毒(DHAV)和星状病毒(DAstV)[1]引起的雏鸭急性、高致死性传染病，严重危害养鸭业的发展。

本病主要危害4周龄内的雏鸭，以1周龄左右的雏鸭最为高发[2]。其特点为发病急、病程短、死亡率高，临床表现痉挛、角弓反张等特征性症状，剖检特征性病变主要集中在肝脏(肿大、柔软和出血)，严重者肝脏有刷状出血斑[3]。

浙东地区是我国重要的水禽养殖地区，不仅麻鸭与北京鸭经常爆发DVH，而且番鸭也时有发生，严重危害了养鸭业的正常发展。

近年来，蛋黄抗体制品逐渐受到人们的关注，并逐步应用到禽病防制领域。本试验选择商业化的DVH精制蛋黄抗体进行试验，研究其治疗效果，现报告如下。

1 材料和方法

1.1试验动物 10日龄鸭胚和1日龄雏麻鸭购自余姚市某种鸭场。

1.2病毒 余姚市禽畜病防治研究所实验室分离并鉴定的DHAV。分别为DHNB1、DHNB2、DHNB3、DHNB4和DHNB5。

1.3试剂 DVH精制蛋黄抗体，由河南洛阳某生物工程有限公司生产，批号：(2009)160022148，预防建议用量0.5 mL/羽，治疗建议用量0.7～1.0 mL/羽。

1.4方法

1.4.1分离毒株半数致死量(ELD50)的测定 选用保存的分离毒株接种10日龄鸭胚扩大培养，收集24-96 h死亡胚体和尿囊液混匀匀浆后过滤分装冷冻保存，取其中1份按照《动物病毒学》(第二版)[4]的方法测定ELD50，连续成7个稀释度，每个稀释度接种4枚鸭胚，置37℃温箱孵化，每天照蛋记录死胚数，观察144 h，按Reed和Muench法计算ELD50。

公式：lgELD50=高于50%病毒稀释度对数+距离比例×稀释系数对数

1.4.2鸭胚中和试验 参照《动物免疫学》(第二版)[5]的方法，根据各个分离毒株ELD50测定结果进行稀释，使最终浓度为200 ELD50/0.2 mL，然后与倍比稀释的DVH精制蛋黄抗体等体积混合，37℃作用1 h，每个稀释度接种鸭胚4枚，接种量为0.2 mL/枚。每天观察统计鸭胚死亡情况，连续观察144 h，以终点法计算中和滴度，即能使鸭胚不死亡的DVH精制蛋黄抗体最高稀释倍数为中和滴度[6]。

1.4.3攻毒保护实验 1日龄健康雏鸭90羽,平均分为18组，每组5羽，具体处理操作详见表1。饲养至3日龄时进行攻毒，严格隔离饲养，任其自由采食，攻毒后24 h和48 h按照试验计划注射DVH精制蛋黄抗体，每天观察发病和死亡情况，连续观察1周。

出现精神沉郁和共济失调、痉挛和角弓反张等神经症状的雏鸭，判定为发病；未见神经症状的存活雏鸭判定为被保护。

1.4.4临床推广和应用 根据实验结果，门诊引进普莱柯公司生产的DVH精制蛋黄抗体进行临床推广试验。门诊送检病例解剖诊断为DVH的，给予该产品治疗，建议注射剂量1.0ml/羽，就诊时发病率和死亡率较高的场和曾经发生过DVH的场，建议连续注射2 d，选择部分养殖场1周后回访。

2 试验结果

2.1ELD50测定结果 详见表2。

表1 攻毒保护试验分组情况

表2 DHV分离毒株ELD50测定结果

根据Reed和Muench法，计算获得各个毒株ELD50。结果显示，DHV宁波分离毒株ELD50均较高，最高可达108.5/0.2 mL。

2.2鸭胚中和试验结果 详见表3。

表3 DVH精制蛋黄抗体与各个分离毒株中和试验结果

观察144 h后，根据鸭胚死亡情况计算得DVH精制蛋黄抗体与各个分离毒株的中和滴度。结果显示，DVH精制蛋黄抗体与分离毒株中和效果最高达1∶512，最低1∶64，抗体效价较高。

2.3攻毒保护试验结果 详见表4。

表4 DVH精制蛋黄抗体攻毒保护试验结果

试验雏鸭攻毒后24 h，均出现不同程度的精神沉郁、共济失调和痉挛及角弓反张等症状。

按计划对部分试验鸭通过肌肉或皮下注射0.7 mL和1.0 mL DVH精制蛋黄抗体，结果使用DVH精制蛋黄抗体的试验鸭死亡率明显降低，且神经症状较攻毒不注射抗体制品的试验鸭明显好转和轻微。其中1.0 mL剂量组对雏鸭的保护率最高达100%，最低为80%，0.7 mL剂量组对雏鸭的保护率介于60%和100%之间，1.0 mL剂量对雏鸭的保护效果明显高于0.7 mL剂量组。

攻毒不注射抗体制品组的试验鸭死亡率60%～100%(即保护率0%～40%)。

生理盐水对照组、1.0 mL抗体剂量组和0.7 mL抗体剂量组的试验鸭无发病现象。

2.4临床推广应用结果 详见图1、图2。

根据余姚市禽畜病防治研究所家禽门诊统计结果显示，2010年1月至2011年8月，该市每月均有数量不等的雏鸭发生病毒性肝炎。其中2010年发病鸭共220 260羽，2011年，共85 090羽，临床推广使用DVH精制蛋黄抗体50万mL。

回访结果显示，使用DVH精制蛋黄抗体后能明显减少DVH发病鸭的死亡率。

图1 2010年鸭肝炎发病情况

图2 2011年鸭肝炎发病情况

3 讨论

3.1鸭肝炎病毒研究情况 鸭肝炎病毒，是DVH的病原，按照血清交叉中和关系曾分为3个血清型，分别为Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型[7]。目前将其分为鸭甲肝病毒和鸭星状病毒[8]，其中鸭甲肝病毒隶属于小RNA病毒科禽肝病毒属，分别对应血清Ⅰ型、“台湾新型”[9]和“韩国新型”[10]；鸭星状病毒隶属于星状病毒科禽星状病毒属，对应传统的血清Ⅱ型和Ⅲ型[7]。不同基因型的病毒，其基因差异较大[11]，不同血清型的毒株之间亦无交叉保护性，给该病的预防和治疗带来了较大难度。

目前，市场上DVH的治疗抗体制品繁多，本试验从临床采集发病鸭的肝脏分离宁波地区的流行毒株，通过中和试验和攻毒保护试验筛选出适用于本地的抗体制品，为有效预防和治疗DVH提供了科学参考数据。

3.2DVH的预防 目前主要通过加强饲养管理(即从消灭传染源、切断传播途径和保护易感动物)、给予全价饲料，增强雏鸭体质以达到预防目的[12]。对于DVH高发鸭场和养殖地区，还应做好疫苗免疫接种。

种鸭免疫：一般采用活疫苗免疫产蛋母鸭，开产前2-4周肌内注射鸡胚化弱毒疫苗，雏鸭可通过卵黄获得母源抗体，在早期可有效抵抗鸭肝炎病毒的感染。这是一种目前采用，最方便、有效的预防方法。

雏鸭免疫：对有母源抗体的雏鸭，应在7～10日龄使用弱毒疫苗免疫，每羽皮下接种2～3羽份；对已经注射蛋黄抗体的雏鸭，应在注射后7 d再进行疫苗注射。对无母源抗体的雏鸭，应在出壳后1～3 d(最好在出壳后24 h内)进行疫苗免疫接种[13]。

另外，可采用DVH精制蛋黄抗体注射，使雏鸭获得被动免疫能力[13]。DVH在生产中广泛存在，由于生产中雏鸭DVH母源抗体较低且不均匀，所以在雏鸭出壳当日或尽早注射补充抗体是有效预防本病的方法。

普莱柯DVH精制蛋黄抗体建议使用剂量为0.5～1.0 mL/羽。本试验结果表明，1.0 mL/羽剂量能更好的保护发病雏鸭，因此建议在临床中预防建议剂量为0.5 mL/羽；发病鸭群则建议使用1.0 mL/羽剂量，采用肌内或颈背皮下注射进行治疗。如果鸭场曾经发病或发病率和死亡率较高，则建议连续注射2次，以确保治疗效果。

使用DVH精制蛋黄抗体预防和治疗DVH的同时，还应加强饲养管理，在饲料中添加电解多维，降低饲料中粗蛋白含量，提供适宜的保温条件，充足饮水，有条件者可给予黄芪多糖饮水，避免各种应激反应。

3.3蛋黄抗体在家禽生产中的应用 蛋黄抗体是蛋中的免疫球蛋白，具有良好的稳定性。据报道，蛋黄抗体在4℃储存5-10年抗体活性均未发生明显的改变，在室温下保存半年仍具有良好的活性。这给蛋黄抗体的生产和应用提供了良好的前提条件[14]。

研究表明，蛋黄抗体在治疗沙门氏菌、弯曲杆菌、坏死性肠炎、大肠杆菌病、传染性法氏囊病和鸡新城疫等均具有良好效果。

近20年来，特异性蛋黄抗体在动物疾病预防中的作用已广为所知，但在家禽生产中实现商业化应用的规模仍有待提高。目前所知蛋黄抗体是治疗病毒性疾病、抵御细菌耐药性、替代抗生素的最佳产品。因此，在家禽生产中研制、推广和应用蛋黄抗体具有广阔的前景。

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