金钱草对草酸钙结石小鼠红、白细胞数的影响

李 静，贺绍君，赵书景，魏 鑫

（安徽科技学院 动物科学学院，安徽 凤阳 233100）

金钱草对草酸钙结石小鼠红、白细胞数的影响

李 静，贺绍君，赵书景，魏 鑫

（安徽科技学院 动物科学学院，安徽 凤阳 233100）

研究金钱草对草酸钙结石模型小鼠的红、白细胞数目的影响.方法：30只小鼠按体重相近原则分为3组，Ⅰ组作为对照组小鼠自由饮用自来水，Ⅱ、Ⅲ组作为试验组小鼠自由饮用主要由1%氯化铵和1%乙二醇配制成的成石液，每组小鼠每日灌服药液0.5mL，Ⅰ、Ⅱ组小鼠灌服生理盐水，Ⅲ组小鼠灌服金钱草水提取液.28天灌服结束后，选取每组小鼠，乙醚吸入麻醉，立即眶后静脉采血，血样放入加了抗凝剂的样品管.采集的血样用于红细胞计数、白细胞计数和白细胞分类计数.结果：与试验Ⅲ组小鼠白细胞数目和嗜中性粒细胞所占比例两项指标相比，对照组Ⅰ组白细胞数目少了3211个/μL（P＜0.01），嗜中性粒细胞所占比例增多11%（P＜0.05）；试验Ⅱ组白细胞数目少了2619个/μL（P＜0.01），嗜中性粒细胞所占比例增多17%（P＜0.05）.结论：金钱草能够通过调整小鼠内白细胞的变化来改变机体的免疫力，进而发挥抗结石的作用.

金钱草；小鼠；草酸结石；红细胞；白细胞

随着人们生活节奏不断加快、饮食结构发生变化，结石病的发病率逐年攀升，给人们的健康带来了严重的危害.在结石病的防治方面，目前国内外大部分研究集中在对体内已形成的结石进行处理，促使其排出体外，而对于体内预防结石形成的研究报道较少.金钱草是《中国药典》收录的一味中草药.体外内药理研究表明，金钱草含有多种化学成分，具有利尿和排石作用[1].本研究采用1%乙二醇和1%氯化铵饮水诱导小鼠形成草酸钙结石模型，用金钱草为干预因素进行给药实验，检测小鼠血液红、白细胞的变化，初步探讨金钱草抑制草酸钙结石形成的干预作用，进一步探究其药用价值，为开发防治宠物尿石症的药物提供试验依据，同时也为人类防治泌尿系统结石病提供参考.

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 试验动物

30只实验用昆明小鼠（45日龄），雌雄各半.

1.1.2 试验药品试剂

氯化铵（NH4Cl），分析纯，沪试生产，批号：F20050621；乙二醇（C2H6O2），分析纯，分子量62.07，国药集团化学试剂有限公司生产，批号：T20110608；金钱草，正品，安徽国鑫中药饮片有限公司，批号：20110601；抗凝剂 EDTANa2（10%），浓度为0.01mol/L,分析纯，国药集团化学试剂有限公司生产，批号：T20090303；瑞氏染粉、甲醛、NaCl.

1.1.3 试验饲料

实验鼠颗粒饲料，安徽长临河医药科技有限公司生产.

1.1.4 试验主要仪器设备

生物显微镜：SA3000型，北京泰克仪器有限公司制造；苏泊尔电磁炉：SDHC04-210x型，浙江苏泊尔股份有限公司；立式压力蒸汽灭菌器：LDZX-50FBS型，上海申安医疗器械厂；小鼠饲养笼具、电子天平、血细胞计数板、载玻片、染色缸、血盖片、染色架、吸管.

1.2 试验方法

1.2.1 动物分组

实验用昆明小鼠30只，雌雄各半，45日龄，适应性饲养1w后，按体重相近原则分为对照组Ⅰ组和试验组Ⅱ、Ⅲ组.每组雌鼠和雄鼠各5只.用染色笔标记，编号.

1.2.2 试验药品配制

成石液：1%氯化铵和1%乙二醇溶液的配制，用电子天平称取氯化铵5g，置于500mL容量瓶中，用10mL移液管吸取5mL的乙二醇于容量瓶中，取200mL的蒸馏水注入容量瓶，摇动容量瓶使氯化铵完全溶解，用蒸馏水定容到500mL.

金钱草水提取物的制备：将500g的金钱草在2.5L水中浸泡2h，进行煎煮.煎煮30min后，过滤；药渣再次加入1.5L水煎煮20min后再次滤过.将两次滤液混合，浓缩至250mL，相当于2g/mL.配制完成后倒入药瓶并标记.

瑞氏染色液：称取瑞氏染粉0.1g置于研钵中.加20mL甲醛研磨，使其溶解，然后将已溶解的染色液倒入洁净的染色玻瓶，剩下未溶解的染料再加入10mL甲醇研磨，并将溶解的染色液合并，之后每次加入10mL甲醇研磨，如此继续操作3次，直至全部染料溶解为止.在室温中保存7日后即可应用.

1.2.3 动物饲养

小鼠饲养在安徽科技学院动物科学学院实验动物房进行，每天固定时间换水换料，固定的时间给药，自动饮水瓶每天固定时间清洗，用具每日固定时间紫外线消毒.使用刨花作为小鼠垫料，垫料在阳光下晒干，经紫外灯照射3～4h，再装入自制的布袋中于121℃高温蒸汽灭菌20min，然后置入干燥箱内60℃鼓风干燥后备用.

试验Ⅱ、Ⅲ组小鼠饮用配制好的成石液，空白对照组Ⅰ组小鼠饮用自来水，小鼠自由饮水，环境温度20～24℃，湿度50～65%，光照12～13h，每周定期称重一次.小鼠给药采用灌胃方式，空白对照组和试验Ⅰ组灌胃生理盐水0.5mL，试验Ⅱ组灌胃金钱草水提取液0.5mL（相当于1g中药），持续4w.试验过程中认真进行小鼠的一般检查，记录小鼠的精神状态、采食、饮水、活动、临床症状、环境温度与湿度及通风等情况.

1.3 样品采集与处理

试验结束时，小鼠禁食不禁水过夜，逐只称重，采血，血样放入加有抗凝剂的样品管，用记号笔标记.采血后的小鼠立即解剖，取心、肝、脾、肺、肾、胸腺、脾脏进行称重，记录下重量和观察情况.采集的血液分别用于红细胞计数、白细胞计数和白细胞分类计数.

1.4 数据统计分析

所有试验数据均采用均数±标准差（M±SD）.spss17.0统计软件进行数据分析，利用单因素方差分析各数据之间的统计学差异，P＜0.05为有统计学意义.

2 结果与分析

2.1 金钱草对草酸钙结石小鼠红、白细胞数，白细胞比例的影响

表1 金钱草对草酸钙结石小鼠红、白细胞数，白细胞比例的影响

由表1可以看出，试验Ⅲ组比试验Ⅱ组白细胞数目多出2619个/μL（P＜0.01）、嗜中性粒细胞所占比例低17%（P＜0.05），比对照组Ⅰ组白细胞数目多出3211个/μL（P＜0.01）、嗜中性粒细胞所占比例低11%（P＜0.05）.分析：金钱草能够刺激草酸钙结石小鼠的白细胞的产生，使白细胞数目增多，嗜中性粒细胞所占比例减少来改变机体的免疫力，进而发挥抗结石的作用.

3 讨论

血液细胞学检查分析是诊断和鉴别诊断系统疾病的主要依据，针对血液成分开展的血液学检验所获得的信息可及时了解发病原因、病情进展、疾病程度以及进行预后判断,从而为疾病的诊断、治疗及预防提供依据[2].金钱草具有缓解疼痛、减少血尿及促进排石等功效的经典中草药，国内外对于体外抑制结石形成方面已有报道[3]，而临床和体内实验研究均鲜有报道.我们通过对小鼠结石模型形成过程进行给药干预，检测试验28日龄小鼠血液红细胞数、白细胞数、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞比例、嗜中性粒细胞比例的变化，初步探讨金钱草抑制草酸钙结石形成的干预作用.

3.1 金钱草对草酸钙结石小鼠红细胞数的影响

与其它器官相比，肾脏内更容易形成结石，从而引起炎症，使肾脏功能降低，分泌红细胞生成素减少，从而引起红细胞数目减少.本试验数据显示，试验Ⅱ组和Ⅲ组比试验Ⅰ组红细胞数目少，但对照组和试验组红细胞数目比较差异不显著（P＞0.05），说明结石在一定程度上能够引起红细胞数目减少，但这种减少变化轻微.试验Ⅲ组比试验Ⅱ组红细胞数目多，说明金钱草可以通过干扰草酸钙结石的形成，从而缓解因肾脏结石引起的炎症反应对机体造成的影响.

3.2 金钱草对草酸钙结石小鼠白细胞数的影响

动物机体发生炎症或其他疾病时，可引起白细胞总数的变化，因此检查白细胞总数成为辅助诊断的一种重要方法[4].体内结石的刺激容易引起炎症，反之，炎性产物的聚集也促进结石的形成.研究表明，当机体由结石造成的损伤引起炎症时机体会进行免疫反应，白细胞的数目会出现一定程度上的增多[12].本试验数据显示试验Ⅱ组和试验Ⅲ组比对照组Ⅰ组白细胞数目多，试验Ⅲ组比试验Ⅱ组白细胞数目多（P＜0.01）说明结石引起炎症反应后刺激机体白细胞大量生成，进入感染部位进行抗炎，金钱草促进草酸结石小鼠白细胞数目的增多，增强机体免疫反应，金钱草对草酸钙结石小鼠白细胞数的影响较大.

3.3 金钱草对草酸钙结石小鼠淋巴细胞的影响

淋巴细胞是在适应性免疫中起关键作用的白细胞.研究表明，当机体由结石造成的损伤引起炎症反应时机体会进行免疫反应，结石引起的炎症反应对机体淋巴细胞的产生影响不大[5].本试验数据显示试验Ⅱ组比对照组Ⅰ组淋巴细胞所占比例减少（P＞0.05），试验Ⅲ组和试验Ⅱ组、试验Ⅰ组相比淋巴细胞所占比例出现增大（P＞0.05），说明金钱草可以促进草酸钙结石小鼠淋巴细胞的产生，但影响不显著.

3.4 金钱草对草酸钙结石小鼠嗜酸性粒细胞的影响

嗜酸性粒细胞是白细胞的一种，一般认为在抗寄生虫感染及I型超敏反应中发挥重要作用.本试验中，对照组Ⅰ组和试验组Ⅱ组嗜酸性粒细胞所占比例相比较结果相等差异不显著（P＞0.05），试验Ⅲ组比试验Ⅰ组、试验Ⅱ组嗜酸性粒细胞所占比例大（P＞0.05）说明金钱草能够刺激草酸钙结石小鼠机体产生嗜酸性粒细胞但影响不明显.

3.5 金钱草对草酸钙结石小鼠嗜中性粒细胞的影响

嗜中性粒细胞是白细胞的一种，结石引起的炎症反应能够刺激机体嗜中性粒细胞的产生.本试验中，试验Ⅱ组比对照组Ⅰ组嗜中性粒细胞所占比例大（P＞0.05），试验Ⅲ组比试验Ⅱ组、对照组Ⅰ组嗜中性粒细胞所占比例小（P＜0.05），说明金钱草能够干扰小鼠体内草酸结石的形成过程，从而减少炎症反应过程.

综上所述，金钱草对草酸钙结石小鼠白细胞影响较显著，金钱草能够刺激草酸钙结石小鼠的白细胞的产生，使白细胞数目增多，嗜中性粒细胞所占比例减少.金钱草作为经典治疗泌尿系结石的中草药，能够通过影响白细胞来改变机体的免疫力.

4 结论

金钱草能够刺激草酸钙结石小鼠的白细胞的产生，使白细胞数目增多，嗜中性粒细胞所占比例减少来改变机体的免疫力，进而发挥抗结石的作用.为进一步探究了其药用价值，开发防治宠物尿石症的药物提供试验依据，同时也为人类防治泌尿系统结石病提供参考.

〔1〕杨玲娟,狄留庆,方芸.中药防治泌尿系结石概述[J].中国医院药学杂志,2006,26（11）:1401-1403.

〔2〕中华检验医学编辑部,加强形态的临床检验专家座谈会纪要[J].中华检验医学杂志,2005,28（2）:147-148.

〔3〕Gohel MD,Wong SP.chinese herbal medicines and their efficacy in treating renal stones.Urol Res,2006,34,365-372.

〔4〕GENG J G.Diretional migration of leukocytes:Their path ological roles in inflamm ation and strategies for development of anti-inflammatory thera-pies[J].Cell research,2001,11（2）:85-88.

〔5〕崔治中,崔保安.兽医免疫学[M].北京：中国农业出版社,2004.109-110.

S853.7

A

1673-260X（2012）09-0151-03

安徽科技学院自然科学研究项目（ZRC2012323）