西洋参干预胰岛素抵抗大鼠活性部位的化学成分研究Ⅴ

李冀，马育轩，葛鹏玲，杨炳友，尚广巍

(黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)

西洋参(Panax quinquefolium L.)为五加科多年生草本植物，又名花旗参，与人参(P.ginseng C.A May.)同科同属，根部入药，原产于美国和加拿大，近年在我国引种成功。其味甘，微苦而凉，入肺肾经，具补气养阴，生津止渴之功［1－2］。

本课题组早期实验证明，西洋参60%乙醇洗脱部位为干预胰岛素抵大鼠模型的活性部位［3－4］。本实验继续采用硅胶柱色谱及HPLC等分离技术与方法对该部位进行分离，得3个单体化合物，并对其化学结构作出鉴定，为进一步筛选其有效成分及探讨其作用机制奠定基础。

1 仪器与材料

超导核磁共振光谱仪采用Bruker－400型;TMS为内标，化学位移值以δ表示，重叠的信号用0表示，多重峰信号用m表示，偶合常数的单位均为Hz;半制备型色谱柱(Hypersil ODSⅡ(10μm，10mm ×250mm，大连依利特公司);制备型HPLC(Waters公司，Delta－600－2487型);ESI－MS(Finnigan MAT LCQ);分析型色谱柱(Hypersil ODSⅡ(5μm，4.6mm ×200mm，大连依利特公司);制备型色谱柱(Hypersil－ODSⅡ(10μm，20mm×300mm，大连依利特公司);满层色谱用硅胶板(Silica gel60F254)和反相板(Rp－18)(公国Merck公司);硅胶(青岛海洋化工厂、140～200目，200～300目);AB－8大孔吸附树脂(南开大学化工厂产品;化学试剂为分析纯(天津试剂一厂);柱色谱用反相ODS(ODS－AM，日本YMC公司);显色剂:10%的硫酸/乙醇溶液。

2 提取与分离

将西洋参的根部用70%EtOH回流提取后，回收EtOH，得到EtOH提取物。再将此提取物进行AB－8型大孔树脂柱色谱，依次分别用H2O、30%EtOH、60%EtOH、90%EtOH 洗脱，得到 XY －1、XY －2、XY －3 和XY－4四个部位。本课题组早期实验证明［2］，XY－3部分为有效部位。继续采用硅胶柱色谱及HPLC等分离技术与方法对该部位进行分离，得到3个单体化合物，并对其化学结构进行鉴定。

3 鉴定

Fig.1 Structures of compounds 1，2

3.1 化合物1化学结构的鉴定

化合物1为白色无定形粉末(MeOH)，Liebermann－Burchard和Molish反应均成阳性，化合物1的薄层水解后，经检识证明含阿拉伯糖和葡萄糖，因吡喃糖苷较呋喃糖苷难水解，提示C－20位连的两种糖中阿拉伯糖为吡喃型。化合物1的正性 ESI－MS在 m/z 1 101处可见［M+Na］+离子峰，表明化合物1的分子量为1 078。综合1H－NMR，13C－NMR谱等数据可推断出化合物1的分子式为C53H90O22，计算不饱和度为9，推断化合物1可能是三萜皂苷类。

化合物 1的1H －NMR(400MHZ，pyridine)谱，在高场区 δ0.78(3H，s)、δ0.93(3H，s)、δ0.95(3H，s)、δ1.09(3H，s)、δ1.26(3H，s)、δ1.58(3H，s)、δ1.62(3H，s)、δ1.64(3H，s)处可见8 个归属于皂苷元上的角甲基单峰信号。在低场区δ5.53处可以观察到烯氢质子的信号。在 δ4.92(1H，d，J=7.6Hz)、δ4.99(1H，d，J=7.2Hz)、δ5.13(1H，d，J=7.6Hz)、δ5.38(1H，d，J=7.6Hz)处分别出现4个归属于葡萄糖的端基质子信号。

结合化合物1的 DEPT、1H－1H COSY、HSQC和HMBC等波谱的综合解析，对化合物1的13C－NMR谱的全部碳信号(见Table1.1)进行了详细的解析和归属。将化合物1的13C－NMR谱数据与化学结构已知的化合物人参皂苷－20(S)Rb2相比较［5］，两者基本一致。

综合各种分析结果，化合物1被鉴定为3－O－β－D－吡喃葡萄糖基－(1→2)－β－D－吡喃葡萄糖基－20－O－β－D吡喃阿拉伯糖基－(1→6)－β－D－吡喃葡萄糖基 －达玛 －24－烯 －3β，12β，20S－三醇［3－O－β－D－glucopyranosyl－(1→2)－β－D－glucopyranosyl－20－O－β－D－arab－inopyranosyl－(1→6)－β－D－glucopyranosyl－dammar－24－ene－3β，12β，20S －triol］。化学结构见 Fig.1 。

3.2 化合物2化学结构的鉴定

化合物2为白色无定形粉末(MeOH)，Liebermann－Burchard和Molish反应均成阳性，化合物2的薄层水解后，经检识证明含D－葡萄糖和D－木糖。化合物2的正性 ESI－MS在 m/z 1 083.5处可见［M+Na］+离子峰，表明化合物2的分子量为1 060。综合1H－NMR，13C－NMR谱等数据可推断出化合物2的分子式为C53H88O21，计算不饱和度为10，推断化合物2可能是三萜皂苷类。

化合物 2的1H －NMR(400MHZ，pyridine)谱，在高场区 δ0.78(3H，s)、δ0.92(3H，s)、δ0.93(3H，s)、δ1.09(3H，s)、δ1.26(3H，s)、δ1.59(3H，s)、δ1.63(3H，s)、δ1.63(3H，s)处可见8 个归属于皂苷元上的角甲基单峰信号。在低场区δ5.52处可以观察到烯氢质子的信号。在 δ5.38(1H，d，J=7.6Hz)、δ5.13(1H，d，J=7.6Hz)、δ4.92(1H，d，J=7.6Hz)、δ4.70(1H，d，J=11.4Hz)处分别出现4个归属于葡萄糖的端基质子信号。

结合化合物2的 DEPT、1H－1H COSY、HSQC和HMBC等波谱的综合解析，对化合物2的13C－NMR谱的全部碳信号(见Table1.1)进行了详细的解析和归属。将化合物2的13C－NMR谱数据与化学结构已知的化合物人参皂苷－Rb3相比较［3］，两者基本一致。

综合各种分析结果，化合物2被鉴定为3－O－β－D－吡喃葡萄糖基－(1→2)－β－D－吡喃葡萄糖基－20－O－β－吡喃木糖基－(1→6)－β－D－吡喃葡萄糖基 －达玛 －24－烯 －3β，12β，20S－三醇［3－O－β－D－glucopyranosyl－(1→2)－β－D－glucopyranosyl－20－O－β－D－glucopyra－nosyl－(1→6)－β－D －xylopyranosyl－dammara－24－ene－3β，12β，20S －triol］。化学结构见 Fig.1 。

3.3 化合物3化学结构的鉴定

Fig.2 Structures of 3

化合物3为白色无定形粉末(MeOH)，Liebermann－Burchard和Molish反应均成阳性，化合物3的薄层水解后，经检识证明含D－葡萄糖。化合物3的正性ESI－MS在m/z986处可见［M+Na］+离子峰，表明化合物3的分子量为963。综合1H－NMR，13C－NMR谱等数据可推断出化合物3的分子式为C48H83O19，计算不饱和度为8，推断化合物3可能是三萜皂苷类。

化合物 3的1H －NMR(400MHZ，pyridine)谱，在高场区 δ0.78(3H，s)、δ0.92(3H，s)、δ1.08(3H，s)、δ1.31(3H，s)、δ1.54(3H，s)、δ1.62(3H，s)、δ1.63(3H，s)处可见7个归属于皂苷元上的角甲基单峰信号。在低场区δ5.57处可以观察到烯氢质子的信号。在 δ4.93(1H，d，J=7.6Hz)、δ5.16(1H，d，J=7.6Hz)、δ5.39(1H，d，J=7.6Hz)处分别出现3个归属于葡萄糖的端基质子信号。

Tablel.1 13C － NMR data of 1，2，3(pyridine)

结合化合物3的 DEPT、1H－1H COSY、HSQC和HMBC等波谱的综合解析，对化合物3的13C－NMR谱的全部碳信号(见Table1.1)进行了详细的解析和归属。将化合物3的13C－NMR谱数据与化学结构已知的化合物Majoroside F1相比较［6］，两者基本一致。

综合各种分析结果，化合物3被鉴定为达玛－25(26) － 烯 －3β，12β，20S，24ξ－ 四醇(20－O － β －D －吡喃葡萄糖基)－3－O－β－D－吡喃葡萄糖基(1→2)－β－D－吡喃葡萄糖苷(dram－mar－25(26)－ene－3β，12β，20S，24ξ－ietraol－20－O － β －D －glucopyranosyl－(1→2)－β－gl－ucopyranoside)。化学结构见 Fig.2 。

［1］ 李冀，马育轩，葛鹏玲，等.西洋参干预胰岛素抵抗大鼠活性部位的化学成分研究Ⅱ［J］.中医药信息，2010，27(5):23 －26.

［2］ 李冀，马育轩，葛鹏玲，等.西洋参干预胰岛素抵抗大鼠活性部位的化学成分研究［J］.中医药学报，2009，37(6):68 －70.

［3］ 李冀，盛波，葛鹏玲，等.西洋参不同洗脱部位对胰岛素抵抗大鼠脂代谢的影响［J］.中医药信息，2008，25(3):13－14.

［4］ 马育轩，葛鹏玲，杨炳友，等.西洋参干预胰岛素抵抗大鼠活性部位的化学成分研究Ⅳ［J］.中医药学报，2011，39(1):74 －76.

［5］ 王贵得，马兴元，绍春杰，等.国产西洋参叶化学陈分的研究—人参皂苷的分离鉴定［J］.中成药，1994，41(2):33－34.

［6］ Ping Zhao，Yu － Qing Liu，ChongRen Yang.Minor Dammarane Saponins from Panax notoginseng ［J］.Phytochemistry，1996，4(5):1419－1425.