消毒液中4-氯代-3,5-二甲基苯酚的高效液相色谱分析

高志红，杨 挺，李健玲

（1. 江南大学 化学与材料工程学院，江苏 无锡 214122；2. 宁波市乐嘉化工有限公司，浙江 宁波 315040）

消毒液中4-氯代-3,5-二甲基苯酚的高效液相色谱分析

高志红1，杨 挺1，李健玲2

（1. 江南大学 化学与材料工程学院，江苏 无锡 214122；2. 宁波市乐嘉化工有限公司，浙江 宁波 315040）

研究消毒液中4-氯代-3,5-二甲基苯酚含量的测定方法。采用高效液相色谱法（HPLC），Hypersil C18柱（150×4.6mm，5mm），以甲醇-水-冰乙酸（100-99-1）为流动相，流速1mL/min，检测波长为285nm。在0.101～1.007mg/mL范围内呈现良好的线性关系（r＝0.9992），平均回收率为96.19%，相对标准偏差（RSD）小于1.10%。该方法简便、快捷、准确，可用于以4-氯代-3,5-二甲基苯酚为主有效成分的消毒液的质量检测和生产控制。

4-氯代-3,5-二甲基苯酚；高效液相色谱；消毒液；检测

1. 前言

4-氯代-3,5-二甲基苯酚为无色至类白色针状结晶物质，具有微弱气味，不易溶于水。其分子式为C8H9ClO，化学结构式为：

4-氯代-3,5-二甲基苯酚是《化妆品生产企业卫生规范》（2007版）中规定允许使用的原料，在化妆品、洗涤用品中可以起防腐、杀菌、防霉作用。对于专用消毒产品，它属卤代酚类消毒剂，对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、真菌和霉菌具有强杀灭功效，且对皮肤、粘膜刺激小，环境中可降解[1]。因此，它广泛用于皮肤、物体表面和环境地面的消毒[2-5]。

由于其所在基质及含量存在差别，4-氯代-3,5-二甲基苯酚的检测方法也各有不同。例如，对于海洋沉积物中酚类化合物的测定[6]、化妆品中做防腐杀菌剂时含量的测定[7,8]、水中微量含量的测定[9]、消毒液中含量的测定[10,11]、血浆和尿液中的检测[12,13]，分别有液相色谱法[7,8,14]、薄层色谱法[10]、荧光分光光度法[15]等方法。

毒理学评价发现，含50g/L的4-氯代-3,5-二甲基苯酚消毒液杀菌效果好，且毒性较低，刺激小[16,17]。目前，国内市场上有多种品牌的消毒液以4-氯代-3,5-二甲基苯酚为主要成分，且标示含量在5.0g/100mL左右。本文结合企业实际，建立了测定消毒液中含量在5.0g/100mL左右的4-氯代-3,5-二甲基苯酚的高效液相色谱方法。该方法的特点是操作简便、灵敏度高、重现性好，可以在短时间内完成测定。

2. 实验部分

2.1 仪器及试剂

高效液相色谱仪岛津LC-6A，SPD-6AV紫外-可见检测器，HW-2000色谱工作站；超纯水发生器，18.2MΩ.cm，美国Millipore公司。

4-氯代-3,5-二甲基苯酚、2,4-二氯代-3,5-二甲基苯酚，均为标准品，上海利盛化学品有限公司；甲醇，色谱纯，天津四友生物公司；冰乙酸，分析纯，天津四有生物公司；市售的五种品牌消毒液。

2.2 实验方法

2.2.1 色谱条件

色谱柱：Hypersil C18柱（150×4.6mm，5mm )；流动相：甲醇-水-冰乙酸（100-99-1）；紫外检测器：285nm；流速：1mL/min；进样量：10mL；室温下操作。

2.2.2 标准溶液配制

精密称取干燥恒重的4-氯代-3,5-二甲基苯酚标准品100.70mg，用无水乙醇溶解后定容至100mL棕色容量瓶中，摇匀，配制成4-氯代-3,5-二甲基苯酚标准储备液（1.0070mg/mL）。分别准确移取标准储备液1.0mL、1.25mL、1.67mL、2.5mL、5.0mL于10mL容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，此标准系列浓度分别为0.1007mg/mL、0.1259mg/mL、0.1678mg/mL、0.2518mg/mL、0.5035mg/mL。

2.2.3 样品溶液制备

精密吸取五种消毒液样品各0.5mL，分别置于50mL容量瓶中，加入无水乙醇定容，摇匀，超声处理10min后待用。测定前经0.45mm微孔滤膜过滤。

2.2.4 测定步骤

在设定的色谱条件下，各取10mL不同浓度的4-氯代-3,5-二甲基苯酚标准溶液，注入高效液相色谱仪，记录保留时间以及各次不同浓度的峰面积。以含量为横坐标，峰面积为纵坐标，制作标准曲线。样品测定则取制备好的样品溶液，在测定标准溶液相同的色谱条件下进行分析，以色谱峰保留时间定性，峰面积定量。

3. 结果与讨论

3.1 分离条件的选择

根据3,5-二甲基-4-氯代苯酚的性质，选取甲醇、水、冰乙酸三者混合作流动相。加入冰乙酸，可以有效地改善峰形。用甲醇-水-冰乙酸分别按70-29-1、100-80-1、100-99-1三种比例作流动相进行测试。在甲醇-水-冰乙酸（100-99-1）条件下，4-氯代-3,5-二甲基苯酚可以与相邻干扰物质基线分离，又可以在较短时间内完成测定，也可与其共存的另一种消毒有效成分2,4-二氯代-3,5-二甲基苯酚分离完全。综合考虑，选取甲醇-水-冰乙酸（100-99-1）作流动相。图1所示为4-氯代-3,5-二甲基苯酚标准色谱图，消毒液样品的色谱图如图2所示。

3.2 测定条件的选择

采用C18反相系统，可变波长紫外检测器，室温下测定4-氯代-3,5-二甲基苯酚。可变波长紫外检测器可选用被测组分最灵敏的吸收波长进行测定，检测灵敏度高，并且对温度和流速变化不敏感。经过多次试验摸索，根据3,5-二甲基-4-氯代苯酚的紫外吸收光谱，选择285nm为检测波长最合适。室温下温度变化对样品峰分离影响不明显，但对出峰时间有些许影响，完全可以满足测试要求。

3.3 标准曲线及线性关系

4-氯代-3,5-二甲基苯酚标准系列浓度平行测定6次，取平均值得到标准曲线（图3）。回归方程为：y＝2419054.27x－40870.06，相关系数r＝0.9992，在0.101～1.007mg/mL范围内呈现良好的线性关系。

3.4 方法精密度测定

随即取两份配制好的4-氯代-3,5-二甲基苯酚标准溶液，按本实验的方法，平行测定6次。根据峰面积计算出相对标准偏差，如表1所示。可以看出，此方法测定4-氯代-3,5-二甲基苯酚有很好的精密度。

3.5 样品消毒液中4-氯代-3,5-二甲基苯酚的含量测定

在测定标准溶液相同的色谱条件下，对市售的五种消毒液样品进行分析，每样平行测定6次取平均值，结果如表2。

3.6 方法准确度的测定

取已经测得含量的消毒液样品A、B、C、D、E按样品处理方法处理后，在标准曲线范围内，分别加入已知一定量的标准4-氯代-3,5-二甲基苯酚。按照上述的色谱条件测试添加标准样品的添加回收率，每样平行测定6次取平均值，结果见表3。结果表明，5组含量样品加标检测结果重现性良好，平均回收率为96.19%。

表1 方法的精密度实验结果

表2 消毒液中4-氯代-3,5-二甲基苯酚含量的测定结果

表3 消毒液中4-氯代-3,5-二甲基苯酚添加回收率的测定结果

表4 方法的重现性测定结果

3.7 方法重现性的测定

在上述仪器和色谱条件下，企业委派的技术人员按照本实验方法，从A～E消毒液中随机抽取两个样品进行分析，每样平行测定3次，几天内重复操作测试，结果如表4。

4. 结论

本方法具有操作简单、分离效果好、出峰快的特点，适用于以4-氯代-3,5-二甲基苯酚为主消毒成分的消毒液的测定，对于企业在生产过程中进行质量控制具有实际意义。

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