灵芝多糖的急性毒性和抗肿瘤作用

崔永伟

江苏省溧水县中医院药剂科，江苏溧水 211200

灵芝多糖的急性毒性和抗肿瘤作用

崔永伟

江苏省溧水县中医院药剂科，江苏溧水 211200

目的：探讨灵芝多糖的急性毒性和抗肿瘤作用。方法：观察灵芝多糖的LD50及对S180小鼠肉瘤细胞的抑制作用。结果：灵芝多糖的LD50远大于国家标准15 g/kg，属无毒级别。同时当灵芝多糖的剂量为250 mg/kg时，对S180小鼠肉瘤细胞的抑瘤率为43.44%。结论：灵芝多糖有很好的抗肿瘤作用，同时无急性毒性，值得推广应用。

灵芝多糖；急性毒性；抗肿瘤作用；中药

灵芝又称灵芝草、神芝、芝草、仙草、瑞草，是多孔菌科植物赤芝或紫芝的全株。灵芝主要分布在中国、朝鲜半岛和日本[1-2]。灵芝一般生长在湿度高且光线昏暗的山林中，主要生长在腐树或其树木的根部。灵芝的主要成分为灵芝多糖，它有希望作为肿瘤化学治疗或放射治疗的辅助治疗药，可增强机体免疫功能，提高肿瘤化学治疗或放射治疗的疗效，并因其抗放射作用，改善骨髓造血功能，从而减轻化学治疗或放射治疗的副作用。此外，其“扶正固本”作用尚可全面提高患者的体质，有利于治疗[3-4]。本实验旨在探讨灵芝多糖的急性毒性级别，对S180小鼠肉瘤细胞的体内抑制作用。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 供试动物与瘤株 SPF级昆明小鼠 （安徽医科大学）；S180小鼠肉瘤细胞（中科院上海细胞生物学研究所）。

1.1.2 主要试剂 灵芝多糖（人工栽培灵芝子实体，广州市白云区大药房）；RPMI-1640培养液（Gibco公司产品）；MTT（Amresco 公司产品）；ConA（Sigma公司产品）；光学显微镜（日本 Olympus Bx51）；全自动血球分析（日本 Sysmex Kx21）；其他试剂为市售分析纯。

1.2 方法

1.2.1 灵芝多糖提取 人工培养灵芝子实体，粉碎，蒸馏水回流4次，每次40 min，合并回流液过滤，滤液经60℃减压浓缩，离心（6 000 r/min），去除沉淀，取上清液经95%乙醇沉淀，离心（6 000 r/min）收集沉淀物，再由Sevag法去蛋白，透析，真空干燥得灵芝总多糖[5]。

1.2.2 小鼠急性毒性试验设计 将小鼠分为6组，每组8只，雌雄各半。将灵芝多糖按剂量分为5组，分别为：L1，30 g/kg；L2，32 g/kg；L3，34 g/kg；L4，36 g/kg；L5，40 g/kg。 CN1 为对照组，溶剂采用蒸馏水。小鼠灌胃，每只每天1.5 ml，分两次灌服，间隔0.5 h，记录小鼠毒性情况与死亡情况，确定灵芝多糖的LD50。

1.2.3 小鼠抗肿瘤试验设计 取生长最佳状态的S180腹水瘤传代细胞，小鼠右前肢腋下接种。将接种后小鼠随机分为3组，每组6只，雌雄各半。分别为：灵芝多糖组（编号LZ），样品剂量为250 mg/kg；阴性对照组（溶剂用蒸馏水，编号CN）；阳性对照（CTX），剂量为 100 mg/kg。24 h后开始灌胃，每只 0.2 ml/d，连续给药12 d。停药24 h后，小鼠脱颈处死后称重解剖，计算抑瘤率，公式为：抑瘤率（%）=（阴性对照组－试验组）/阴性对照组×100%。

1.2.4 统计方法 采用 SPSS 19.0软件分析，两个样本的qtest比较，用t检验，结果以x±s表示。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 灵芝多糖的急性毒性实验

灵芝多糖的LD50远大于国家标准15 g/kg，属无毒级别。

2.2 小鼠体内抗肿瘤试验

2.2.1 灵芝多糖对小鼠体重的影响 随着灌胃天数增加，小鼠体重不断变化，灵芝多糖组小鼠体重呈逐渐增加趋势，而阳性对照CTX组小鼠体重逐渐下降。具体情况见图1。

2.2.2 灵芝多糖对小鼠采食量的影响 各样品组小鼠采食量随着饲养天数增多，变化较明显，灵芝多糖组采食量稳定增加，而阳性对照CTX组由于副作用太大，阴性对照CN组在肿瘤的作用下，病情加重，食欲下降，采食量减少。具体情况见图2。

图1 灵芝多糖对S180肉瘤小鼠体重的影响

图2 灵芝多糖对S180肉瘤小鼠采食量的影响

2.2.3 灵芝多糖对小鼠脾均重、瘤均重的影响 灵芝多糖实验组的小鼠脾脏指数高于CN和CTX，但方差分析差异无统计学意义。而小鼠的瘤均重测定结果显示，灵芝多糖的抑瘤率为43.44%，具有统计学意义。具体情况见表1。

3 讨论

灵芝所含的多糖、多肽等有着明显的抗肿瘤功效，它可显著提高机体的免疫功能，增强患者自身的抗癌能力[5]。灵芝可以促进白细胞介素-2的生成，促进单核巨噬细胞的吞噬功能，提升人体的造血能力尤其是白细胞的指标水平以及其中某些有效成分对癌细胞的抑制作用，成为抗肿瘤、防癌以及癌症辅助治疗的优选药物[6-7]。灵芝对人体几乎没有任何毒副作用。这种无毒性的免疫活化剂的优点，恰恰是许多肿瘤化疗药物和其他免疫促进剂都不具有的[8]。本文结果显示，灵芝多糖对S180小鼠肉瘤细胞的体内抑制极显著，对脾脏等免疫器官的功能有调节作用，效果明显优于化疗药物环磷酰胺，其抗肿瘤作用与文献中确定的灵芝菌子实体来源的灵芝多糖对S180小鼠肉瘤细胞抑制效果相当[6-7]。

表1 灵芝多糖对S180肉瘤小鼠脾脏及肿瘤的影响

[1]赵继鼎，徐连旺，张小青.中国灵芝[M].北京：科学出版社，1981.

[2]林志彬，灵芝的现代研究[M].北京：北京大学中国协和医科大学联合出版社，1996.

[3]戴则林，蕫昌武.灵芝多糖的生物活性研究进展[J].安徽中医学院学报，2005，24（5）：60-62.

[4]LeiL S，Lin ZB.Effects of ganodem a polysaccharides on T cell subpopulations and production of interleukin 2 in mixed lymphocyte response[J].Acta Pham Sin，1992，27（5）：331-335.

[5]陈文星，陆茵，王爱云，等.不同提取工艺灵芝多糖抗肿瘤作用比较[J].南京中医药大学学报，2003,19（4）：227-228.

[6]宁安红，曹婧，黄敏，等.灵芝多糖对小鼠肿瘤的抑制作用及免疫指标的观察[J].肿瘤研究与临床，2004，16（3）：147-149.

[7]李建军，雷林生，余传林，等.灵芝多糖抗肿瘤作用的免疫学相关性研究[J].中药材，2007，30（1）：71-73.

[8]张明军.枸杞多糖对小鼠腹腔巨噬细胞作用的定量细胞化学研究[J].宁夏医学院学报，1994，16（4）：307.

The acute toxicity and antitumor of ganoderma lucidum polysaccharides

CUI Yongwei

Pharmacy of Lishui County Hospital in Jiangsu Province,Lishui211200,China

Objective:To investigate the acute toxicity and antitumor of ganoderma lucidum polysaccharides.Methods:Observed the inhibition of the LD50 of ganoderma lucidum polysaccharides to the mouse sarcoma S180 cells.Results:The results showed that the LD50 of the ganoderma lucidum polysaccharides were greater than the national standard of 15 g/kg,it had non-toxic.At the same time,when the dose of Ganoderma lucidum polysaccharides was 250 mg/kg,the inhibition was 43.44%of S180 mouse sarcoma cells.Conclusion:Ganoderma lucidum polysaccharides has a good anti-tumor effect,and no acute toxicity,should be widely applied.

Ganoderma lucidum polysaccharides;Acute toxicity;Anti-tumor effect;Traditional Chinese medicine

R285.5

A

1674-4721（2012）01（b）-046-02

2011-11-01）