刺五加及短梗五加根皮有效成分含量对比研究

刘 枞，韩荣春，徐保利，李先宽，王 冰

(辽宁中医药大学，辽宁 大连 116600)

短梗五加［Acanthopanax sessilifloms(Rupr.et Maxim.)Seem.］，又名无梗五加，为五加科(Araliaceae)五加属多年生落叶灌木，其嫩茎俗称“刺柺棒”，是辽东和吉东山区人传统食用数百年的野蔬珍品。《本草纲目》中对五加载述:“五加无毒，久服延年益老，功难尽述”。［1］本草记载:短梗五加的根皮具有祛风湿、补肝肾、强筋骨、活血脉等功效。用于治疗风寒湿痹、腰膝疼痛、筋骨痿软、小儿行迟、体虚赢弱等病症［2］。

民间多把短梗五加干燥根和根茎或茎当作刺五加正品混用，刺五加及短梗五加中含有大量的苷类物质，其中刺五加苷B、E和异嗪皮啶为主要的活性成分［3］。刺五加苷B又称紫丁香苷，具有很强的止血作用，是一种强抗肝毒药物，其恢复微粒体酶系统的酶活性及抑制脂质过氧化作用可以促进肝毒代谢并改善肝功能使之正常化。而异嗪皮啶(7－羟基－6，8－二甲氧基香豆素)是药典中刺五加药材起镇静安神作用的物质基础［4］。刺五加苷E是具有明显的抗应激反应的作用。本实验利用HPLC对刺五加及短梗五加根皮中的3种有效成分进行含量测定。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1100高效液相色谱仪，VWD检测器(G1314A)，四元泵(G1311A)(美国 Agilent公司)，色谱柱∶Agilent TC－C18(4.6 mm×150 mm);电子天平(瑞士 Mettler Toledo AG285、AE240);KQ－250型超声清洗器(昆山超声仪器有限公司)。

1.2 试剂

甲醇为色谱纯和分析纯，重蒸馏水。

1.3 对照品

刺五加苷B、刺五加苷E及异嗪皮啶(均购自上海源叶生物科技有限公司，批号分别为20110824、20110824及20111024)。

1.4 实验材料

刺五加根采于辽宁千山中沟向阳山坡，短梗五加根采于辽宁千山北沟背阴山脚。

2 实验方法

2.1 色谱条件

色谱柱∶Agilent TC－C18(4.6 mm ×150 mm);流动相:甲醇(A)－水(B)，梯度洗脱:(0～15 min:20A;15～20 min:21A;20～35 min:30A);检测波长:210 nm;流速:0.8 mL·min－1;柱温:30 ℃;进样量:10 μL。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取干燥至恒重的刺五加苷B、刺五加苷E及异嗪皮啶对照品，制备成刺五加苷B:160 μg·mL－1、刺五加苷 E:204 μg·mL－1、异嗪皮啶:38 μg·mL－1的对照品溶液，备用。

2.3 供试品制备

取刺五加及短梗五加根皮样品粉末(40目)约2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加甲醇25 mL，称定重量，超声处理30 min，放冷，用甲醇补足失重，摇匀滤过，取续滤液，即得刺五加苷B、E及异嗪皮啶供试品溶液［5］，进样量 10 μL，色谱图见图 1。

图1 A:混合标准品;B:刺五加根皮HPLC图谱;C:短梗五加根皮HPLC图谱

2.4 线性关系的考察

分别精密吸取2、4、6、8、10 μL 刺五加皂苷 B、E及异嗪皮啶标准品溶液，注入液相色谱器仪中，测定色谱峰面积，以进样量为横坐标，色谱峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得刺五加皂苷B的线性回归方程为 y=367.24x－15.115，r=0.9995，在 0.3240 ～1.6200 μg范围内呈良好的线性关系。刺五加苷E回归方程为 y=72.127x－3.9780，r=0.9998。在0.4080 ～2.0400 μg范围内呈良好的线性关系。异嗪皮啶回归方程为 y=306.17x－150.97，r=0.9998。在 0.0760 ～0.3800 μg 范围内呈良好的线性关系。…

2.5 精密度试验

分别精密吸取刺五加苷B、刺五加苷E及异嗪皮啶对照品溶液连续进样6次，每次10 μL，按前述色谱条件进样分析，测定色谱峰面积，得RSD值分别为1.1%，1.4%和1.4%。测定结果表明，本试验精密度试验符合规定。

2.6 稳定性试验

供试品配制后分别按 2、4、6、8、10 h 的时间间隔进样分析，测定峰面积，得刺五加苷B的RSD为1.54%，刺五加苷E的RSD为1.08%，异嗪皮啶的RSD为1.64%。试验结果表明，供试液制备后10 h测定，色谱峰面积无明显变化，在此时间内，待测组分化学性质稳定。

2.7 重复性试验

分别精密称取刺五加根皮粉末6份，按2.3项方法制备，精密吸取样品液10 μL，连续进样分析，测定刺五加苷B的RSD为1.2%，刺五加苷E的RSD为1.8%，异嗪皮啶的RSD为0.7%。试验结果表明，待测组分重复性良好。

2.8 加样回收率试验

采用加样回收法，分别取已知含量的刺五加根皮样品6份，各0.125 g，精密称定，分别精密加入刺五加苷B、E及异嗪皮啶对照品溶液，按2.3项方法制备，按2.1项色谱条件进行测定，测定刺五加苷B的RSD为0.7%，刺五加苷E的RSD为1.3%，异嗪皮啶的RSD为0.6%。

3 含量测定结果

精密吸取刺五加及短梗五加样品溶液10 μL，按2.1项色谱条件进样分析，每一样品重复进样3次，测定色谱峰面积，测定结果平均值见表1。

表1 刺五加及短梗五加根皮有效成分含量(mg·g－1)

4 结果与讨论

4.1 本试验优化了药典中等度洗脱的色谱检测方法，采用甲醇︰水梯度洗脱的方法对刺五加及短梗五加中的刺五加苷B、E及异嗪皮啶进行检测，其结果显示所建立的方法简单、快捷、准确度高，可用于刺五加及短梗五加中的刺五加苷B、E及异嗪皮啶含量的测定。

4.2 本试验结果表明，刺五加根皮样品中3种指标成分的含量多大于文献［6－12］中的报道，短梗五加根皮样品中刺五加苷B和刺五加苷E的含量明显低于刺五加根皮中这两种指标成分的含量，而异嗪皮啶的含量则只是略低于刺五加根皮中含量。相关文献报道指标成分异嗪皮啶有镇静安神的作用，故推测短梗五加根皮在镇静安神方面有一定的疗效。鉴于国内外对短梗五加的研究较少，有关结论还有待于近一步深入研究。

［1］曹先兰，李珠莲.刺五加国外实验研究［J］.中草药，1980，11(6):277－283.

［2］国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草［M］.上海:上海科技出版社，1251.

［3］吴立军，郑健，姜宝虹，等.刺五加茎叶化学成分［J］.药学学报，1999，34(4):294.

［4］张丽萍，陈丽颖，孙棫久，等.刺五加果化学成分的分析［J］.东北师大自然科学版，1992，21(1):123－247.

［5］国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部［M］.中国医药科技出版社，2010:192.

［6］劳凤云，李小娜，邢朝斌，等.HPLC法测定刺五加中刺五加苷B和刺五加苷 E的含量［J］.现代预防医学，2008，35(12):2280－2281.

［7］张萍.HPLC测定不同产地、不同生长年限刺五加药材中异嗪皮啶［J］.药物分析杂志，2010，30(12):2433－2435.

［8］姜文红，刘静，仲昭庆，等.HPLC法同时测定刺五加浸膏中3种有效成分的含量［J］.药物分析杂志，2010，30(6):1145－1147.

［9］吴少杰，邢朝斌，劳凤云，等.不同产地刺五加中刺五加苷E含量的高效液相色谱测定［J］.时珍国医国药，2010，21(8):1854－1855.

［10］张晶，刘芳芳，薛起，等.HPLC法测定刺五加不同部位刺五加苷 B、E含量［J］.药物分析杂志.2008，28(12):2018－2020.

［11］张崇喜，王桐玉，田芯，等.不同采收期野生和仿生刺五加根与茎中紫丁香苷和总黄酮含量测定［J］.中成药，2009，31(1):82－85.

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