不同提取方法对3种维吾尔药材抑菌作用的影响

祖丽皮亚·玉努斯

（新疆大学生命科学与技术学院，新疆 乌鲁木齐 830046）

在全球长寿地区之一的新疆，具有独特的地理环境和气候条件，因而蕴育了丰富的维吾尔药材资源，维吾尔传统医药至今广泛流传。维吾尔人在用天然药物治病过程中创造了独具特色的维吾尔药制备方法、用药等理论及临床经验。本文为对维吾尔药材制备方法进行有关试验，找出合理的制备方法，以三种常用维吾尔药材为试验材料对常见的4种细菌进行了体外抑菌试验 。

1 试验材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌种 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、变形杆菌。新疆大学生命科学与技术学院微生物教研室保存菌种。

1.1.2 仪器与药品 恒温培养箱、高压灭菌锅，冰箱，722型可见紫外分光光度计，旋转蒸发仪，电子天平，pH值精密试纸，以及其他微生物培养所需常规器皿等、所用的药品有牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂粉等。

1.1.3 维吾尔生药 地锦草，菝葜根，黄花苜蓿，购自新疆加帕尔阿吉生物有限公司。

1.2 方法

1.2.1 维药提取液的制备 （1）煎煮法：取上述3种药材各10g，切细磨碎，加200mL蒸馏水，煮沸30min，过滤，药渣再加蒸馏水200 mL，煮沸30 min，过滤，合并两次滤液，加热蒸发浓缩至10mL，使100%原液，4℃冰箱保存备用。（2）加水研磨法：取上述3种药材各10g，无菌乳钵中捣碎，按1∶10比例加无菌蒸馏水浸泡过夜，然后3000r／min离心5min，上清液即为100%原液，4℃冰箱保存备用。（3）乙醇提取法：取上述3中药材10g，加60mL体积分数为70%乙醇浸泡24h，将浸提液置于旋转蒸发仪浓缩至10mL，即得100%提取液，4℃冰箱保存备用。

1.2.2 菌悬液的制备 无菌条件取一铂金环已活化的备用菌种接种在灭菌100mL的液体培养基中，在37℃振荡培养箱培养16～18h，再用可见紫外分光光度计测OD值，测定结果在0.005～0.01范围内可用于抑菌试验，如果菌悬液的OD值超过这个范围用2倍和10倍稀释法稀释到0.005～0.01范围，备用。

1.2.3 最底抑菌浓度（MIC）的测定 采用试管稀释法进行体外抑菌试验。不同方法（煎煮法、加水研磨法）制备的地锦草、菝葜根、黄花苜蓿提取液分别配制成含提取液浓度为50%、25%、12.5%、6.25%、3.125%、1.56%的液体培养基各5mL。

分别取菌悬液100μmL接种于上述液体培养基内，做一个平行试验，一个对照试验。在37℃振荡培养箱培养18～24h，然后与对照组对照颜色变化。如颜色变化不明显，取100μmL于已备好的固体平板培养基中涂布均匀，在37℃培养24h观察结果。

1.2.4 结果判定 观察细菌生长情况，细菌不生长的最低维吾尔药提取液浓度即为该提取液对该细菌的最低抑菌浓度（MIC）。

2 试验结果

2.1 对大肠杆菌的抑菌作用 采用煎煮法提取的地锦草，黄花苜蓿、菝葜根提取液对大肠杆菌的MIC分别为12.5%、12.5%和25%；采用加水研磨法提取的地锦草、黄花苜蓿、菝葜根提取液对大肠杆菌的 MIC分别为25%、12.5%和6.25%；不同乙醇提取液对变形杆菌的 MIC分别为12.5%、25%、6.25%。见表1。

表1 不同提取液对大肠杆菌的抑菌作用

2.2 对金黄色葡萄球菌的抑菌作用 采用煎煮法制备的提取液对金黄色葡萄球菌的MIC均为12.5%。采用加水研磨法制备的提取液对金黄色葡萄球菌的MIC分别为50%、25%、50%，不同乙醇提取液对变形杆菌的 MIC分别为12.5%、25%、6.25%。见表2。

2.3 对枯草芽孢杆菌的抑菌作用 采用煎煮法制备的3种提取液对枯草芽孢杆菌的MIC均为50%；采用加水研磨法制备的原液对枯草芽孢杆菌没有抑菌作用，不同乙醇提取液对变形杆菌的MIC分别为50%、50%、25%。见表3。

2.4 对变形杆菌的抑菌作用 采用煎煮法制备的3种提取液对变形杆菌的 MIC分别为25%、25%、50%，采用加水研磨法的提取液对变形杆菌的MIC均为50%，不同乙醇提取液对变形杆菌的MIC分别为12.5%、25%、12.5%。见表4。

3 讨论

3.1 维吾尔药的制备过程不同于天然化学药物的制备，主要要求提取总有效成分，多数为粗提物，临床用药的主要形式以复方为主，因此在研究某种维吾尔药的抑菌作用时应考虑到复方制剂的抑菌效果。

表2 不同提取液对金黄色葡萄球菌抑菌作用

表3 不同提取液对枯草芽孢杆菌抑菌作用

表4 不同提取液对变形杆菌的抑菌作用

3.2 维吾尔药制备的方法中炒、煅、蒸、煮应用最多，

3.3 同一种药材由于不同来源、季节性变化、使用部位的不同其成分和抑菌作用也有差别，特别是有些活性成分对光和热不稳定，这给抑菌效果带来一定的影响。还有同一种提取液，对不同供试菌抑菌效果也存在着较大的差异，其机理待进一步研究。

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