美洲大蠊提取物对大鼠膀胱黏膜损伤后修复的影响

谢 波 舒 彦 梁 臻 陈建和 程一宁 张心男

浙江省立同德医院泌尿外科 杭州 310000

因膀胱黏膜损伤导致的顽固性膀胱刺激症临床上并非少见，其中化疗药物所导致的膀胱黏膜损伤，引起一些并发症，明显降低了患者依从性[1]。美洲大蠊属昆虫纲，蜚蠊目，蜚蠊科，俗称蟑螂[2]。美洲大蠊提取物对于恶性血液病口腔溃疡、胃十二指肠溃疡、溃疡性结肠炎、皮肤皲裂、糖尿病皮肤溃疡、顽固性鼻出血、鼻中隔糜烂均有良好疗效，并得到广泛应用，但与膀胱黏膜损伤的相关研究较少[3-5]。本研究旨在观察美洲大蠊提取物对膀胱黏膜损伤后上皮愈合的影响，从而为临床应用提供依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料 清洁级健康雄性Wistar大鼠30只，购于浙江中医药大学实验动物中心，体质量200～250g。美洲大蠊提取物（商品名：康复新）购于四川好医生攀西药业有限责任公司。热休克蛋白60、70兔抗鼠多克隆抗体，购于武汉博士德生物工程有限公司。免疫组织化学超敏SP试剂盒购自福州迈新生物技术开发有限公司。

1.2 动物分组 应用随机数字表法将30只大鼠随机分成对照组、模型组和治疗组，每组10只。

1.3 动物处理 用2%戊巴比妥钠腹腔内注射法麻醉大鼠（30mg/kg），把3F导管经尿道插入大鼠膀胱，妥当固定后连接好1mL注射器，抽空膀胱尿液；各组大鼠均用生理盐水0.25mL冲洗膀胱3次，并抽空膀胱；对照组再注入生理盐水0.25mL，模型组和治疗组各注入0.1moL/L盐酸0.25mL，保留2min后抽空；各组再用生理盐水0.25mL冲洗膀胱3次后并抽空；对照组和模型组各注入0.25mL生理盐水，治疗组注入0.25mL康复新液，均保留30min后拔管。

1.4 标本制作及结果判定 灌注72h后处死全部大鼠，取下新鲜膀胱标本，10%福尔马林固定，用于石蜡切片的制备。组织切片HE染色光镜下观察膀胱黏膜的形态变化和炎性细胞浸润情况，免疫组化法染色制片后显微镜下观察。采用高压锅法修复抗原，SP法免疫组化染色，DAB显色，苏木精衬染，以胞质、胞核出现棕黄色为阳性，以细胞无棕黄色或与背景一致的浅棕色为阴性，在400倍光镜下观察，随机挑选10个视野，计算阳性细胞和总细胞数，并计算出阳性细胞率。1.5 统计学方法 使 用SPSS11.0软件进行统计分析，数据用（±s）表示，多组比较采用方差分析，两组间比较采用LSD法。

表1 各组大鼠膀胱组织热休克蛋白60、70表达（±s）

表1 各组大鼠膀胱组织热休克蛋白60、70表达（±s）

注：与对照组比较，△P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.01

组 别n/只热休克蛋白60热休克蛋白70对照组模型组治疗组10 10 10 0.235±0.045 0.412±0.051△0.268±0.046*0.258±0.051 0.509±0.062△0.293±0.054*

2 结果

2.1 大体病理改变 对照组无明显改变。模型组膀胱黏膜上皮有广泛的坏死脱落，可见明显溃疡灶，中间被覆白苔，周围黏膜水肿隆起，上皮可见广泛的出血点。治疗组膀胱黏膜上皮缺损少见，有少量散在小点状溃疡，溃疡表浅，周边黏膜无明显水肿。

2.2 显微镜下病理改变 对照组无明显病理改变。模型组可见黏膜严重充血、出血、上皮细胞坏死，大量炎性细胞浸润，黏膜下各层有炎性水肿。治疗组为散在小点状出血，少量炎性细胞浸润，受损膀胱黏膜表面有一层薄膜覆盖。

2.3 大鼠膀胱组织热休克蛋白60、70表达情况 模型组大鼠膀胱组织热休克蛋白60、70表达量较对照组显著增高（P＜0.01），治疗组大鼠膀胱组织热休克蛋白60、70表达量较模型组显著降低（P＜0.01），见表1。

3 讨论

膀胱黏膜损伤是化学性膀胱炎、放射性膀胱炎、腺性膀胱炎、慢性细菌性难治性膀胱炎和间质性膀胱炎等多种膀胱炎症的病理基础，可引起尿急、尿频和膀胱充盈后耻骨上方或会阴部持续疼痛等症状，严重影响患者的生活质量和身心健康[1]。膀胱黏膜表面葡萄糖氨基聚糖的缺陷是导致膀胱黏膜损伤的病理基础。葡萄糖氨基聚糖缺陷导致膀胱黏膜通透性增高，减弱了膀胱壁对化学物质的抵御力及修复能力，导致尿液中有毒有害物质进入到膀胱壁内，引发膀胱壁损害[6-7]。现针对膀胱黏膜葡萄糖氨基聚糖的治疗仅起到保护黏膜覆盖物，不能促进膀胱上皮修复，故长期疗效不确定，易反复。目前认为修复膀胱上皮，保护黏膜完整性才是疗效能够持久的根本原因，但仍缺乏疗效明确的上皮修复药。

近年来，医学昆虫的药用价值逐渐被认知。美洲大蠊作为药用的最早记载见于《神农本草经》，以蜚蠊名列为中品，“味咸，寒，生川泽，治血瘀症坚、寒热，破积聚，喉咽痹，内寒无子”。历代本草典籍如《新修本草》、《本草纲目》亦有记载[2]。根据文献报道，美洲大蠊提取物含有多元醇类、表皮生长因子、黏氨酸、黏糖氨酸及多种氨基酸等活性物质，具有抗炎、消肿、促进细胞增殖和新生肉芽组织增长，加速病损组织修复，加快坏死组织脱落，提高机体免疫功能等作用。

热休克蛋白又称应激蛋白，是细胞受各种应激原刺激后诱导产生的一组蛋白，具有维持细胞蛋白稳定、促进细胞生存等功能，其中热休克蛋白60、70分布广泛，在应激后产生最为显著[8-9]。本研究借助热休克蛋白60、70在炎症中的表达情况来反映美洲大蠊提取物对受损膀胱黏膜炎症减轻的作用。本研究证实，美洲大蠊提取物不仅可以从大体上减少膀胱黏膜缺损，减轻炎症浸润，也可减少膀胱黏膜热休克蛋白60、70表达。因此，美洲大蠊提取物可修复损伤的膀胱黏膜，加强膀胱壁的屏障作用，阻止炎症反应。

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