叶酸对妊娠期邻苯二甲酸二酯暴露致孕鼠及其胚胎损伤的防治作用

(北京军区总医院，北京 100700)

邻苯二甲酸二-(2-乙基己基)酯(DEHP)是目前市场上用量最大、最广泛的邻苯二甲酸酯类增塑剂，用于各种塑料产品甚至是食品包装材料、医用设备、儿童玩具、建筑材料制作［1］，其对机体健康的危害涉及生殖内分泌毒性、胚胎发育毒性、遗传免疫毒性、神经毒性、氧化损伤等方面，其中DEHP对生物雌性生殖系统的损害不容忽视。叶酸是机体一碳单位转移的辅酶，参与体内一碳单位的转移和代射，与嘌呤、嘧啶合成有关，其对DNA、RNA的合成、细胞增殖和组织分化有重要意义。2010年5～7月，本研究用DEHP灌喂大鼠，观察其胚胎毒性，并探讨叶酸对DEHP暴露致孕鼠及其胚胎损伤的防治作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物 SPF级健康未生育3月龄SD大鼠75只，雌鼠50只，雄鼠25只，体质量200～300 g，由中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心提供。饲养条件:室温(24±2)℃，通风，相对湿度60% ±10%，光照12 h/d，自由摄食饮水。

1.2 药品及试剂 DEHP(美国Sigma公司)，叶酸(北京芳草医药公司)，玉米油(天津嘉里粮油有限公司)，0.9%NaCl溶液(浙江济民制药有限公司)。

1.3 动物分组及处理 50只雌鼠随机分为5组，每组10只。空白组给予生理盐水，玉米油组给予玉米油，叶酸组给予叶酸60 mg/(kg·d)，DEHP组给予玉米油，实验组给予玉米油+叶酸。剂量均为0.5 mL/100 g，每日8:00～10:00灌胃。实验开始7 d后制备孕鼠模型，按雌、雄2∶1合笼交配，次晨8时查见阴栓者确定为妊娠0天，以此推算孕龄。所有雌鼠3 d内妊娠率100%，妊娠后各组继续妊娠前给药，DEHP组及实验组另添加 DEHP 50 mg/(kg·d)，各组均给药至妊娠19 d。

1.4 观察指标 观察孕鼠一般状态、毛发、活动及摄食情况，妊娠19 d处死孕鼠，剖腹取胎，统计活胎、死胎、吸收胎数及植入胚胎总数，观察胚胎畸形情况，测量胎鼠体质量及胎盘质量。取出孕鼠子宫、卵巢、肝脏，分别称取质量，计算脏器指数，脏器指数=脏器质量/体质量×100%。

1.5 统计学方法 采用SPSS13.0统计软件。数据以±s表示，行t检验。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组孕鼠情况 实验期间各组大鼠一般情况良好，外观均未见异常，被毛光泽，活动佳，摄食正常，未发现病理反应。各组均未发现死胎、吸收胎及畸形胎，未见有阴道出血、早期或晚期流产及死亡等毒性反应。各组孕鼠体质量无显著性差异(P均＞0.05);DEHP组与其他组相比，肝脏指数增加，卵巢、子宫指数降低(P均＜0.05);实验组孕鼠体质量、脏器指数与空白组、玉米油组、叶酸组相比，P均＞0.05，但与 DEHP 组相比，P＜0.05。详见表1。

表1 各组孕鼠体质量及子宫、卵巢、肝脏指数比较(±s)

表1 各组孕鼠体质量及子宫、卵巢、肝脏指数比较(±s)

组别 妊娠前体质量(g) 妊娠末体质量(g) 子宫指数(%) 卵巢指数(%) 肝脏指数(%)空白组 229.79 ±12.87 296.86 ±15.51 1.24 ±0.14 0.087 ±0.010 4.37 ±1.07玉米油组 228.15 ±14.10 292.16 ±25.83 1.30 ±0.05 0.091 ±0.004 4.55 ±0.28叶酸组 228.00 ±16.80 296.64 ±19.59 1.28 ±0.09 0.083 ±0.005 3.98 ±0.36 DEHP 组 229.37 ±11.06 298.12 ±22.04 1.00 ±0.12 0.070 ±0.009 5.48 ±1.17实验组 226.15 ±17.22 307.55 ±25.37 1.27 ±0.11 0.088 ±0.013 4.35 ±0.88

2.2 各组活胎数量、胎鼠体质量、胎盘质量比较DEHP组的活胎数量、胎鼠体质量及胎盘质量低于其他各组(P均＜0.05)，实验组与余各组相比，P均＞0.05。详见表2。

表2 各组活胎数量、胎鼠体质量、胎盘质量比较(±s)

表2 各组活胎数量、胎鼠体质量、胎盘质量比较(±s)

组别 活胎数量(个) 胎鼠体质量(g) 胎盘质量(g)空白组13.29 ±2.24 5.92 ±0.34 0.98 ±0.13玉米油组 12.60 ±1.86 5.88 ±0.33 1.03 ±0.10叶酸组 13.65 ±2.62 5.95 ±0.42 1.04 ±0.05 DEHP 组 8.68 ±2.69 4.33 ±0.43 0.92 ±0.08实验组12.34 ±2.19 5.78 ±0.53 1.04 ±0.10

3 讨论

DEHP具有良好的抗静电和耐低温性能，多年来广泛用于各种塑料产品、食品包装材料、玩具和医用材料的生产加工，同时也是其他化学工业产品及美容化妆品的重要成分［2］。加工过程中，由于DEHP与其他成分之间以氢键和范德华力连接，未形成化学共价键，随着使用时间的延长或接触到乙醇、油脂及受热后易于释出，挥发至外环境，难以降解，造成污染，并可在生物体内富集［3］，现已成为全球最为严重的化学污染物之一［4］。近年来国内外关于DEHP对人体的毒性作用报道较多［5］，由于女性特殊的生理特点和生活习惯，DEHP暴露的机会明显高于男性，因而引起了学者对DEHP与女性生殖健康关系的关注。Davis等［6］建立了DEHP雌性生殖毒性的动物模型和细胞模型，Lovekamp等［7］认为DEHP对雌性毒性作用的靶器官是卵巢，但对孕期补充叶酸与DEHP毒性作用关系的研究尚未见报道。

DEHP可经胃肠道、呼吸道和皮肤等多种途径进入机体，其中胃肠道为主要吸收途径，有研究报道，经口给予小鼠DEHP后，DEHP及其代谢产物可广泛分布于肝脏、血液、肾脏、胃肠道、生殖器官及脂肪组织中［8］。已有研究证实，DEHP及其代谢产物MEHP(邻苯二酸-单-2-乙基己酯)对子宫、卵巢具有毒性作用，其可促进子宫内膜增生，抑制排卵前颗粒细胞产生 E2，改变自然排卵周期［9，10］。DEHP 的作用具有剂量、时间、年龄依赖性，有学者发现胚胎期DEHP暴露可影响子代大鼠的发育［11］。还有研究表明，女性长期接触DEHP可引起受孕率下降和流产率升高，但其具体机制还不清楚［12］。王心等［13］研究发现妊娠期DEHP暴露可对母体及胎鼠造成损伤。本研究首先通过经口灌胃的方式使大鼠染毒，观察大鼠妊娠前后暴露DEHP对其妊娠结局的影响和胚胎毒性作用。结果显示，各组大鼠体质量均呈增长趋势，无显著性差异，表明DEHP染毒未对雌性大鼠生长产生明显的抑制作用，但DEHP可造成肝脏指数增加，卵巢、子宫指数降低，对雌性生殖器官造成损伤。本研究还发现DEHP组的活胎数量、胎鼠体质量及胎盘质量低于其他各组，表明DEHP具有胚胎毒性作用。有学者认为DEHP的雌性生殖内分泌毒性作用主要是通过其代谢产物MEHP作用于卵巢颗粒细胞，影响卵巢功能而实现的，提示妊娠前后应尽量避免接触DEHP。

叶酸是胚胎发育过程中必不可少的营养素，其可参与体内一碳单位的转移和代射，是合成核酸必需的元素，而核酸的合成又是细胞增殖、组织生长和机体发育的物质基础，叶酸缺乏可影响细胞分化、增殖及其功能。已有研究证实叶酸不仅与胎儿神经管缺陷、先心病有关，还与孕妇妊娠期高血压、流产、胎儿宫内发育受限、畸胎等有关［14］。本研究结果显示，经叶酸干预后，实验组孕鼠脏器指数、胎鼠数量、体质量及胎盘质量与DEHP组相比有显著性差异，接近其他各组，考虑叶酸对DEHP所致胚胎毒性具有一定的拮抗作用，可能与上述叶酸的生物功能有关。表明孕龄妇女妊娠前后适当补充叶酸制剂，有助于减少妊娠过程中DEHP暴露带来的不良影响，达到健康生殖的目的，至于叶酸拮抗DEHP胚胎毒性作用的机理，还有待进一步深入研究。

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