DC/CIK细胞治疗对肾功能的影响

安东建 柴 琴 汤 效 谭小浪 王伟明

长沙市中心医院肿瘤科，湖南长沙 410004

癌症是中国成年人死亡的主要原因[1]。目前，手术、化疗、放疗等抗癌手段未在疗效和生存获益方面取得突破性进展。然而，随着对肿瘤发生机制的深入了解和现代生物技术的飞速发展，自体细胞免疫治疗已成为癌症治疗的第4种重要手段，在肿瘤多学科综合治疗中起着不可或缺的作用[2]。DC/CIK细胞是与DC(Dendritic Cell，DC)共培养的 CIK细胞 (Cytokine Induced Killer cell，CIK)。DC/CIK细胞治疗是目前临床应用较多的自体细胞免疫疗法。作为一种新的治疗手段，对其不良反应的研究较少，特别对肾功能的影响罕有报道。该文总结该科2010年1月—2012年5月收集152例接受DC/CIK细胞治疗的癌症患者的肾功能资料，探讨DC/CIK细胞治疗对肾功能的影响，为临床安全使用提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

经病理学或细胞学确诊的晚期癌症152例，男97例,女55例。年龄21～83岁,中位年龄60岁。肺癌63例，肝癌14例，结肠癌12例，直肠癌8例，乳腺癌9例，胰腺癌5例，卵巢癌5例，鼻咽癌5例，宫颈癌4例，胃癌4例，食管癌3例，肾癌3例，淋巴瘤3例，喉癌2例，恶性黑色素瘤2例，胸腺癌2例，胆囊癌2例，输卵管癌1例，腹膜间皮瘤1例，脑胶质瘤1例，上颌窦癌1例，外耳道癌1例，膀胱癌1例。

1.2 方法

1.2.1 DC/CIK细胞培养与回输 抽取患者外周静脉血100 mL。随后，经淋巴细胞分离液进一步分离单个核细胞，用生理盐水洗涤3次,再将细胞分别进行DC及CIK细胞的培养。DC细胞在d 0天用含IL-4、TNF等细胞因子的培养基进行培养，隔天需半量换液，培养至第9天细胞成熟，再混入CIK细胞培养中，共同培养。

CIK细胞第0 d加入含IFN-γ、抗CD3单抗等的无血清生长培养基。24 h后加入含人重组IL-1、人重组IL-2等无血清生长培养基。 每2～3 d更换培养基1次,补加IL-2。培养至第9天时加入DC细胞共同培养。第11天时进行细菌、霉菌等微生物培养检测。第14天时收集DC/CIK细胞,将收集培养的细胞用无菌生理盐水洗涤3次,细胞分成6袋，每袋分别加入5%人血白蛋白配成150 mL含细胞的悬液进行静脉回输。每天回输1次,每次回输细胞数量在1.5～2×109,连输6次为1个疗程,细胞总数在9～12×109之间。每个病人完成2个疗程。

1.2.2 肾功能检查 第1个疗程DC/CIK细胞回输之前，常规抽血做肾功能检查。第2个疗程DC/CIK细胞回输之后，再抽血做肾功能检查。依据前后2次肾功能检查结果，进行对比分析和评估。肾功能检查项目为：尿素（正常值1.7～8.3 mmol/L）、肌酐(正常值 44～97 μmol/L）、尿酸(正常值 142～420 μmol/L）。

1.2.3 评价标准 肾功能检查结果按WHO抗癌药物毒性反应分度标准，进行分级和评估。

2 结果

152 例患者在接受DC/CIK细胞治疗前，肾功能正常。在完成2个疗程的DC/CIK细胞治疗后，有12例出现肾功能异常，发生率为7.9%，如表1所示。

表1 肾脏毒性反应

3 讨论

DC细胞是目前已知的功能最强的抗原提呈细胞，具有极强的刺激活化初始T淋巴细胞能力，介导Thl型细胞免疫，从而发挥对肿瘤细胞的杀伤作用[3-4]。CIK细胞是将人外周血单个核细胞在体外用多种细胞因子共同培养一段时间后获得的一群异质细胞[5],具有T淋巴细胞强大的抗瘤活性和非主要组织相容性复合体(MHC)限制性杀瘤的特点[6-7]。DC/CIK细胞是与DC共培养的CIK细胞，具有增殖速度快、抗肿瘤作用强大、杀瘤谱广、安全性较高的特性[8-9]。

肾脏的基本功能是排泄体内的代谢废物。随着人口老化的加剧，肾脏急性损害的发生逐渐增多[10]。肾小球是肾脏的基本功能单位，具有滤过血浆形成原尿，辅助排泄代谢产物（例如含氮类废物尿素、肌酸、肌酐、尿酸、各种胺类等）及维持体液酸碱平衡等作用，肾小球滤过功能是否正常对预防肾脏疾病至关重要[11]。

DC/CIK细胞治疗肿瘤有一定疗效，临床应用已有多年。然而，对其毒副作用的研究较少，如何确保临床安全使用，还应开展进一步的研究工作。该研究发现，单纯使用DC/CIK细胞治疗肿瘤，大约7.9%的患者发生急性肾功能损害，虽然绝大多数为I度损害，患者无明显的临床表现，经对症处理后，本组也无一例发生肾功能衰竭。但是，如果不给予高度重视，不能早期发现，早期处理，仍有可能导致严重后果。本组病例发生急性肾功能损害的原因比较复杂，可能与以下因素有关：①本组病例均为晚期癌症患者，一般状况较差，每日进食量和饮水相对较少。②年龄偏大，多数在60岁以上。③DC/CIK细胞输入人体后，短时间内大量杀伤肿瘤细胞，肿瘤细胞释放大量核酸，导致高尿酸血症。尿酸沉积于肾小管，引起急性肾功能损害[12]。④部分患者会出现癌性恶病质，其发生的重要机制之一就是蛋白质代谢异常，主要表现为骨骼肌蛋白消耗增加、瘦组织群下降、内脏蛋白消耗，导致蛋白质合成减少而分解增加，血清尿素、血肌酐升高，形成氮质血症，损害肾功能[13-14]。⑤DC/CIK细胞在培养时，需加入一定量的白细胞介素-2。文献报道，白细胞介素-2可引起如少尿、低血压、血肌酐升高等毒性反应[15]。

[1]Jiang He,Dongfeng Gu,Xigui Wu,et al.Major causes of death among men and women in China[J].The New England journal of Medicine,2005,353(11):1123-1134.

[2]Porter DL,Hexner EO,Cooley S,et al.Cellular adoptive immunotherapy after autologous and allogeneic hematopoietic stem cell transplantation[J].Cancer Treat Res,2009,144(2):497-537.

[3]KleindienstP.WietheC，LutzMB，eta1.SimultaneousinductionofCD4Tcell tolerance and CD8 T cell immunity by semimature dendritic cells[J]．J lmmunol，2005（174）:3941-3947．

[4]Dhodapkar MV，Steinman RM．Antigen-bearing immature dendritic cells induce peptide-specific CD8(+)regulatory T cells in vivo in humans[J]．Blood，2002（100）：144-177．

[5]Schmidt-Wolf IG,Lef terova P,Mehta BA,et al.Phenotypic characterization and identification of effect or cells involved in tumor cell recognition of cytokine-induced killer cells[J].Exp Hematol,1993,21(13):1673-1679.

[6]Nagaraj S,Ziske C,Schmidt-Wolf IG.H uman cytokine-induced killer cells have enhanced in vitro cytolytic activity via non-viral interleukin-2 gene transfer[J].Genet Vaccines Ther,2004,2(1):12-16.

[7]Verneris MR,Kornacker V,M ailander V,et al.Resistance of ex vivo expanded CD3+CD56+T cells to Fast-mediated apoptosis[J].Cancer Immunol Immunother,2000（49）:335-3451

[8]Choudhury A，Palma M，Mellstedt H．The future of cancer vaccines for non-small cell lung cancer:Ongoing trials[J].Clin Lung Cancer，2008（9）：37-44．

[9]Tuyaerts S，Van Meirvenne S，Bonehill A，et al．Expression of human GITRL on myeloid dendritic cells enhances their immunostimulatory function but does not abrogate the suppressive effect of CD4+CD25+regulatory T cells[J].J Leuko Bio，2007，82(1):93-105．

[10]Xue J L，Daniels F，Star R A，et al．Incidence and mortality of acute renal failure in medicare beneficiaries，1992 to 2001[J].J Am Soc Nephrol，2006（17）:1135-1142．

[11]Quaggin SE，Kreidberg JA．Development of the renal glomerulus:good neighbors and good fences[J].Development，2008，135(4):609－620．

[12]Montesinos P,Martin G,Perez-Sirbent M.Identificaion of risk factors for tumor lysissyn-drome in patients with acute myeloid leukemia:Development of a prognostic score[J].Blood,2005（106）:1843.

[13]吴国豪.恶性肿瘤病人恶病质发生机制及营养治疗[J].外科理论与实践，2012，17（2）：98-101.

[14]金惠铭，王建枝.病理生理学[M].7版.北京：人民卫生出版社，2008：248-257.

[15]Romo de Vivar Chavez A,de Vera ME,Liang X,et al.The biology of interleukin-2 efficacy in the treatment of patients with renal cell carcinoma[J].Med Oncol,2009,26(1):3-12.