药效学优化蒙药“协日嘎－4”喷雾剂的提取方法

郭 建 张 涛 宋宏春

(1.内蒙古自治区人民医院，内蒙古 呼和浩特 010050;2.内蒙古医学院2006级研究生，内蒙古 呼和浩特 010050)

“协日嘎 －4”是蒙医验方[1，2]，该处方是由姜黄、黄柏、栀子和蒺藜(微炒)4味药材组成，原剂型为洗剂，临床用于治疗真菌性皮肤病和细菌性皮肤病。拟将其剂型改革为现代剂型喷雾剂，以方便患者使用。

文献资料报道“协日嘎－4”4味药材中均含有抗真菌、细菌、抗炎和修复创伤的化合物。姜黄含有姜黄类物质，为二苯基庚烃类:包括姜黄素(含量为1.8% ～5.4%)、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素、二氢姜黄素和挥发油等[3，4]。其药理作用有抗病原微生物作用;姜黄的醇提取液、姜黄素和挥发油具有抗病原微生物、抗病毒的作用，其中对黑曲霉的抑制作用最强;姜黄乙醇提取物、姜黄素及其挥发油有抗革兰阳性菌作用，对金黄色葡萄球菌、卡他球菌有抑制作用。姜黄乙醇提取物、姜黄素及其挥发油还对鼠疟原虫有强抑制作用。姜黄挥发油洗剂具有抗石膏样毛癣菌感染作用[5，6]。黄柏含有生物碱类:黄柏树皮含小檗碱，药根碱，木兰碱，黄柏碱等[7]。其药理作用有抗病原微生物作用:黄柏水煎剂、醇浸剂在体外对大肠杆菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌等多种细菌有抑制作用;对多种皮肤真菌有不同程度的抑制作用;对阴道滴虫也有抑制作用。黄柏水煎剂有较强的杀钩端螺旋体的作用。黄柏对人结核杆菌、乙型肝炎表面抗原有抑制作用[8，9，10]。栀子含有环烯醚萜(甙)类:包括栀子甙即京尼平甙、羟异栀子甙和黄酮类化合物。药理作用有抗病原微生物作用:体外实验证明栀子浸液对痢疾杆菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌等有抑制作用。对部分真菌也有抑制作用。栀子浸液在体外可以杀死血吸虫的成虫及钩端螺旋体等。抗病原微生物作用[11，12，13]。蒺藜含有生物碱:哈尔满碱、哈尔明碱、黄酮、蒽醌类等。药理作用有抗病原微生物作用:蒺藜果实的水提物具有抗炎作用，能抑制金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的生长。蒺藜对甲型流感病毒57－4株具有较强的抑制作用。蒺藜只对少数的细菌和真菌有抑制作用效果，具有较弱的抑菌作用[14，15，16]。根据上述文献资料可知“协日嘎 －4”处方中药材的水煎液，醇提取液、挥发油提取液均有抗病原微生物作用。“协日嘎－4”喷雾剂应该选择怎样的提取工艺较为合理呢?本课题将依据循证医学的方法通过药效学优化蒙药协日嘎－4喷雾剂的提取工艺，为“蒙药协日嘎－4喷雾剂的制备工艺”提供科学的依据。

1 实验材料

1.1 药材:姜黄、黄柏、栀子、蒺藜(购于内蒙古惠丰药业)。

1.2 菌种

1.2.1 实验用医学真菌:包括白色念珠菌(C.albicams，编号为ATCC11006)、红色毛癣菌(T.rubrum)、石膏样小孢子菌(M.grpseum)、羊毛样小孢子菌 (M.lanosum)、犬小孢子菌(Microsporum Canis)。(白色念珠菌为内蒙古医学院微生物实验室提供的标准菌株;红色毛癣菌、石膏样小孢子菌、羊毛样小孢子菌及犬小孢子菌为内蒙古医学院第一附属医院皮肤科提供的临床菌株)。

1.2.2 实验用医学细菌:包括金黄色葡萄球菌(S.aureas，细菌号为26003)、炭疽杆菌(Bacillus?anthraci，细菌号为63601)、白色葡萄球菌(Staphylococcus，细菌号为26101)、变形杆菌(P.mirabilis，细菌号为49001)、绿脓杆菌(Pseudomonas，细菌号为 10102)、大肠杆菌 (E.coli，细菌号为44001)(实验用细菌为内蒙古医学院微生物实验室提供的标准菌株)。

3 培养基

1.3.1 浅部真菌及白色念珠菌选用沙氏麦芽糖蛋白胨琼脂基，通称沙堡弱培养基(Sabouraud dextrose agar，SDA)，其成分为麦芽糖100g，蛋白胨25g，琼脂 50g，蒸馏水2500ml。

1.3.2 细菌培养基成分为营养琼脂20g，蒸馏水400ml。

1.3.3 制法:将上述不同培养基的成分各自混合后，121℃，15分钟灭菌后备用。

1.4 药物:实验用蒙药为内蒙古医学院药学院药剂实验室制备的协日嘎－4醇提取液、协日嘎－4水提取液、协日嘎－4混合提取液、协日嘎－4挥发油提取液;青霉素G阳标为标准药敏纸片，单位10mg，产地为杭州天和微生物试剂有限公司，批号为20080208，编号为Co23。

1.5 实验仪器:ESJ200－4型电子天平，沈阳龙腾电子有限公司;YXQG01型电热式蒸汽消毒器，隔水式电热恒温培养箱;试管、平皿、酒精灯、无菌白金耳、接种环、、游标卡尺。

2 实验方法与结果

2.1 协日嘎－4提取液的制备:协日嘎－4水提液的制备:按处方量称取药材，即姜黄100g、蒺藜100g、栀子80g、黄柏60g，加入处方量8倍量的水，提取3次，每次3小时，合并水提液，浓缩至终浓度为0.4690g/ml(以生药材计)，浓缩液备用。

协日嘎－4醇提液的制备:按处方配比，取上述四味药，加入8倍量60%乙醇，提取3次，每次3小时，合并醇提液，浓缩，回收乙醇，使药液终浓度为0.4690g/ml(以生药材计)。

协日嘎－4混和提取液的制备:按处方配比，取上述四味药，加入8倍量60%乙醇，提取3次，每次3小时，合并醇提液，浓缩，在药材中再加入处方量8倍量的水，提取3次，每次3小时，合并水提液，浓缩，将二者浓缩液合并，调整使其终浓度为0.4690g/ml(以生药材计)。

协日嘎－4挥发油提取液的制备:按处方配比称取药材，置挥发油提取器中，加入处方量8倍量的水，提取8小时，在水中加入少量的吐温－80，使挥发油溶解，浓度调整为0.4690g/ml(以生药材计)。

2.2 协日嘎－4提取液抑制真菌实验方法及结果:采用沙堡弱(SDA)培养基，分别制成含协日嘎－4提取液30%(0.1407g/ml)、20%(0.0938g/ml)、10%(0.0469g/ml)、5%(0.02345g/ml)的培养基，将白色念珠菌、羊毛样小孢子菌、红色毛癣菌、犬小孢子菌、石膏样小孢子菌的菌种分别接种在含不同浓度的药物培养管内及空白对照组，置于30℃温箱中，2周后观察，结果见表1。

表1 不同协日嘎－4提取液对真菌的抑制作用

由表1可知，协日嘎－4挥发油提取液各浓度组对真菌都无抑制作用;水提液只有30%组(0.1407g/ml)对真菌有抑制作用，其余浓度组都无抑制作用;醇提液20%组(0.0938g/ml)、30%组(0.1407g/ml)对真菌有抑制作用，其他浓度组无抑制作用;而混和提取液10%组(0.0469g/ml)、20%组(0.0938g/ml)、30% 组(0.1407g/ml)对真菌都有抑制作用，只有5%组(0.02345g/ml)无抑制作用。实验结果说明协日嘎－4挥发油提取液对真菌无抑制作用，水提液及醇提液对真菌均有一定的抑制作用，混合提取液抑制真菌的效果最好。

2.3 协日嘎－4提取液抑制细菌实验方法及结果:采用营养琼脂培养基，分别采用营养琼脂培养基，每个平皿放置两个直径为5mm的灭菌不锈钢小管，管内分别加入200ul(C=0.4690g/ml)的提取液和空白对照液，平皿内分别放入青霉素G(10ug)标准药敏纸片，置于37℃恒温培养箱中，24小时观察药物对细菌的作用。实验结果见表2。

表2 不同协日嘎－4提取液对细菌的抑制作用

由表2可知协日嘎－4挥发油提取液对各细菌都无抑制作用;水提液、醇提液及混合提取液对细菌都具有一定的抑制作用，且抑制作用相近。

3 结论

综合真菌抑制试验和细菌抑制试验结果确定，协日嘎－4喷雾剂的提取方法应该选择醇提加水提的混合提取方法，而不选择挥发油提取部分。

4 讨论

循证医学是近十余年来在临床医学实践中发展起来的一门新兴临床学科。其核心思想就是重视证据。近年来，有关在民族医药领域进行循证医学研究的讨论日益引起人们的重视。许多民族医药界人士认为，循证医学方法运用于民族医中药的研究，有助于促进民族医药的现代化，使民族医药的研究能够得到科学研究的证据支持。所以循证研究是民族医药前进的必由之路。本课题通过循证研究为“协日嘎－4”新剂型的开发提供科学的实验依据，使蒙药的应用更全面更广泛，为民族医药的繁荣和发展做出贡献。

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