吸烟合并慢性牙周炎患者龈沟液NO含量检测

高朋杰 王玮 解用江 王洪霞 王丽杰

一氧化氮(NO)是机体内重要的信使分子和效应分子，参与细胞信息的传递、介导细胞免疫和炎症毒性作用［1］。慢性牙周炎的病理改变是牙槽骨的破坏和吸收［2］。其发生机制主要是长期慢性炎症导致的血管调节功能失控，使局部血流动力学发生改变，导致局部牙槽骨组织血流量下降，造成局部骨代谢的失调［3］。而NO在此过程中发挥重要作用。吸烟是牙周炎的高危因素，可通过多种途径对牙周组织产生影响［4］。在此检测吸烟合并慢性牙周炎患者基础治疗前后龈沟液内NO含量的改变，结合牙周炎临床症状的改善来探讨吸烟与牙周炎的关系。

1 材料与方法

1.1 主要试剂与材料 Whatman3#滤纸条(2mm 10mm，3 m);NO免疫荧光试剂盒(biovision，美国);BP211 d万分之一电子天平(德国Sartorius公司);D-37520离心机(美国Thermo公司);时间分辨荧光读数仪(Wallac Victor2，美国)。

1.2 实验方法

1.2.1 病例选择 在大庆油田总医院口腔内科门诊选取20位以《牙周病学》(3版人民出版社)标准确诊患有广泛性慢性牙周炎患者，全口牙中有附着丧失和骨吸收。所有患者均无其他全身代谢性疾病，近3个月内没有服用过任何抗生素或激素类药物，半年内未接受过牙周治疗。妇女无妊娠。将20例患者随机分为吸烟组和不吸烟组。吸烟标准为每天吸烟10支以上或吸烟时间三年以上。所有患者均知情同意。

1.2.2 基础治疗前后牙周临床指标的检测 使用牙周探针对各组牙周炎进行牙周检查，每名患者选取双侧上下前后牙各一颗，记录牙周探诊深度(PD)、附着丧失(AL)，探诊出血(BOP)等。所有患者第一次就诊先进行口腔卫生宣教后施以必要咬合调整、龈上洁治术，牙面进行抛光。一周后复诊进行龈下刮治术、根面平整术。所有临床检查均由同一位医生完成。治疗过程中避免外源性高浓度亚硝酸盐的给入。吸烟者始终保持吸烟习惯。牙周基础治疗后4周复诊，再次检查上述 PD、AL、BOP 等指标。

1.2.3 龈沟液样本的采集 在基础治疗前每名患者仍选取上述双侧上下前后牙，清水漱口，吹干牙面，棉卷隔湿，用4条Whatman3#滤纸条分别插入取样每牙的颊腭(舌侧)、近中、远中牙周袋内，留置60 s后取出。将每颗牙的4条滤纸条作为1个样本，密封在液氮中保存待测试。牙周基础治疗后4周按同样方法采集龈沟液样品保存。

1.2.4 NO含量的检测 将装滤纸条的冷冻液从液氮中取出放入4℃冰箱中解冻，在每一个试管中加入300 μl三蒸水将4条滤纸条完全浸没，3000r/min 10min离心后将滤纸条丢去，保留上清液于4℃冰箱。采用NO免疫荧光检测试剂盒，按说明书进行操作，按所给公式换算出每个样本中硝酸盐和亚硝酸盐浓度，得出NO的浓度。

1.3 统计学方法 采用SPSS 11.5统计软件包进行统计分析，实验组与对照组计量资料的差异采用单因素方差分析或两独立样本t检验。基础治疗前后临床指标的差异采用重复测量数据的方差分析，P＜0.05表示差异有统计学意义。龈沟液NO含量计量资料差异采取两样本比较的t检验，检验标准a=0.01.

2 结果

2.1 治疗前，吸烟组与不吸烟组的各项牙周临床指标差异无统计学意义。治疗后，不吸烟组的下降幅度明显高于吸烟组。

表1 吸烟与不吸烟组基础治疗前后牙周指标比较()

表1 吸烟与不吸烟组基础治疗前后牙周指标比较()

牙周指标治疗后吸烟组 不吸烟组 P值 吸烟组 不吸烟组 P值治疗前＜0.05 AL(mm) 4.1±0.6 3.5±0.6 ＞0.05 3.5±0.9 2.4±0.7 P＜0.05 BOP(mm) 86 93 ＞0.05 53 26 P＜0.05 PD(mm) 4.7±0.5 4.6±0.6 ＞0.05 4.0±0.4 3.6±0.4 P

2.2 牙周基础治疗前后龈沟液NO含量比较。

表2 吸烟组和不吸烟组基础治疗前后NO含量比较(μmol/L，)

表2 吸烟组和不吸烟组基础治疗前后NO含量比较(μmol/L，)

测量时间NO吸烟组 不吸烟组治疗前＜0.017.21±2.13 5.33±1.28治疗后 5.01±0.6 1.37±0.21 P值 P＜0.01 P

3 讨论

正常人口腔内产生的NO是由L-精氨酸在一氧化氮合酶的催化下生成L-瓜氨酸时释放的。一些研究已证实NO对维持口腔内正常菌群的平衡以及抗微生物感染有直接影响。同时，适量的NO对牙周组织的健康及功能的正常发挥起着重要作用［5］。在牙周炎症状态下，血管内皮素的含量显著增高，NO的水平相应增高来对抗血管内皮素所造成的牙周组织小血管及微血管的强烈收缩，在此防御反应过程中，过量产生的NO使扩血管因子与缩血管因子之间的关系失衡，通过活化多重级联信号引发炎症级联瀑布反应，促进炎症发展［6］。NO的大量生成也能导致巨噬细胞、中性粒细胞等的自身凋亡，间接造成牙周组织的损伤。以前的动物实验研究也证实了牙周组织中的NO确实参与了牙周病的整个病理过程，在牙周炎的发生发展过程中起到重要作用［7］。大量流行病学调查资料显示［8，9］，吸烟可通过多种途径对牙周产生影响:吸烟可以使牙周组织缺氧;可以引起骨质疏松;降低免疫系统功能;还可使口腔内处于缺氧状态，牙周氧化还原电势下降，有利于厌氧菌生长［10］。

龈沟液来自并通过牙周组织，疾病时其中成分的变化可较准确反应牙周组织的状态。本研究利用特异性强、敏感性高、速度快的免疫荧光法检测牙周炎基础治疗前后龈沟液NO的含量并进行比较，同时观察牙周临床指标的变化情况，得出结论:吸烟与不吸烟患者基础治疗后龈沟液NO含量均下降，但吸烟者下降幅度较小，临床指标改善程度较差。提示基础治疗是牙周炎的常规治疗，对于吸烟合并慢性牙周炎的患者单纯采取基础治疗并不能根本解决炎症问题，戒除吸烟对慢性牙周炎的治疗有积极作用。同时提示我们直接取龈沟液样本测定NO含量而不是采用收集静脉血的方式测量其NO含量更容易被患者接受，对牙周炎活动期的诊断以及预防疾病的发展可能是一项简单易行的措施。

［1］李波.NO与牙周病周期性发病关系的研究.现代生物医学进展，2006，6(6):27-28.

［2］孟焕新.牙周病学.第3版.北京:人民卫生出版社，2008.

［3］陈世璋.牙周炎病人牙龈组织中ET和NO改变与局部骨吸收的研究.中国骨质疏松杂志，1999，5(#):40-43.

［4］孙晓强.吸烟对牙周炎病人牙龈组织中成纤维细胞及胶原纤维的影响.北京口腔医学杂志，2006，14(1):27-29.

［5］龚斌.一氧化氮在牙周组织中的生物学作用.口腔材料器械杂志，2002，11(2):80-81.

［6］Bian K，Ke Y，Yoshinoti K，et al.Proteomic modification by nitric oxide.J Pharmacol Sci，2006，101(4):271-279.

［7］Lohinai Z，Stachlewitz R，Viragl，et al.Evidence for reactive nitrogen species formation in the gingivomucosal tissue.Journal Dental Research.2001，80(2):470-475.

［8］Kluft C，Maat MPM.Sensitive bakers of inflammation make it possible to study the chronic process:the rise of interest in low levels of C-reactive ptotein.Vasc Pharmacal，2002，39(3):99-104.

［9］Ghezzi F，Franchi M，Raia L，et al.Elevated amniatic fluid C-reactive protein at the time of genetic amniacentesis is a marker for pretem delivery.Am J Obstet Gynecal，2002，2:268-273.

［10］王敏.吸烟与非吸烟着慢性牙周炎龈下福赛类杆菌的检验.临床口腔医学杂志，2006，22(8):478-480.