MCM5和Ki-67在前列腺癌组织中的表达及意义

刘馨莲，殷 舞

(1成都医学院病理学教研室，成都610083;2广西壮族自治区人民医院)

微小染色体维持蛋白(MCMs)是一组与DNA复制和细胞增生密切相关的蛋白家族［1］，其能与复制子结合，使DNA复制成为可能，是DNA复制启动和延伸的必需因子之一，属于一种与DNA复制有关的解链酶［2］。细胞增殖核抗原(Ki-67)是目前公认的评价细胞增殖状态的指标，其在病理诊断中应用最为广泛。2005年9月～2009年9月，我们观察了前列腺癌组织中MCM5和Ki-67的表达，旨在进一步探讨前列腺癌的发生机制。

1 材料与方法

1.1 材料 选择广西壮族自治区人民医院病理科前列腺癌组织标本50份(肿瘤组)，患者年龄52～86(73±8.4)岁，均经病理检查确诊，其中高分化12例、中分化15例、低分化23例;Jewett分期为A期8例、B期16例、C期17例、D期9例。另选取15份良性前列腺增生组织作为对照(增生组)。两组患者一般资料无统计学差异。主要试剂:MCM5单克隆抗体(NeomakersFremont公司)，鼠抗人Ki-67单克隆抗体与S-P试剂盒(北京中杉生物技术开发公司)，DAB试剂盒(福州迈新生物技术开发公司)。

1.2 MCM5和Ki-67表达检测 标本均经10%甲醛固定，普通石蜡包埋，4μm连续切片。采用免疫组化SP法检测MCM5和Ki-67表达:DAB显色。石蜡切片脱蜡水化后，微波抗原修复，过氧化酶阻断剂灭活内源性过氧化物酶活性，羊血清工作液封闭，滴加一抗4℃过夜，滴加生物素标记的二抗，滴加链亲和素—过氧化物酶溶液。DAB显色，苏木精复染。用已知宫颈鳞状细胞癌组织切片为阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照。结果判断标准:MCM5和Ki-67的阳性信号均定位于细胞核，呈棕黄色颗粒。以标记指数(LI)表示阳性表达情况:选取组织结构良好、背景清晰的不重复高倍视野10个(其中包括阳性信号集中区及稀疏区)，计算每高倍视野下100个肿瘤细胞中的阳性细胞数，取10个视野的平均值，即为LI。

1.3 统计学方法 采用SPSS13.0统计软件。计量数据采用±s表示，进行One-way ANOVA分析或组间均数差异t检验，Bivariate Correlation行相关性分析。检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 MCM5、Ki-67表达情况 肿瘤组及增生组MCM5 的 LI分别为 21.36 ±7.50、2.05 ±1.18，P ＜0.05;Ki-67 的 LI分别为13.56 ±6.62、1.05 ±0.53，P ＜0.05。

2.2 MCM5、Ki-67表达与前列腺癌临床病理参数的关系 见表1。

表1 MCM 5、K i-67表达与前列腺癌临床病理参数的关系(±s)

表1 MCM 5、K i-67表达与前列腺癌临床病理参数的关系(±s)

临床病理参数 n MCM5(LI) Ki-67(LI) P值病理分级高分化 12 13.67 ±1.83 6.75 ±1.54中分化 15 16.40±3.29 9.20±1.37 ＜0.05低分化 23 28.61 ±3.58 19.96 ±3.77临床分期A 期 8 12.88 ±1.64 6.13 ±1.46 B 期 16 15.50 ±2.61 8.63 ±1.09 ＜0 17 26.06 ±4.12 17.39 ±4.26 9 30.44 ±3.91 22.25 ±3.92.05 C 期D期

2.3 相关性分析 前列腺癌中MCM5与Ki-67表达呈正相关(r=0.954，P ＜0.01)。

3 讨论

细胞增殖失控、成熟受阻是肿瘤发生的重要机制之一。评价肿瘤细胞的增殖状态对研究肿瘤的生物学行为及提示预后有重要意义。

MCM蛋白是一类存在于真核生物中高度保守的蛋白质，其表达水平随细胞周期的进展而变化。G1早期，其同复制起始点识别复合物的结合被认为是DNA复制合成的开始，其表达水平在G1/S转换点达到峰值，当细胞进入G0期或分化、衰老时，MCM表达水平迅速下降甚至不表达［3］。说明MCM蛋白与细胞周期密不可分，是启动真核细胞DNA复制、调控细胞由G1进入S期的关键蛋白，可作为细胞增殖早期的特殊标记物［4］。MCM5是MCM蛋白复合物成分之一，其表达稳定，可直接反映MCM蛋白的表达水平，是判断细胞增殖的可靠标志物［5］。Murphy等［6］检测宫颈标本时发现，正常宫颈鳞状上皮中几乎没有MCM5表达，而在宫颈上皮内瘤变标本及宫颈鳞癌标本中MCM5的表达却逐渐增强，提示MCM5能较好反映肿瘤细胞的增殖特性，对肿瘤的诊断有一定意义。

Ki-67是目前在病理诊断中应用最为广泛的细胞增殖标记。研究显示，Ki-67在细胞的G0期不表达，到G1的中、后期出现表达，S期和G2期表达逐渐增强，在有丝分裂期达到高峰，分裂后迅速降解，半衰期为1 h左右。随着上皮细胞损伤程度增加，Ki-67表达率也明显升高［7］，但与MCM5相比，部分处于G1早、中期的增殖细胞不表达Ki-67，因此由Ki-67的表达水平估计的肿瘤的生长分数可能会低于实际的生长分数［1］。本研究肿瘤组MCM5、Ki-67表达均明显高于增生组，MCM5、Ki-67阳性表达与前列腺癌病理分级、临床分期均有相关性，前列腺癌组织中MCM5与Ki-67阳性表达呈正相关，提示MCM5、Ki-67表达水平与前列腺癌的发生、发展密切相关。

总之，MCM5和Ki-67在前列腺腺细胞增殖过程中起关键作用;MCM5较Ki-67更能反映癌细胞的增殖情况。MCM5蛋白表达水平可作为前列腺癌的辅助诊断指标并为判断预后提供依据。

［1］Stoeber K，Tlsty TD，Happerfield L，et al.DNA replication licensing and human cell proliferation［J］.JCell Science，2001，114(Pt11):2027-2041.

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［4］Maiorano D，Lutzmann M，Méchali M.MCM proteins and DNA replication［J］.Current Opin Cell Bio，2006，18(2):130-136.

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