乙型肝炎病毒DNA与血清标志物的检测结果分析

李亚威，张 征，孙静娜，赵小洁，赵 帅，代丽丽

（河北医科大学第一医院检验科，河北石家庄 050031）

·论 著·

乙型肝炎病毒DNA与血清标志物的检测结果分析

李亚威，张 征，孙静娜，赵小洁，赵 帅，代丽丽

（河北医科大学第一医院检验科，河北石家庄 050031）

目的探讨血清乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid，DNA）水平与HBV血清标志物（HBV-marks，HBV-M）的相关性。方法采用实时荧光定量PCR对649例HBV感染者血清标本中HBV-DNA含量进行检测，同时用酶联免疫吸附测定（enzyme linked immuno sorbent assay，ELISA）法检测其HBV-M。结果246例乙型肝炎e抗原（hepatitis B e antigen，HBeAg）阳性标本中HBV-DNA阳性率为100.0%，与HBeAg阴性标本的阳性率比较，差异有统计学意义（P＜0.01）；乙型肝炎表面抗原（hepatitis B s antigen，HBsAg）阳性标本和HBsAg阴性标本，HBV-DNA检测结果比较差异有统计学意义（P＜0.01）。结论患者血清HBV-DNA的阳性率与HBV-M的存在状态相关，采用实时荧光定量聚合酶链反应（fluorescent quantitative polymerase chain reaction，FQ-PCR）法检测HBV-DNA能更准确、直接地反映体内病毒复制情况。

肝炎，乙型；DNA；诊断试验，常规

乙型肝炎（乙肝）病毒（hepatitis B virus，HBV）感染是世界范围内流行的疾病，我国是HBV的高发区，HBV感染率60%～70%［1］，2006年乙肝血清流行病学数据表明，乙肝病毒表面抗原（hepatitis B s antigen，HBsAg）携带者为0.93亿，其中乙肝患者大约有3 000万。因此，准确、迅速的诊断对乙肝的治疗和预后极为重要。本研究采用先进的荧光定量聚合酶链反应（fluorescent quantitative polymerase chain reaction，FQ-PCR）技术检测血清HBV脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid，DNA）含量，并同时采用酶联免疫吸附测定（enzyme linked immuno sorbent assay，ELISA）法检测乙肝病毒标志物（HBV-marks，HBV-M），旨在探讨HBV-DNA与HBVM的关系，为乙肝的临床诊断、抗病毒药物的选择及疗效观察提供参考。

1 资料与方法

1.1 研究对象：649份血清标本来自我院2010年1—6月门诊及住院的乙型肝炎患者，其中男性278例，女性351例，年龄8～76岁，平均46岁。

1.2 检测方法：采用实时荧光定量 PCR检测HBV-DNA含量；采用ELISA法检测HBV-M。

1.3 试剂：HBV-DNA（FQ-PCR法）检测试剂由上海科华有限公司提供。HBV-M（ELISA法）试剂盒由上海科华生物工程有限公司提供。

1.4 仪器：杭州博日有限公司生产FQD-33A实时荧光PCR扩增仪，北京普朗新技术有限公司生产的DNX29620洗板机，DNM29602GM酶标仪。

1.5 统计学方法：应用SPSS11.5统计软件进行数据处理，计数资料以百分率表示，采用 χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

乙型肝炎e抗原（hepatitis B e antigen，HbeAg）（+）标本（第1～2组）共246例，HBV-DNA阳性率为100.0%，HBeAg（-）标本（第3～13组）共403例，HBV-DNA阳性率23.1%。HBsAg（+）标本（第1～6组）共339例，HBV-DNA阳性率为79.4%，HBsAg（-）标本（第7～13组）共202例，HBV-DNA阳性率0.0%。

HBeAg（+）标本与HBeAg（-）标本比较，差异有统计学意义（P＜0.01），二者HBV-DNA的平均含量差异有统计学意义（P＜0.01）。HBsAg（+）标本与HBsAg（-）标本比较，差异有统计学意义（P＜0.01），二者HBV-DNA的平均含量差异有统计学意义（P＜0.01）。见表1。

表1 血清HBV-M模式和HBV-DNA的FQ-PCR检测结果Table 1 The result between HBV-M and HBV-DNA FQ-PCR

3 讨 论

HBV感染的病原学诊断主要依靠免疫血清学方法检测HBV-M和分子生物学方法检测HBVDNA。HBV-M主要反映HBV的免疫状态，而HBV-DNA是病毒复制活动最直接和可靠的标志，也是HBV感染最为直接的证据［2］。

HBsAg是诊断HBV感染最灵敏、最常用的血清学标志物［3］。HBeAg与HBV-DNA具有非常高的相关性，是判断HBV复制的良好指标，HBV-DNA检出率最高（100.0%），而且测定均值也最高，HBV-DNA与HBeAg存在明显正相关，提示病毒复制活跃，传染性强，这也同样说明存在 HBeAg是HBV复制活跃的标志。小三阳组虽然HBeAg阴性，但病毒并没有停止复制，只是复制减缓或部分患者出现病毒基因变异。这样的感染更易对患者造成伤害，严重者可发展为肝硬化或肝癌［4］。HBsAg阳性而HBcAb阳性的HBV感染者中，HBV-DNA阳性的原因可能是HBV前C信号肽裂解位点变异后影响HBeAg的翻译后加工，导致大量的HBeAg前体在细胞中蓄积，这可能导致 HBV感染者血清HBeAg阴性，并改变病毒致病力［5］。在第 5组HBsAg，HBsAb阳性的7例患者中有2例HBVDNA阳性，检出率为29.9%，可能是其他血清标志物浓度太低而免疫法未检出。在第6组只有HBsAg阳性的5例患者中有1例HBV-DNA阳性，检出率为20.0%，这可能是HBV活跃的早期，血清中其他标志物还没有出现，因此也有传染的可能性。在第7～8组中，均未检出HBV-DNA，说明是既往感染或注射乙肝疫苗所致，HBV的复制受到较大程度的抑制，一般无传染性。在第9～13组中，均未检出HBV-DNA，可能是由于样本数量较小或检测方法、检测试剂、检测仪器灵敏度的差异等原因，从而导致这些表现模式的检出率低［6］。

综上所述，HBV-DNA定量测定是反映机体病毒复制状况的最敏感、特异的指标，而HBV-M则反映病毒感染后引起机体免疫应答的状况及转归过程［7］。HBV-DNA检测和血清学指标是互补共存关系，PCR技术与ELISA法技术的联合应用，在研究病毒感染量与临床病情的关系、评价和监测抗病毒药物疗效等方面具有重要指导作用。

［1］ 刘珍，陈建琳，唐兆武，等.2407例7月～12月龄儿童乙肝抗体滴度水平研究报告［J］.中国卫生检验杂志，2011，21（2）：499-500.

［2］ 谢建红，肖奇志，田芬，等.HBV血清学标志物结合HBVDNA定量检测临床研究［J］.临床和实验医学杂志，2011，10（3）：192-193.

［3］ 王晓东，李秀全，李凤焕，等.慢性乙肝血清标志物与HBV DNA水平的关系［J］.国际检验医学杂志，2006，27（12）：1070-1072.

［4］ 唐玫芳.乙型肝炎病毒DNA与血清标志物的关系［J］.检验医学与临床杂志，2010，7（1）：28-29.

［5］ HONDA A，YOKOSUKA O，SUZUKI K，et al.Detection of mutations in hepatitis B virusenhancer 2/core promoter and X protein regions in patients with fatal hepatitis B virus infection［J］. J Med Virol，2000，62（2）：167-176.

［6］ 李云，夏正武，瞿良.乙型肝炎血清学标志物与HBV DNA相关性分析［J］.国际检验医学杂志，2011，32（4）：442-443.

［7］ 成军，孙长贵，王国政，等.HBsAg阳性血清HBV DNA与HBV标志物定量测定的相关性特征［J］.国际检验医学杂志，2007，28（5）：385-387.

（本文编辑：赵丽洁）

THE ANALYSIS OF TEST RESULT BETWEEN VIRUS SERUM MARKERS AND NUCLEIC ACID OF HEPATITIS B VIRUS

LI Yawei，ZHANG Zheng，SUN Jingna，ZHAO Xiaojie，ZHAO Shuai，DAI Lili
（Department of laboratory，the first hospital of Hebei Medical University，Shijiazhuang 050031，China）

ObjectiveTo investigate the relationship between the level of hepatitis B virus（HBV）DNA and serum markers.MethodsFluorescent quantitative polymerase chain reaction（FQPCR）was used to detect the contents of serum HBV-DNA in 649 patients infected HBV and enzyme linked immuno sorbent assay（ELISA）was used to detect the immunological markers.ResultsThe positive rate of HBV-DNA was 100.0%in the hepatitis B e antigen（HBeAg）positive group.There was significant difference between HBeAg positive group and negative group（P＜0.01）.The positive rate of HBV-DNA was also significantly different between the hepatitis B s antigen（HBsAg）positive group and negative group（P＜0.01）.ConclusionThe positive rate of serum HBV-DNA is related to the mode of serum HBV markers.The result of serum HBV-DNA detected by FQ-PCR can reflect the replication of hepatitis B virus more correctly and directly.

hepatitis B；DNA；diagnostic tests，routine

R512.62

A

1007-3205（2012）09-1032-03

2012-01-13；

2012-03-16

李亚威（1979-），女，河北河间人，河北医科大学第一医院主管检验师，医学学士，从事分子生物学研究。

10.3969/j.issn.1007-3205.2012.09.015