葛根及葛根素对自然衰老小鼠CAT活力及H2O2含量影响的实验研究

李东子 吴景东

[摘要]目的：研究与探讨葛根对小鼠自然衰老的延缓作用。方法：健康4月龄雌性昆明种小鼠15只，作为青年对照组（A）；健康18月龄雌性昆明种小鼠90只，随机分为6组：老年空白对照组（B）、老年阳性对照组（C）、老年葛根中剂量组（D）、老年葛根高剂量组（E）、老年葛根素中剂量组(F)、老年葛根素高剂量组（G）。以灌胃方式给药，以生化分析方法测定过氧化氢酶（CAT）及过氧化氢（H2O2）含量的影响。结果：与青年对照组比较，其余六个老年组CAT的活力下降，H2O2含量显著增高；与老年空白对照组比较，其余五个老年用药组均可提高CAT活性，降低H2O2含量。结论：葛根及葛根素具有延缓小鼠自然衰老的作用。

[关键词]葛根；葛根素；自然衰老；过氧化氢酶；过氧化氢

[中图分类号]R332Q591.2[文献标识码]A[文章编号]1008-6455（2012）01-0082-02

Effect of radices puerarire and puerarin on activities of CAT and content of H2O2 of naturally senile mice

LI Dong-zi,WU Jing-dong

(1.Sahmyook University,South Korea 100-000;2.Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Shenyang 110032，Liaoning，China)

Abstract:ObjectiveTo study and discuss that radices puerarire and puerarin have function on delaying naturally senile mice.MethodsHealthy 4 month old mice were 15, as the young control group (A); healthy 18 month old mice were 90 as the elderly group, and then randomly divided into 6 groups:elderly control group (B), positive control group elderly (C),middlepuerarin dose group(D), high puerarin dose group(E), middle radices puerarire dose group(F),high radices puerarire dose group(G). Giving medicine by filling stomach. Determined by biochemical analysis of CAT and H2O2 content.ResultsCompared with the young control group,the remaining mice in each six elderly aged group's the vitality of CAT decreased significantly, H2O2 in serum were significantly higher. Compared with the elderly control group, treatment group of other elderly can improve the vitality of CAT and reduce H2O2 content.ConclusionRadices puerarire and puerarin have function on delaying the naturally senile mice.

Keyword：radices puerarire; puerarin; aging; CAT; H2O2

葛根为常用中药，是豆科植物野葛或干葛藤的干燥根，干葛藤又可称为粉葛，始载于《神农本草经》，被列为中品，有“山人参”的美称。葛根性平，味甘辛，具有发表解肌、开阳透疹、解热生津等作用。现代研究表明，葛根具有多种药理作用，如抗心律失常、降血糖、抗氧化、抗癌等。本课题通过观察葛根及葛根素对自然衰老小鼠血清中CAT活力及H2O2含量的影响，探讨葛根及葛根素是否具有抗皮肤衰老的作用，为研究和开发延缓衰老的药物提供实验依据。

1材料和方法

1.1 实验动物及分组方法：健康雌性4月龄昆明种小鼠15只，作为青年对照组(A)；健康雌性18月龄昆明种小鼠90只作为老年组，再随机分成6组，每组15只：老年空白对照组(B)、老年阳性对照组(C)、老年葛根中剂量组(D)、老年葛根高剂量组(E)、老年葛根素中剂量组(F)、老年葛根素高剂量组(G)。

1.2 实验药物及给药方法：实验药物：中药葛根（由辽宁中医药大学附属医院中药药剂科提供）；葛根素（购自成都曼斯特生物科技有限公司）；维生素EC混悬液（购于成大方圆药房，药品批号，国药准字H11022348北京双鹤药业股份有限公司），将维生素EC颗粒与蒸馏水制成混悬液；0.9%生理盐水，购于成大方圆药房，国药准字h22022056吉林省广春药业有限公司。以上药物制备完成后置4℃冰箱备用。

给药方法：A组：给予生理盐水(20ml/kg)；B组：给予生理盐水(20ml/kg)；C组：给予维生素EC混悬液(30mg/kg)；D组：给予中药葛根(60mg/kg)；E组：给予中药葛根(100mg/kg)；F组：给予葛根素混悬液(60mg/kg)；G组：给予葛根素混悬液(100mg/kg)。以上操作每日一次，连续进行30天。

1.3 取材方法：第31天采用眼球后静脉丛取血法，将取得的小鼠血液放入离心机中离心8 min，转速为3 500r/min，抽取上清液即小鼠血清放入带盖离心管中，冷冻于-20℃冰柜中保存，待进行指标测定。

1.4 主要试剂和仪器：CAT及H2O2试剂盒，均购于南京建成生物工程研究所。各项指标的测定均按照试剂盒说明书进行测定，采用化学比色法。

BLG10电子秤、AnKeTDL-5-A离心机、水浴箱、酶标仪（美国）等设备及其它实验器材均由辽宁中医学院中心实验室提供。

1.5 统计学处理：所有数据均通过SPSS11.5 版本软件进行处理，各组实验参数以x±s表示，组间差异按方差分析进行显著性检验，并用最小显著差法（LSD法）作两两比较。

2结果与分析

2.1 小鼠血清中CAT的活力：与青年对照组比较，其余六个老年组小鼠血清中CAT的活力显著下降，分别是P﹤0.05，P﹤0.05，P﹤0.01，P﹤0.01，P﹤0.01，P﹤0.01。与老年空白组比较，其他老年用药组小鼠血清中CAT的活力均有提高， P﹤0.01，P﹤0.01，P﹤0.01，P﹤0.01，P﹤0.01。见表1。

2.2 小鼠血清中H2O2的含量：与青年对照组比较，其余五个老年各组小鼠血清中H2O2含量显著增高，分别是P﹤0.01，P﹤0.01，P﹤0.01，P﹤0.01，P﹤0.01，P﹤0.01。与老年空白组比较，其他老年用药组均可降低H2O2含量，分别是P﹤0.01，P﹤0.01，P﹤0.01，P﹤0.01，P﹤0.01。见表2。

3讨论

衰老一种多环节的生物学过程，是机体在退化时期功能下降和紊乱的综合表现，简而言之，衰老就是体内各脏器细胞功能减低的现象。到目前为止，有关衰老机理的理论提出了很多，其中自由基学说虽还不能完全解释衰老的过程，但自由基和衰老之间的密切联系已被大家所认同。

自由基（Free Radicals）衰老学说认为[1]：体内许多物质代谢过程中会产生过氧化的自由基，当机体内的自由基代谢处于不平衡状态时，过量的自由基就会引起机体损伤，将不饱和脂肪酸氧化成超氧化物，形成脂褐素。脂质过氧化反应对生物膜内类脂结构的破坏极大，生物膜上不饱和脂肪酸过氧化后，双层结构破坏，膜功能受损，致细胞器功能障碍。

过氧化氢是生物氧化过程的产物[2]。对大多数组织来说，H2O2可能是一种毒物，H2O2可以氧化某些具有重要生理作用含巯基的酶和蛋白质，使之丧失活性，还可以将细胞膜磷脂分子中高度不饱和脂肪酸氧化成过氧化物，产生过氧化脂质，后者又通过自身催化作用连续生成大量过氧化物，结果使磷脂的功能障碍。过氧化脂质与蛋白质结合形成的复合物，进入溶酶体，不易被酶分解排出，可累积形成一种棕褐色的色素颗粒，称为脂褐素，在皮肤上可形成老年斑，与衰老有关。过氧化氢酶，其是过氧化物的清除剂，CAT催化过氧化氢分解为水和氧气，从而保护细胞膜的结构及功能不受氧化物的损害[3]。

葛根为豆科植物野葛或干葛藤的干燥根，干葛藤又可称为粉葛。葛根为常用中药，始载于《神农本草经》，被列为中品，有山人参之美称。其性平，味甘辛，具有发表解肌、开阳透疹、解热生津等作用，还具有较强的活血化淤，舒筋活络，升阳止泻作用，对心血管系统、免疫系统等疾病有较好的治疗效果[4]。葛根的药用价值很大，现代医学证明其富含人体必需的氨基酸和多种微量元素，具有多种药理作用，如抗心律失常作用、对高血压高血脂的治疗作用、降血糖作用、抗氧化作用、抗癌作用、对雌激素的调节作用、对记忆的影响对免疫作用的影响等。

临床上葛根的常用量为15～30g/天 ,大剂量者可用到50～100g/天 ,亦未见不良反应,所以葛根的临床使用比较安全。葛根素的LD50高达78.1mg/kg，有关不良反应,甚至罕见不良反应也不断见于文献,临床上应予以高度重视[5]。

结合本实验结果，可得出葛根及葛根素可以提高自然衰老小鼠血清中过氧化氢酶（CAT）活性，降低过氧化氢（H2O2）含量。葛根及葛根素通过清除氧自由基，对小鼠自然衰老进程有一定的控制和影响作用，可起到抗氧化作用。

[参考文献]

[1]郝祥俊,颜勇.重要抗衰老研究近况[J].承德医学院学报,2006,23(1):75.

[2]韩晓琳.H2O2和细胞凋亡[J].济宁医学院学报,2006,29(1):68-69.

[3]傅玉娟,吴景东.绞股蓝提取液对光老化模型小鼠皮肤组织中CAT、GSH-Px活性与H2O2含量影响的实验研究[J].中医药学刊,2005, 23:216-217.

[4]徐国钧,何宏贤.中国药材学[M].北京:中国医药科技出版社,1996:249.

[5]王波,张俊斌.葛根素的非常规应用及毒副作用[J].数理医药学杂志,2010,23 (2):209-210.

[收稿日期]2011-07-23[修回日期]2011-11-15

编辑/张惠娟