金黄色葡萄球菌甲氧西林耐药辅助基因femB的克隆和原核表达

邹明祥　武文君　李军　邬国军　张宁洁　刘文恩　范学工

摘要：金黄色葡萄球菌femB基因与甲氧西林高水平耐药密切相关，可能成为开发抗MRSA药物的新靶位以金葡菌基因组DNA为模板，PCR扩增femB全长基因，所得片段与pGM-T载体连接并转化感受态大肠杆菌DH5a，阳性克隆以PCR、双酶切及测序鉴定，将鉴定正确的目的片段定向克隆到pGEX-4T-1表达载体中，转化至大肠杆菌BL21后经IPTG诱导表达GST／FemB融合蛋白；采用SDS-PAGE及Westrn blot对融合蛋白进行鉴定，结果显示，重组质粒在宿主菌中获得了高效表达，融合蛋白相对分子质量为75 kD，该融合蛋白可与抗GST－tag抗体特异结合；表明femB基因的原核表达系统构建成功，为进一步研究其生物学功能奠定了基础。