食用菌菌种保藏技术

刘小娟

[摘要] 1.菌种保藏原理：菌种保藏的方法很多，但原理大同小异。2.菌种保藏的方法3.液体石蜡保藏法。然后用无菌操作的方法把液体石蜡注入待保藏的斜面试管中。4.沙土管保藏法。5.滤纸片保藏法。取白色（收集深色孢子）或黑色（收集白色孢子）滤纸，剪成4×0.8cm的小纸条，平铺在培养皿中用纸包裹进行灭菌（1kg/cm2，30min）。将载有孢子的滤纸条放入保藏试管中，再将保藏试管放入干燥器中1-2d，除去滤纸水分，使滤纸水分含量达2%左右，然后低温保藏。（1）麦粒保藏法：（2）麸曲保藏法。1拌匀，装入小试管，每管约装1/3高度，加棉塞用纸包扎，高压灭菌（1.5kg/cm2，30min），经无菌检查合格后备用，将生长在斜面培养基上的健壮菌种，移种至无菌麸曲管中，移种时注意尽管捣匀小试管中的麸皮，呈疏松状态，在适温下培养至菌丝长满麸皮为止，将麸曲小管置干燥器中，在低温或适温下保藏。（3）生理盐水保藏法。

[关键词] 食用菌；菌种；保藏技术

一、菌种保藏原理

菌种保藏的方法很多，但原理大同小异。首先要挑选优良纯种。利用微生物的孢子、芽孢及营养体；其次，根据其生理、生化性，人为创造低温、干燥或缺氧等条件，抑制微生物的代谢作用，使其生命活动降低到极低的程度或处于休眠状态，从而延长菌种生命以及使菌种保持原有的性状，防止变异。

二、菌种保藏的方法

1.低温定期移植保藏法

将需要保藏的菌种接种在适宜的斜面培养基上，适温培养，当菌丝健壮地长满斜面时取出，放在3-5℃低温干燥处或4℃冰箱、冰柜中保藏，每隔4-6个月时间移植转管一次，具體应根据菌种特性决定。保藏时要注意环境温度不能太高，以防霉菌通过棉塞进入管内。

2.液体石蜡保藏法

取化学纯液体石蜡（要求不含水分、不霉变）装于三角瓶中加棉塞并包纸，在1kg/cm2压力下灭菌1h，再放入40℃恒温箱中数天，以蒸发其中水分，至石蜡油完全透明为止。将处理好的石蜡油移接在空白斜面上，28-30℃下培养2-3d，证明无杂菌生长方可使用。然后用无菌操作的方法把液体石蜡注入待保藏的斜面试管中。

3.沙土管保藏法

取河沙用水浸泡洗涤数次，过60目筛除去粗粒，再用10%盐酸浸泡2-4h，除去其中有机物质，再用水冲洗至流水的pH达到中性，烘干备用。同时取贫脊土或菜园土用水浸泡，使呈中性，沉淀后弃去上清液，烘干碾细，用100目筛子过筛，将处理好的沙与土以（2-4）：1混匀，用磁铁吸出其中的铁质，然后分装小试管或安瓿内，每管装量0.5-2g，塞棉塞，用纸包扎灭菌（1.5kg/cm2，1h），再干热灭菌（160℃，2-3h）1-2次，进行无菌检验，合格后使用。

4.滤纸片保藏法

取白色（收集深色孢子）或黑色（收集白色孢子）滤纸，剪成4×0.8cm的小纸条，平铺在培养皿中用纸包裹进行灭菌（1kg/cm2，30min）。采用钩悬法收集孢子，让孢子落在滤纸条上。将载有孢子的滤纸条放入保藏试管中，再将保藏试管放入干燥器中1-2d，除去滤纸水分，使滤纸水分含量达2%左右，然后低温保藏。

5.自然基质保藏法

（1）麦粒保藏法：取无瘪粒、无杂质的小麦淘洗干净，浸泡12-15h，加水煮沸15min，继续热浸15min，使麦粒胀而不破，沥干水分摊开晾晒，使麦粒的含水量在25%左右。将碳酸钙、石膏拌入熟麦粒中（麦粒、碳酸钙、石膏比例为10kg：133g：33g），拌和均匀后装入试管中，每管约2-3g，然后清洗试管，塞棉塞，灭菌1.5（1.5kg/cm2，2h），经无菌检查合格后备用，试管基质冷却后接种，适温培养，待菌丝长满基质后用石蜡涂封棉塞，放低温保藏。2年左右转接一次。

（2）麸曲保藏法。取新鲜麸皮，过60目筛除去粗粒。将麸皮和自来水按1：1拌匀，装入小试管，每管约装1/3高度，加棉塞用纸包扎，高压灭菌（1.5kg/cm2，30min），经无菌检查合格后备用，将生长在斜面培养基上的健壮菌种，移种至无菌麸曲管中，移种时注意尽管捣匀小试管中的麸皮，呈疏松状态，在适温下培养至菌丝长满麸皮为止，将麸曲小管置干燥器中，在低温或适温下保藏。

（3）生理盐水保藏法。取纯氯化钠0.7-0.9g，放入100%毫升蒸馏水中，搅拌均匀分装试管，每管5-10mL，进行灭菌（1kg/cm2，30min），经无菌检查合格后备用，将待保藏的菌种接入马铃薯葡萄糖液体培养基中适温振荡培养5-7d。

（4）冷冻真空干燥法。将已培养、生长丰富的菌体或孢子悬浮于灭菌的血清、卵白、脱脂奶制成菌悬液，将悬液以无菌操作分装于灭菌的玻璃安瓿瓶中，每管约0.3-0.5mL，然后用耐压橡皮管与冷冻干燥装置连接，安瓿瓶放在冷冻槽中于-30℃至-40℃迅速冷冻，并在冷冻状态下抽空干燥，并在真空状态下熔封安瓿，在-20℃保存，一般可保存十年以上，但成本较高。