苣荬菜中木犀草素的检测方法研究＊

杨智峰 李彤晖 蒙麦侠 辛智科 陕西省中医药研究院（西安710003）

苣荬菜是陕西地方习用药材“北败醬”的主要来源，1977年版《中国药典》一部收载过。在陕西分布广、产量大，干燥幼嫩全草临床主要用于治疗阑尾炎、肠炎、痢疾，疮疖痈肿，产后瘀血腹痛和痔疮。多年来一直缺乏切实可靠的检测手段，使市场监管和临床用药安全有效保障乏力，为此，我们研究了其中木犀草素的富集方法和检测方法。

1 仪器和试药 1.1 仪器 高效液相色谱仪（LC－2010AHT型，日本岛津），CLASS－VP色谱数据工作站；电子分析天平（型号：BP211D，d＝0.01mg，德国赛多利斯天平有限公司）；超声波清洗器（型号：KQ－100，昆山市超声仪器有限公司）；UV－8型三用紫外仪（无锡科达分析仪器厂）。

1.2 试药 乙腈为色谱纯，购自陕西科仪科技有限公司；水为纯净水；三氯化铝、甲醇、甲酸、三氯甲烷、丙酮、氨水和冰乙酸均为分析纯。木犀草素对照品（供含量测定用，批号111720－200905，购自中国生物制品检定所）；聚酰胺－6薄层板（浙江四青或国药集团）；样品北败酱1＃采自陕西太白县（2009.07.16），2＃采自陕西太白县（2006.07.10），3＃购自甘肃天水（2004.04.17），4＃购自西安市万寿路药材市场，5＃购自陕西宝鸡市（2005.08.30），6＃购自甘肃（2004.04.16），7＃来自西安盛兴饮片厂（2008.09.12），8＃来自华阴胜福中药饮片厂（2005.10.12），9＃陕西省食品药品检验所（2011.07.19）。

2 方法与结果 2.1 目标成分富集和薄层鉴别方法 取本品粉末10.0g，置具塞锥形瓶中，加石油醚（60～90℃）浸泡1h，回流两次，依次加石油醚100和80mL，每次回流1h，放冷，过滤，滤液弃去，滤渣挥干，加甲醇浸泡1h，回流2次，依次加甲醇100和80mL，每次1h，放冷，滤过，滤液蒸干，残留物用15～20mL温水溶解，上聚酰胺柱（柱高15～17cm，内径1.4cm），60mL水洗（可加压），洗脱液弃去，体积分数为30%乙醇60mL洗，洗脱液弃去，体积分数为50%乙醇80mL洗，洗脱液弃去，体积分数为70%乙醇80mL洗，洗脱液蒸干，用甲醇1.6mL使溶解，作为供试品溶液。另取木犀草素对照品适量，加甲醇制成1mL含木犀草素1.5mg的对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010版一部附录ⅣB）试验，吸取上述两种溶液各0.5μL，点于同一聚酰胺－6薄层板（浙江四青或国药集团）上，以甲醇－丙酮－－冰乙酸（12︰5︰0.8）为展开剂展开，取出，晾干，喷50g·L－1三氯化铝乙醇液，氨气薰蒸，日光下或置紫外灯（365nm）下检视。供试品色谱与对照色谱在相应的位置上有相同的黄色或黄绿色斑点。或吸取上述两种溶液各1.5μL，点于同一以0.25%的CMC－Na为黏合剂的硅胶G板上，以氯仿－甲醇－甲酸（18︰3︰0.8）为展开剂展开，取出，晾干，喷50g·L－1三氯化铝乙醇液，氨气薰蒸，置日光下或紫外灯（365nm）下检视。供试品色谱与对照色谱在相应的位置上有相同的暗黄色或黄绿色斑点。

2.2 含量测定方法 2.2.1 色谱条件：Lichrosper C18色谱柱（250×4.6mm，5μm），柱温：35℃，流动相：乙腈－0.4%磷酸（24：76），流速：1mL·min－1，检测波长：348nm，进样量：10μL。

2.2.2 对照品溶液的制备：精密称取木犀草素对照品3.93mg，加甲醇定容于25mL量瓶中，制成每1mL含0.1572mg的储备溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备：取北败酱药材细粉约2.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称质量，超声处理40min，取出，放凉，称质量，用甲醇溶液补足质量，过滤。精密吸取续滤液10mL，置圆底烧瓶中，精密加盐酸1mL，称质量，加热回流2h，放冷，称质量，用甲醇溶液补足重量，过滤，以0.45μm的微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.2.4 分离效果：在上述色谱条件下，分别吸取稀释10倍的对照品储备液和样品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，可见木犀草素分离效果良好（见图）。

高效液相色谱图 A 对照品；B 供试品；1 木犀草素

2.2.5 方法学考察：2.2.5.1 线性关系考察：精密吸取稀释10倍量后的木犀草素对照品储备溶液（0.01572mg·mL－1）2、4、6、8、10、12μL，注入液相色谱仪，记录峰面积，以峰面积（A）为纵坐标对进样量（μg）为横坐标进行线性回归，得回归方程：Y＝2000000 X＋39506，r＝0.9995。结果表明：在0.0314～0.1886μg范围内，对照品峰面积值与进样量呈良好的线性关系。

2.2.5.2 样品处理之超声时间考察：分别称取北败酱药材（2009.07.16）约2.0g，3份，超声处理分别为：30、40和50min，其余按2.2.3方法和2.2.4方法进行。结果表明：超声40min，药材中木犀草素的提取量最大且随时间推移提取量不再增加，说明药材中的木犀草素已提取完全，故确定之。

2.2.5.3 样品处理之盐酸用量考察：分别称取北败酱药材（2009.07.16）约2.0g 3份，精密加盐酸分别为1、2和4mL，其余按2.2.3方法和2.2.4方法进行。结果表明：加入盐酸量1mL时，药材中木犀草素的提取量最大且随酸度增加不再增加，故确定之。

2.2.5.4 精密度实验：精密吸取对照品溶液和供试品（2009.07.16）溶液各10μL，重复进样6次，记录峰面积，计算RSD分别为1.83%，0.50%。对照品和样品的精密度良好。

2.2.5.5 稳定性实验：精密称取北败酱药材（2009.07.16）约2.0g，按2.2.3方法进行，即得供试品溶液。分别在0、2、4、8、12和24h，吸10μL注入液相色谱仪，记录峰面积，计算RSD为0.35%。表明供试品溶液在24h内稳定性良好。

2.2.5.6 回收率实验：称取已知含量的北败酱药材（含量0.01629%）约1.0g，6份，精密称取，均精密加入木犀草素对照品溶液（C标＝0.1572mg·mL－1）1mL，下按2.2.3方法和2.2.4方法进行。数据见表1，结果表明：回收率在95% ～105%之间，平均回收率为101.32%，说明该方法测定系统响应性好。

表1 回收率实验结果 （Results of recovery test）

2.2.5.7 样品测定：分别精密称定不同来源的北败酱药材2.0g，共8份，下按2.2.3方法和2.2.4方法进行，结果见表2。

表2 不同来源的北败醬的含量测定结果

3 讨 论 苣荬菜在东北用于虚弱咳嗽［1］，在河南用于乙型肝炎［2］，大家在归经方面缺乏共识，有人认为归肝、脾、大肠经［3－4］；在清湿热、消肿排脓和化瘀解毒功效［5－6］上大家认识趋于一致，有人对化瘀排脓存疑，认为用于产后瘀血腹痛效果不佳［7］。

从薄层分析实验看，苣荬菜中含有游离木犀草素，也有木犀草素苷类，因此，酸解法测定木犀草素含量，应为苷元和苷总含量，与文献报道［8－9］一致。

从样品含量测定结果结合药材性状，建议药材中的木犀草素含量应规定在0.018%以上，否则为劣药，当然与测定方法的精度有关。

［1］ 中国医学科学院药物研究所.中药志（4）［M］.北京：人民卫生出版社，1961：78.

［2］ 张洪民，渠桂荣，吴立军，等.裂叶苣荬菜的研究进展［J］.中草药，1997，28（11）：691－693.

［3］ 孔增科，李利军，付正良，等.败酱草、北败醬的鉴别与临床合理应用［J］.河北中医，2009，31（2）：270－271.

［4］ 缪寿平.败酱草及其混淆品的区别［J］.海峡药学，2002，14（6）：60－62.

［5］ 辛智科，杨智峰.浅谈北败醬的药材来源及应用［J］.陕西中医，2006，27（12）：1572－1573.

［6］ 冯锁民，鲁会侠，杨金玉，等.苣荬菜化学成分研究［J］.西北药学杂志，1998，13（3）：108.

［7］ 陈淑欣，王海英.败酱草混用浅析［J］.实用中医药杂志，2004，20（5）：275.

［8］ 肖培根.新编中药志（3）［M］.北京：化学工业出版社，2002：55－61.

［9］ 杨 亮，张亚峰，王立新，等.HPLC发测定北败酱中木犀草素的含量［J］.陕西中医，2008，29（3）：354－355.