紫外可见及二极管阵列检测器高效液相色谱仪检定时常见问题及解决方法

姜美沙，罗嘉瑞

（沈阳计量测试院， 沈阳 110179）

紫外可见及二极管阵列检测器高效液相色谱仪检定时常见问题及解决方法

姜美沙，罗嘉瑞

（沈阳计量测试院， 沈阳 110179）

按照国家计量检定规程，分析了检定紫外-可见及二极管阵列检测器高效液相色谱仪的主要计量指标时常见问题和产生的原因，并提出了解决方法。

紫外-可见及二极管阵列检测器高效液相色谱仪；基线漂移；最小检测浓度；定性重复性；定量重复性

高效液相色谱仪（HPLC）能将油溶性、水溶性、聚合物、生物样品等不同类型的样品组分进行分离并加以检测，广泛应用于环境监测、医药、食品安全等领域[1]。该仪器的计量检定对于保证测量结果的准确性具有重要作用。笔者根据实际工作总结了紫外-可见及二极管阵列检测器高效液相色谱仪在计量检定过程中常见的问题及解决办法。

1 基线噪声和基线漂移检定时常见问题

1.1 出现不规则噪声

（1）可能原因

检测器流通池或流路中有气泡；流动相或色谱柱被污染。

（2）解决方法

在检测器废液排放口加适当背压、流动相脱气（吹氦、加热回流、抽真空、超声波或在线真空法）；更换流动相且用HPLC级试剂，更换色谱柱或冲洗色谱柱。

1.2 出现有规则噪声

（1）可能原因

泵压不稳或泵脉冲；流路中有气泡；泵接地线或自动进样器电源线不合适。

（2）解决办法

对泵进行维修；检测器废液排放口加适当背压、流动相脱气（吹氦、加热回流、抽真空、超声波或在线真空法）[2]；用专用、有屏蔽的信号线。

1.3 系统流路产生基线漂移异常

（1）可能原因

系统不稳定而未达到平衡；流动相污染、分解或有气泡；柱污染；前面分离出的组分保留时间太长未离开色谱柱；波长选错。

（2）解决办法

用足够长的时间使系统平衡；换流动相且用HPLC级试剂[3]；换色谱柱或冲洗色谱柱；用适当强度的溶剂清洗；选择合适的波长。

1.4 检测器产生基线漂移

（1）可能原因

检测器不稳定；检测器流通池污染。

（2）解决办法

使检测器的灯稳定一段时间，波长、灵敏度、电压／电流各参数变化后也要稳定一段时间；用溶解性好的溶剂清洗，再用甲醇冲洗。

2 最小检测浓度检定时常见问题

根据JJG 705-2002[4]气相色谱计量检定规程，溶质（萘）的峰形是否正常直接影响最小检测浓度的计算，一般存在以下几种情况。

2.1 萘峰前面出现负峰

（1）可能原因

所用标准溶液中的溶剂甲醇和流动相（即100%甲醇）的吸光度有差别，即所用流动相没有溶剂甲醇纯度高，可能含有稍高紫外吸收的物质，而且样品的溶剂不能和流动相充分混合均匀，溶剂被洗脱形成一个峰即负峰（波长越低，样品溶剂与流动相稍有差异就会出现负峰）；标准溶液中萘的含量太低，当样品中萘的含量提高几个数量级时，负峰现象不明显。

（2）解决办法

使用与标准溶液中甲醇的浓度相匹配的流动相；换用1×10-4g／mL萘-甲醇标准溶液检定最小检测浓度。

2.2 萘峰前沿

（1）可能原因

柱或保护柱被污染；柱性能下降；保护柱失效。

（2）解决办法

清洗、再生、更换柱或保护柱；检查柱效，若柱效降低则更换柱；更换保护柱柱芯。

2.3 萘峰拖尾

(1)可能原因

柱或保护柱被污染，柱头塌陷，保护柱与分析柱填料不匹配；死体积太大，例如进样阀被污染或泄露，过滤头被污染，管路孔径过大，管路接头不匹配。

(2)解决办法

清洗、再生或更换柱或保护柱，并选择封尾良好的柱子，使保护柱与分析柱的填料相匹配；设法缩短管路，选择合适的管路孔径及连接接头，把松的地方拧紧，并清洗管路、进样阀、过滤头。

3 定性、定量重复性检定时常见问题

在流动相流速、组成和系统温度不变的条件下，重复性不符合要求有以下几种情况。

3.1 保留时间连续向一个方向增大或减小

（1）可能原因

温度未控制好，一般向前或向后单向漂移；系统没有达到平衡；流动相组成发生变化、向前或向后单向漂移，流动相或被污染；泵或管路中有气泡，前后漂移不稳定；系统管路堵塞，引起压力向前或向后单向漂移[2]；吸滤头堵塞，流动相抽取受阻；柱被污染；系统泄露，如泵活塞杆密封垫老化，流动相渗漏。

（2）解决办法

采用恒温装置，保持柱温恒定；用足够时间平衡所有部件（如检测器、柱等），注意操作条件（如流动相、检测器参数设置等）；防止流动相蒸发，不用被污染的流动相：清洗贮液瓶、清洗（用6 mol／L硝酸和水重复清洗3次，再用甲醇超声清洗）或更换溶剂入口过滤器，采用HPLC级试剂，重新平衡系统；给溶剂脱气（吹氦、加热回流、抽真空、超声波或在线真空法），重新平衡系统（如果使用氦气脱气，氦的流量不可太大以免带出流动相）；检查堵塞管路，必要时更换；清洗溶剂入口过滤器的砂芯，必要时更换；更换柱子，若仍不符合要求即可能流动相被污染或保护柱、过滤器被污染；检查所有接头，旋紧漏液接头，若仍漏液，更换接头和垫圈。

3.2 其它情况

对于各部件磨损等引起泵压或泵脉冲输液不稳，如泵单向阀中的宝石球磨损，造成流动相倒流从而使压力不稳，更换部件即可。

［1］ 于世林.高效液相色谱方法及应用[M].2版.北京：化学工业出版社，2005.

［2］ 吴方迪，张庆合.色谱仪器维护与故障排除[M].北京：化学工业出版社，2008.

［3］ 刘虎威.实用色谱技术问答[M].北京：化学工业出版社，2008.

［4］ JJG 705-2002 气相色谱仪检定规程[S].

福建首家民营第三方食品安全检测室将落户海沧

厦门市首个民营第三方食品安全检测实验室将落户海沧区，今后可为食品企业提供更快的食品安全检测，帮助企业生产更安全的食品。

据悉，这个实验室是由理源集团和中科院上海生科院营养所合作成立的。理源集团食品产业事业部总经理徐光荣说，目前全市有能力对外为企业做食品安全检测的机构只有检验检疫局、质监局检验所和疾控中心3家，但这3家主要面向政府工作，任务繁重，对企业的委托有时及时性不够，不利于企业及时发现食品安全问题。

今后，企业可通过这个新的实验室进行快速检测。据了解，这是福建省、厦门市首家民营第三方食品安全检测实验室。他们还将在2年内取得国家资格认证。

（人民网）

Common Problems and Solutions of Metrological Verifcation of High Performance Liquid Chromatography with UV-Vis Diode Array Detector

Jiang Meisha, Luo Ruijia
(Shenyang Metrology Testing Institution，Shengyang 110179，China)

According to the national metrological verifcation, the common problems and reasons in the verifcation of high performance liquid chromatography with UV-Vis diode array detector were analysed. The solution methods were put forward.

high performance liquid chromatography with UV-Vis diode array detector; baseline drift; limit of detection; qualitative repeatability; quantitative repeatability

O657.32

：A

：1008-6145(2012)04-0084-02

10.3969／j.issn.1008-6145.2012.04.026

联系人：姜美沙；E-mail: meishajiang2003@yahoo.com.cn

2012-04-08