不同栽培模式杜仲体绿原酸含量积累动态的研究

杨秀芳， 汪 洋， 马养民

(陕西科技大学 教育部轻化工助剂化学与技术重点实验室，陕西 西安 710021)

0 引言

杜仲Eucommia ulmoides Oliv.为杜仲科(Eucommiaceae)属落叶乔木，为我国特产，主产于四川、陕西、湖北等地[1].绿原酸是杜仲中的重要成分，具有利胆、抗菌、抗病毒、降压、增高白血球及兴奋中枢神经系统等多种药理作用，是保健、医药等工业的重要原料[2].杜仲中绿原酸的含量常作为评价杜仲叶品质的重要依据，王太霞对杜仲叶生长发育过程中绿原酸含量的变化进行了研究，但对不同栽培模式下叶、皮中有效成分动态变化情况较少提及.

杜仲栽培的模式有两种——乔林模式和叶林模式，乔林模式是以获得木材为主要目的，按传统方法进行种植的一种栽培模式，其生长周期较长；叶林模式是利用杜仲较强萌芽能力，定植后每年春天从靠近地面处平茬，并在主干上萌生出的枝条中选育3个不同方向、分布均匀的萌条构成开放型树冠，以后每年春天进行平茬.叶林模式是将高大乔木改育为灌木的种植模式[3].本文采用HPLC法，以绿原酸含量为评价指标，研究了杜仲不同栽培模式、生长期有效成分积累动态变化规律，探讨了杜仲的最佳采收时间，为杜仲规范化种植提供依据.

1 实验材料、试剂及仪器

1.1 实验材料与试剂

1.1.1 材料处理

叶林栽培模式的杜仲叶、皮于2010年4月至10月每月15日采自西北农林科技大学苗圃平茬林；乔林栽培模式的杜仲叶、皮于2010年4月至10月每月15日采于西北农林科技大学苗圃杜仲乔林.随机采集同一株植物东、南、西、北各个方向的杜仲皮及杜仲叶.用湿布将杜仲叶擦拭干净，杀青、阴干后，密封保存备用；杜仲皮阴干后，密封保存备用.样品使用前，将其粉碎并于60℃真空干燥箱中烘至恒重.

1.1.2 试剂

绿原酸(中国药品生物制品检验所)；甲醇(色谱纯)；乙酸(色谱纯).

1.1.3 主要仪器

岛津LC-10ATvp型高效液相色谱仪(日本岛津制造)；SPD-10A紫外检测器(日本岛津制造)；KH5200B型超声波清洗器(成都一科仪器设备有限公司).

1.2 方法

1.2.1 测定方法的建立

绿原酸含量测定采用高效液相法.参考文献后[4]，确定色谱条件：色谱柱为ODS(250 mm×4.6 mm)；以甲醇-水-乙酸(体积比24∶75∶1)作流动相；流速为1 mL/min；检测波长为240 nm；进样量为5μL；柱温为30℃.用甲醇配制浓度为0.075，0.150，0.300，0.600，1.200 mg/mL的一组绿原酸对照品溶液，分别吸取10μL进行高效液相色谱仪分析测定，建立回归方程，考察在测定浓度范围内进样浓度与峰面积之间的线性关系.

1.2.2 样品处理及含量检测

分别准确称取60 ℃真空干燥后的样品1 g，加入50 mL体积分数为50%的甲醇，80 ℃加热回流提取2 h,过滤，并将滤液定容至50 mL.用0.45μm微孔滤膜过滤后，置于冰箱中冷藏待测.以选定的色谱条件下精密吸取供试样品溶液10μL进样测定.

2 结果和分析

2.1 标准曲线

将绿原酸标准溶液注入高效液相色谱仪中，重复进样3次，并对所得的峰面积进行平均，以绿原酸浓度为横坐标，峰面积值为纵坐标，绘制标准曲线见图1.

图1 绿原酸标准曲线 图2 杜仲叶中绿原酸积累动态规律

由此可知，绿原酸在0.075～1.2 mg/mL的浓度范围内线性关系良好，由此得到回归方程：y=8×106x+1.197 33×105，r=0.999 7.

2.2 杜仲体内绿原酸积累动态规律

通过对待测样品峰面积的测定，可由回归方程得到待测样中绿原酸的浓度.再以各个植物样品的采样月份为横坐标，绿原酸含量为纵坐标绘图，得到绿原酸在杜仲体内随时间变化的规律.

2.2.1 杜仲叶中绿原酸积累动态规律

杜仲叶中绿原酸的积累动态规律见图2.乔林叶和叶林叶中绿原酸的积累动态具有一定的相似性，绿原酸含量均在6月份达到最大值，两种栽培模式进行比较，叶林叶中的绿原酸含量明显高出乔林叶.

2.2.2 杜仲皮中绿原酸积累动态规律

叶林皮和乔林皮中绿原酸积累动态规律见图3.叶林皮绿原酸含量在10月份达到全年最大值，乔林皮6月份绿原酸含量达到全年最大值，叶林皮绿原酸的最高含量高于乔林皮，但乔林皮在一年当中存在三个绿原酸含量较高的时期.

图3 杜仲皮中绿原酸积累动态规律 图4 绿原酸积累动态比较

2.2.3 绿原酸积累动态规律比较

将杜仲中的绿原酸积累规律进行对比,结果见图4.两种栽培模式中杜仲叶中绿原酸含量要明显高于杜仲皮的含量，尤其是叶林叶的绿原酸含量每月均超过其他3种样品.显示出叶林叶作为提取绿原酸植物原料方面具有独特的优势.若以绿原酸作为提取目标，杜仲栽培应选择叶林模式，并且以6月作为杜仲叶的最佳采收期.

3 结束语

采用高效液相色谱检测方法，对不同栽培模式下同一植株叶、皮中绿原酸积累规律进行了研究，发现杜仲叶是绿原酸合成、积累的主要器官；与乔林叶相比，叶林模式栽培的杜仲叶中绿原酸含量更高，且在6月达到全年峰值.该结果对药用植物用药部位确定、用药原料采收时间、种植资源可持续利用及生态保护具有重要意义.

参考文献

[1] 杨 云，冯卫生. 中药化学成分提取分离手册[M]. 北京：中国中医药出版社，1998：172.

[2] 王太霞，赵红艳，柴志艳，等. 杜仲叶生长发育过程中结构和绿原酸含量的变化[J]. 时珍国医国药，2009：20(3)：635-636.

[3] 徐咏梅，苏印泉，彭 锋，等. 杜仲乔林与叶林树皮中次生代谢物含量的比较[J]．西北农林科技大学学报，2006：34(4)：55-57.

[4] 董娟娥，马希汉．反相高效液相色潽法同时分离测定杜仲雄花及其产品中的京尼平苷酸和绿原酸[J]．色谱，2007，25(2)：217-220.