电针对老年阿尔茨海默病大鼠空间记忆能力的影响*

高怀云，熊晶晶，胡卡明

(1．成都中医药大学，四川 成都610075;2．成都中医药大学附属医院，四川成都610072)

阿尔茨海默病(AD)是多发生于中老年病人中枢神经系统退行性改变的一种变性疾病，是痴呆最常见的病因，以进行性智能减退、记忆障碍、认知障碍为主要特征［1］。目前尚没有有效的治疗方法，为此，深入探讨阿尔茨海默病的发病机制，来研制有效的防治措施，已经是一项迫切需要解决的重大课题。由于本病严重影响患者的认知功能以及记忆功能，使得很多患者生活不能自理，给家庭及社会造成很大负担，因而寻求对于阿尔茨海默病的有效治疗已经成为世界医学界的研究热点之一。针灸治疗“痴呆”也有上千年历史，笔者采用电针百会、涌泉来评价电针对于阿尔茨海默病大鼠空间记忆能力的影响，以便研究一种治疗阿尔茨海默病的有效方案。

1 材料和方法

1．1 实验动物及材料

自然衰老的 SD大鼠86只，20～24月龄，质量400～500 g;青年SD大鼠10只，4～6月龄，质量140～200 g，雌雄不计，由成都中医药大学实验动物中心提供。实验材料:华佗牌针灸针(苏药管械准字2001第2140033号)、G6805－1型电针仪(青岛鑫升实业有限公司)、Morris水迷宫(成都泰盟科技有限公司)。

1．2 动物筛选及分组

以4～6个月青年鼠作为对照。以青年鼠组大鼠平均逃避潜伏期均数+2倍标准差值为下限，+1倍标准差值为上限，将老年大鼠分为2组。平均逃避潜伏期大于均数+2倍标准差的为老化痴呆AD组;小于均数+1倍标准差的为正常老年鼠。潜伏期介于上下限之间的老年鼠剔除。潜伏期参照文献［2］，筛选标准参照文献［3］。筛选出的正常老年鼠为正常老年组;筛选出的老化痴呆AD鼠随机分为:模型组、电针组，每组各12只。

1．3 治疗方法及疗程

电针组:用自制的固定器固定各组老化痴呆AD大鼠。选取“涌泉”、“百会”(“涌泉”直刺2～3 mm;“百会”斜刺3～5 mm，)，“涌泉”穴双侧交替进针。进针后，穴位均不进行手法刺激，直接连接G6805电针仪进行治疗，频率2～100 Hz，施以疏密波，电压2～4 V，强度缓慢加大至大鼠下肢抖动为度，留针时间约20 min。正常老年组和模型组:大鼠不施针，每天以同样的方式、同样的时间和程度进行抓取、固定。治疗疗程:每日1次，7天为一疗程，疗程间隔1天进行下一疗程，共3个疗程，计21天。

1．4 检测方法

待大鼠治疗疗程结束后，用Morris水迷宫对其用Markowska设计出延缓的位置非匹配作业［4］进行训练与监测，将一“T”型隔板放入水迷宫内，将水迷宫分割成开始部A和两个均等的开放部B和C。于开放部B中央放一平台，水迷宫水面高出平台1 cm。信息游泳是每次实验把大鼠从A部正中贴壁放入，封闭C部，从A部游到B部找到平台所用时间为信息游泳潜伏期，待大鼠找到平台后停留30 s，若大鼠120 s内仍找不到平台，则引导其找到平台，并停留30 s后回笼休息60 s，接着进行选择游泳。选择游泳开放B部，C部，从A部游到C部平台(B部平台已撤去)所用的时间定为选择游泳潜伏期，若大鼠游入B部，则撤掉平台惩罚其30 s，然后打开B部，允许其重新找平台，记录大鼠找到C部平台所用时间加上惩罚前所用时间为选择游泳潜伏期。若大鼠120 s内仍找不到平台，则时间记录为120 s，并寻找平台失败。适应性训练3天，每天每只大鼠训练9次［5］。第4天测试，每只大鼠信息游泳时间与选择游泳时间取9次测值的平均值，直接找到C部平台的次数与总游泳次数之比为选择游泳正确率。

1．5 统计学方法

实验数据采用SPSS17．0统计软件包统计分析。实验统计计量数据均以均数±标准差(±s)表示，各组间比较采用单因素方差分析处理。

2 结果

模型组在疗程中期因捆绑致死1只，故剩11只。电针组与模型组比较，大鼠信息游泳时间及选择游泳时间都有明显减少，如表1所示:电针组信息游泳时间(22．94 ±4．36)s与正常老年组(19．22 ±4．36)s相比有差异(P＜0．05)，而与模型组(27．66 ±3．50)s相比，其信息游泳时间有明显缩短(P＜0．05)。电针组选择游泳时间(26．90 ±3．39)s，与正常老年组(21.66±3．20)s相比有差异(P＜0．05)，而与模型组(30.54±3.35)s相比，其选择游泳时间也有缩短(P＜0．05)。结果提示，电针刺激可改善老年痴呆大鼠的空间记忆能力。

表1 各组治疗后信息游泳时间及选择游泳时间(±s)

表1 各组治疗后信息游泳时间及选择游泳时间(±s)

注:与正常老年组相比，*P ＜0．05;与模型组相比，△P ＜0．05。

组别 n 信息游泳时间(单位:s)选择游泳时间(单位:s)正常老年组12 19．22 ±4．36 21．66 ±3．20模型组 11 27．66 ±3．50* 30．54 ±3．35*电针组 12 22．94±4．05＊△ 26．90±3．39＊△

3 讨论

涌泉穴，足少阴肾经之井穴，其名源于《灵枢·本输》篇:“肾出于涌泉，涌泉者，足心也，为井木”。归属肾经，肾经为生命之根，先天之本，针刺涌泉穴具有醒脑开窍、充养脑髓的作用。百会穴位于脑部巅顶处，为百脉所会，内应于脑，《会元针灸学》载:“百会者，五脏六腑奇经三阳百脉之所会，故名百会”。《黄帝明堂灸经》记载百会主治“……忘前失后，心神恍惚”［6］，故百会为调节大脑功能的要穴。而涌泉配百会在窦汉卿《标幽赋》中记载为天地人“三才穴”天穴与地穴，天穴配地穴共同起到调整升降、协调全身阴阳的功用。中医关于治疗“痴呆”历史悠久，多认为本病肾虚髓亏，脑脉失养，神机失用。其病位在脑，而肾通于脑，肾藏精，主骨生髓，肾虚则髓海不充、清窍失灵，所以“痴呆”其病位在脑，而根本在肾［7］。

现代医学认为阿尔茨海默病以进行性智能减退、记忆障碍、认知障碍为主要特征，本试验就是应用Morris水迷宫对AD大鼠进行空间记忆的训练，来测评电针对于AD大鼠学习记忆能力的影响。Morris水迷宫是英国心理学家Morris 20世纪80年代设计的用于研究学习记忆的，是研究AD大鼠空间记忆功能的较可靠的方法。试验结果显示电针治疗3个疗程后电针组AD大鼠信息游泳时间与模型组相比有明显缩短(P＜0．05)，电针组选择游泳时间与模型组也有明显缩短(P＜0．05)。两组数据均有统计学意义。本试验结果还显示电针组额叶单胺递质含量比模型组含量明显增加，并且本试验另一个方面AD大鼠的觉醒时间和直立次数电针组也明显多于模型组，而单胺递质含量与睡眠觉醒机制也有密切关系［8］，所以推测，电针涌泉、百会增强单胺递质功能，促进神经干细胞分化，从而抑制神经细胞凋亡等途径改善AD大鼠学习记忆功能。但不排除还有其他因素也参与AD大鼠空间学习记忆功能的调节。

目前医学界对于阿尔茨海默病的治疗尚未有有效的治疗方案，但有大量研究与文献报道［9～12］，针灸治疗阿尔茨海默病的疗效确切而肯定，具有极高的使用价值与科学内涵，其具体作用机制学者多从神经分子微生物学、神经行为学以及神经电生理学等方面阐述，有一定意义，但尚缺乏大量的临床研究与权威的临床报道，所以针刺改善阿尔茨海默病患者学习记忆功能的机制还需要进一步研究，以便更好的来指导临床对于阿尔茨海默病的治疗。

［1］ 吴江．神经病学［M］．北京:人民卫生出版社，2005:297－302

［2］ 邱宏，金国琴，金如锋，等．水迷宫重复测量数据的方差分析及其在 SPSS中的实现［J］．中西医结合学报，2007，5(1):101－105

［3］ 张全爱，李彤，陈立章．艾灸百会、命门穴提高衰老大鼠空间记忆能力的行为学评价［J］．甘肃中医学院学报，2007，24(1):17－19

［4］ Markowska AL，Price D．Kotiac，VE Selective effects of nerve growth factor on spatial recent memory as assessed by a delayed nonmatching－ position task in the water maze［J］．J Neurosci，1996，16(10):3541－3548

［5］ 刘跃，王怀经，王怀星．淋巴滞留性脑病模型空间记忆的改变［J］．解剖学杂志，2002，25(2):151 －153

［6］ 黄龙祥辑校．黄帝明堂灸经［M］．上海:上海古籍出版社，1994:78

［7］ 张俊龙．脑与五脏关系论［J］．山西中医学院学报，2002，3(2):7－10

［8］ 郑利星．神经递质在睡眠－觉醒中的作用［J］．军医进修学院学报，2009，30(2):244 －246

［9］ 姚宏波，姜国华，宫学武．电针对AD大鼠学习记忆及c－fos、Caspase－3表达的影响［J］．齐齐哈尔医学院学报，2009，30(18):2225－2226

［10］ 车鹏，田建英，张学岚，等．电针法对AD大鼠空间记忆行为及其海马区 a7nAChR 的影响［J］．山东医药，2010，50(51):25－26

［11］ 赵惠玲，丁茂超，胡斯旺，等．针刺对ALCl3致痴呆大鼠空间记忆障碍的改善作用［J］．温州医学院学报，2011，41(1):10 －12

［12］ 刘雨星，梁繁荣，余曙光，等．电针对穹窿－海马伞损伤老年痴呆大鼠学习记忆行为影响的试验研究［J］．中国康复医学杂志，2004，19(3):188 －190