阿尔茨海默病相关的神经丝蛋白的早期诊断价值

尹黎英，袁慧欣，张冀平，师锐赞，李慧媛，胡为民，李国平

阿尔茨海默病是一种以认知功能减退、生活能力下降及精神行为异常为临床表现的致死性神经系统退行性疾病。随着世界人口的老龄化，AD 的发病率也在逐年上升，已成为继心脑血管疾病和肿瘤后第三大危及人类生命健康的疾病。我国有部分城市的流行病学调查显示，在55 岁及以上的人群中，AD 患病率为2.1% (732/34807)［1］，由此带来的社会、经济、家庭和社会公共卫生问题也日益突出。目前，主要依靠出现痴呆症状及评估精神量表等来明确诊断。临床诊断的AD 患者基本都处于中晚期，现有的治疗均难以取得满意的疗效。联合应用多种手段实现对AD 的早期诊断和早期治疗，从而很好地控制不适症状，将有助于改善生存质量，减轻社会与家庭的经济与精神负担。

目前，AD 的发病机制尚不清楚，诊断的生物标记有3 种:tau 蛋白，磷酸化的tau 蛋白和Aβ42［2］。随着神经丝蛋白(neuronal thread protein，NTPs)这种新的标记物的发现和应用，AD 早期诊断准确率进一步提高。AD7c－NTP 在神经元中表达，定位于神经细胞轴突，在早期或中度AD 患者的皮层神经元、脑组织抽提物、脑脊液中都有升高，且其含量与痴呆的严重程度成正比［3］。鉴于阿尔茨海默病患者尿样中的AD7c－NTP 与脑脊液来源的AD7c－NTP 具有相同的分子量，本研究对老年性痴呆患者尿样中AD7c－NTP 含量进行测定，确定尿中AD7c－NTP 含量与AD 的关系，为AD 的早期诊断提供一种有效、简便可行的科学方法。

1 对象与方法

1.1 对象 AD 组:2009 ～2011 年我院神经内科就诊的AD 患者38 例，男23 例，女15 例，62 ～89 岁，平均(77 ±5)岁。全部病例均进行系统的病史采集、专科查体及智能精神状态检查量表(MMSE)、临床痴呆评定量表(CDR)和日常生活能力量表(ADL)作为评价指标过一步确诊，并满足MMSE≤26 分，CDR=1.0 分，ADL≥16 分。认知能力障碍早于其他神经系统征象的出现，排除其他疾病导致的痴呆。所有AD 患者均符合1992 年修订的美国《国际疾病分类》10 版(ICD－10)诊断标准［4］。选择年龄性别相匹配的，来自同一地理环境的健康体检者35 名为健康对照组，其中男21 例，女14 例，年龄＞63 岁。无认知、语言行为障碍，智能检查均正常(经MMSE，CDR 和ADL 评定)，无严重心脑血管疾病，且血压控制尚好，正常心电图，血常规、血糖及血脂均控制在正常范围，无明显神经系统体征及明显的肝、肾或内分泌疾病，排除颅脑占位性病变及感染。

1.2 方法

1.2.1 仪器与试剂采用ADL 公司提供的AD7c－NTP 抗体试剂盒，批号QRCT－89562ELAUTL，AD7c－NTP 抗体。

1.2.2 标本采集 留取晨起中段尿，混匀，肉眼观察，如尿液浑浊或颜色很深，则弃去，选取清亮的标本，置于冰箱保存，待标本统一收集完毕后，取出以2500 r/min，离心10 min，取上清液备用。测定前将标本控制到室温，严格按试剂盒说明书逐步进行，酶标仪测定450 nm 波长处吸光度(OD450)，并经Soft-Ma× Pro 软件拟合浓度－吸光值二次标准曲线，从而得出待测尿样本中AD7c－NTP 浓度。每组标本分别重复测定2 次，取平均值。

1.3 统计学处理 采用SPSS13.0 统计软件，实验数据以±s 表示，两组间均数的比较采用成组t 检验，尿液AD7c－NTP 水平与MMSE，CDR，ADL 的关系采用直线相关分析。

2 结果

2.1 AD 和对照组尿液AD7c－NTP 水平比较 AD组和健康对照组尿中AD7c－NTP 含量分别为(90.78 ±16.54)ng/ml、(70.63 ±12.56)ng/ml，患者尿液AD7c－NTP 水平明显高于健康对照组，差异有统计学意义(t=5.827，p ＜0.01)。

2.2 AD7c－NTP 与AD 严重程度的相关性 AD患者尿中AD7c－NTP 含量与MMSE、CDR、ADL 分数有一定关系，相关系数分别为0.756、－0.658、－0.760 (P 均＜0.01)。

3 讨论

AD 是最常见的痴呆类型，是严重危害老年人健康的一种疾病，引起了全世界的关注［5］。日常生活能力下降、认知功能的障碍均是影响AD 患者社会适应能力的主要因素。而认知障碍治疗的关键，在于早期诊断及早期治疗。因此，早发现、早诊断、早治疗是对AD 患者有效的防治措施，由于老年人对腰穿的顾虑，影响了标本的采集，为诊断带来一定困难。而对于早期诊断，尿液中AD7c－NTP 的检测克服了其他检查缺点，它方便、简单、快捷、无创伤，更易被患者接受。

1997 年，Munzar 等［6］首次从脑组织分离到AD7c－NTP 并命名。它是一个41 ku 的跨膜磷蛋白，为神经丝蛋白家族的一个成员，只在神经元表达，大量存在于AD 患者脑中的神经元纤维缠结，在患者脑中呈分泌上调［7］，提示异常的AD7c－NTP蛋白表达是AD 神经变性的早期事件［8］。有研究表明，脑脊液中AD7c－NTP 的表达水平在AD 组明显高于正常组，且AD7c－NTP 水平与测定AD 各种量表得分有相关性，与年龄无相关性［9］。故AD7c－NTP 可作为一个潜在的分子标记，对AD 早期诊断有重要的应用价值。

寻找一种简捷有效的早期诊断方法，从而早期药物干预是目前迫切需要解决的问题。生物学标志物的研究是近年的热点，脑脊液中AD7c－NTP 对AD早期诊断有较高的灵敏度和特异性［5］。对AD 患者尿样进行分析，发现其尿液也含有AD7c－NTP。本研究结果表明，AD 患者尿液中AD7c－NTP 的含量明显高于健康对照组，提示尿液中AD7c－NTP 含量的测定有助于AD 的早期临床诊断。与MMSE 和CDR、ADL 分数变化有一定关系，进一步提示尿液AD7c－NTP 含量对AD 的诊断有重要意义。本研究所采用ELISA 测定方法具有方便简单、准确性较高、可操作性较强、无需长时间孵育等优点，加之尿样检测为一项无创体外检测方法，同时标本采集容易且便利，因此尿液AD7c－NTP 含量检测在AD 的诊断中有重要的意义，具有良好的推广和应用价值。

［1］ Zhang Z X，Zahner G E，Román G C，et al. Socio－de mographic variation of dementia subtypes in china:methodology and results of a prevalence study in Beijing，Chengdu，Shanghai，and Xian［J］. Neuroepidemiology，2006，27(4):177－187.

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［3］ De la Monte S M，Wands J R. Neurodegeneration changes in primary central nervous system neurons transfected with the Alzheimer－associated neuronal thread protein gene［J］. Cell Mol Life Sci，2001，58(5－6):844－849.

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［5］ Forlenza O V，Diniz B S，Gattaz W F. Diagnosis and biomarkers of predementia in Alzheimer＇s disease ［J］.BMC Med，2010，8:89.

［6］ Munzar M，Levy S，Rush R，et al. Clinical study of a urinary competitve ELISA for neural thread protein in Alzheimer disease［J］. Neurol Clin Neurophysiol，2002(1):2－8.

［7］ 刘映红，胡为民. 老年性痴呆和轻度认知障碍患者尿液中AD7C－NTP 的研究［D］. 太原:山西医科大学，2009.

［8］ 闫 鹏，王 蓉，杜怡峰，等. 老年性痴呆患者尿中AD7c－NTP 含量的研究［J］. 山东大学学报，2009，47(6):106－109.

［9］ Goodman I，Golden G，Flitman S，et al. A multi－center blinded prospective study of urine neural thread protein measurements in patients with suspected Alzheimer＇s disease［J］. J Am Med Dir Assoc，2007，8(1):21－30.