咽康片主要原料体外抑菌实验研究

2012-02-15刘艳玲郭玲玲

中国医药科学 2012年8期

赵洁刘艳玲韩冰田浩郭玲玲

辽宁省微生物科学研究院，辽宁朝阳 122000

咽康片是以金银花为主要原料，再辅以其他成分按一定的配方比例组合而成的口含片剂，用于口腔感染、咽喉炎，具有抗菌、消炎、止咳的作用。本项试验主要探讨咽康片中金银花等几味主要原料的体外抗菌作用，为本产品进一步应用和相关原料的合理使用提供基础资料，供同道参考，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 试验材料

金银花、薄荷脑购自朝阳市药材公司；供试菌种金黄色葡萄球菌由笔者所在医院菌种保藏中心提供；肺炎克雷伯菌购自中国药品生物制品检定所，编号：46114-8；培养基：肺炎克雷伯菌和金黄色葡萄球菌都使用营养肉汤液体培养基和营养琼脂固体培养基[1-2]，购自北京科海军舟化学试剂公司。主要仪器、试剂：电热恒温培养箱DHG-9240A型（上海一恒科技有限公司），超净工作台SW-CJ-4（上海锦屏仪器仪表有限公司）、7230分光光度计（上海第三分析仪器厂）；手提式高压灭菌锅GB4027.1.83煤电两用型（辽宁省丹东市日用五金厂）。试验所用乙醇等化学试剂均为分析纯。

1.2 试验方法

1.2.1 菌悬液的制备将上述两个菌种分别用营养肉汤液体培养基（蛋白胨10 g、氯化钠5 g、牛肉浸出粉3 g、蒸馏水1 000 mL）和固体斜面培养基（蛋白胨10 g、氯化钠5 g、牛肉浸出粉3 g、琼脂14 g、蒸馏水1 000 mL）[3-4]进行活化后，用无菌水1︰2 000稀释，备用。

1.2.2 供试样品的制备（1）金银花样品制备：取金银花适量用水提取两次，过滤，除杂，合并提取液，浓缩至0.60 g/ m L。（2）薄荷脑样品制备：称取薄荷脑0.1 g加95%乙醇2 mL，再加蒸馏水至10 mL，备用。（3）咽康片混合物样品制备：按配方比例分别加入金银花、薄荷脑等提取物，混合后制成每片相当于金银花1.05 g、薄荷冰0.025 g的液体口含片（每片重2.0 g，另含其他提取物），备用。

1.2.3 供试样品对供试菌种的抑菌作用（1）金银花提取物最低抑菌浓度测定：配制细菌液体培养基，分装于试管内，每管4 mL，分两组，每组6支试管，121℃湿热灭菌20 min后，准确称量金银花提取物制成18%、27%、36%、45%、54%、63%（mL/mL）系列浓度，依次各取1 mL注入已灭菌的液体培养基中，每个系列接一个菌种，分别准确注入菌悬液0.1 mL；再取两支试管做空白对照，然后将试验管和空白对照管同时放入培养箱内培养24 h，观察生长现象，在空白系列内分别接入与上述相同量的克雷伯菌和金黄色葡萄球菌菌悬液，立刻用7230分光光度计测量试验管和对照管的吸光度值[5-6]。（2）供试样品与菌悬液混合观察抑菌效果：取无菌培养皿加入一定量的供试样品（咽康片混合物按0.8片和0.5片量、原料按相当于半片量和一片量加入）、0.1 mL菌悬液和15 mL营养琼脂培养基，立刻混合均匀，置35℃培养箱中培养18~20 h，观察抑菌情况。

2 结果与讨论

2.1 金银花提取物最低抑菌浓度测定

在550 nm波长下用7230型分光光度计测定培养液的吸收值，培养液吸收值与培养液内细菌繁殖速度成正相关，吸收值升高越快，表示培养液内细菌浓度升高越快。培养液中分别加入了具有抑菌作用的供试液体，起到抑菌作用，故可抑制培养液吸收值上升。将培养后的两组培养物和空白对照在7230分光光度计上进行比色测定，若某一浓度培养物的吸收值与空白对照这一浓度的吸收值相同（或比较接近）者，则表明此培养基中加入的细菌没有繁殖和生长，即可视为此浓度为最低抑菌浓度。测定结果为：金银花对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度7.2%（mL/mL），对克雷伯菌的最低抑菌浓度5.4 %（mL/mL）。

根据金银花样品的浓度将其转换为质量浓度，即对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度为4.32%（g/m L），对肺炎克雷伯菌的最低抑菌浓度为3.24%（g/mL）。

由上述试验可知，由于细菌的种类不同，金银花的抑菌效果有所不同，对肺炎克雷伯菌的抑菌效果强于对金黄色葡萄球菌的抑菌效果。