Treg细胞与白癜风的相关性研究

杨晓晶

解放军第一○五医院皮肤科，安徽合肥 230031

白癜风是一种以色素脱失为主要表现的获得性皮肤疾病。近年研究发现，白癜风患者存在免疫功能紊乱，CD4+CD25+Treg含量可发生明显变化，笔者所在医院对2010～2011年来院就诊的40例白癜风患者进行了Treg细胞（调节性T细胞）的检测以研究其与白癜风发病的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择笔者所在医院2010年2月～2011年7月收治的白癜风患者40例作为实验组，其中男23例，女17例，年龄17～68岁，平均（32.7±12.8）岁，病程2～13年。所有患者均符合白癜风诊断标准，按照分期标准[1]属于白癜风进展期的20例，稳定期20例。对照组为40例与患者性别、年龄、BMI等匹配的健康人志愿者40例，男22例，女18例，年龄17～65岁，平均（33.4±13.1）岁。两组患者在性别、年龄、BMI等身体条件上差异无统计意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

两组患者清晨空腹肘静脉抽血10 mL，加入EDTA抗凝管颠倒混匀，密度梯度离心法常规分离外周血单核淋巴细胞（PBMCs）。将PBMCs加入流式管，将荧光异硫氰酸荧光素（FITC）标记的鼠抗人CD4单克隆抗体和藻红蛋白（PE）标记的鼠抗人CD25单克隆抗体各20 μL分别加入流式管，混匀避光培养10 min后离心弃上清。加入预冷固定液0.5 mL避光反应20 min，加破膜剂1 mL离心弃上清。再加入PE标记的Foxp3单克隆抗体以标记天然型Treg（nTreg），混匀避光30 min。加破膜剂离心弃上清，D-hank液重悬，放入美国Beckmen公司制造的流式细胞仪中上机检测。对实验组和健康对照组样本的 CD4+、CD25+、Foxp3+、CD4+CD25+、CD4+CD25+Foxp3+细胞进行测定，用百分比（%）表示结果。

1.3 统计学处理

使用SPSS15.0统计学软件对两组样本结果进行统计学分析，采用独立样本t检验检查两组样本间差异，P＜0.05为差异有统计学意义。

1.4 随访

对40例白癜风患者进行为期6个月的随访，随访其治疗情况和病情进展情况，在第12周对血清Treg细胞水平进行复查。38例完成随访，其中31例定期来院复查。

2 结果

2.1 实验组和对照组各抗原和Treg细胞亚群数量情况

CD4+、CD25+、Foxp3+3种细胞数量白癜风实验组进展期、稳定期均略低于对照组，但差异均无统计学意义（P＞0.05）。在 CD4+CD25+（Treg）细胞和 CD4+CD25+Foxp3+（nTreg）细胞两项，实验组进展期患者均低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；实验组稳定期白癜风患者略低于对照组，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 两组各表型细胞和CD4+CD25+Treg、CD4+CD25+Foxp3+nTreg细胞数量比较（%）

2.2 实验组和对照组Treg各亚群占CD+细胞百分比比较

由 表1可 得CD4+CD25+（Treg）占CD4+细 胞 百 分 比，实验组进展期为4.69%，稳定期为5.91%，对照组为8.10%。CD4+CD25+Foxp3+（nTreg）占CD4+CD25+百分比，实验组进展期为1.05%，稳定期为1.47%，对照组为2.30%。两种细胞所占CD4+细胞比例进展期均低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），稳定期略低于对照组，差异无统计学意义（P＞0.05）。

2.3 两组患者随访结果

对40例患者进行6个月的随访，对其后期病情发展情况进行随访，在第12周进行血清Treg细胞数量的复查。经治疗后，其中进展期患者有14例转为稳定期，复查其血清Treg和nTreg水平为（1.62%±1.04%）和（0.41%±0.29%），比治疗前的（1.38%±0.77%）和（0.31%±0.22%）显著增高，差异有统计学意义（P＜0.05）。

3 讨论

白癜风是一种常见的获得性表皮色素脱失性皮肤病，在我国发病率2%左右，可在皮肤上出现大小不等的类圆形白斑，边界清晰，边缘色素较深。该病患者由于表皮色素脱失，严重影响了外貌美观，产生心理自卑感和抑郁的情绪，对正常的生活、工作、人际交往和婚姻等均造成了严重的影响[2]。

白癜风发病机制尚未完全明了，治疗工作较为困难，目前随着医学技术的发展和分子水平的免疫学检测技术的普及，国际研究显示白癜风的发病可能是由T细胞或天然杀伤细胞（NK）介导的特异性免疫效应导致黑素细胞损伤[3]，即细胞免疫功能的紊乱是参与病理发展的主要机制。而CD4+CD25+调节性T细胞（Treg）是一种能够抑制自身免疫性T活性的细胞亚群，可以下调CD4+和CD8+T细胞免疫应答，从而维持免疫功能的稳定。Treg可分为天然性（nTreg）和诱导性(aTreg），nTreg是一种结构性表达的Treg细胞，在白癜风发病过程中被认为有重要关系[4]。其特异性抗原为Foxp3，是Treg细胞内表达的一种转录因子，2003年Rudenskv等证明Foxp3在CD4+CD25+T细胞上特异性表达，且Foxp3在Treg细胞的发育和功能上是必需的[5]。通过流式细胞仪可以检测出CD4+CD25+Foxp3+细胞即为nTreg。

在形态学研究中发现，皮损周围浸润着CD4+和CD8+T细胞，对分离细胞的体外培养显示，CD8+T细胞对自体黑素细胞具有毒性作用，可能为作用的主要细胞。有报道显示近皮损缘的CD4+T细胞和近正常皮肤CD8+T细胞对Treg细胞的反应性降低，CD8+的细胞毒T细胞（cytotoxic T lymphocyte，Tc）浸润，Tc可表达皮肤归巢受体，在表皮驻足并发挥其细胞毒作用破坏黑素细胞，可能是引起皮肤病变的主要原因[6]。本研究显示白癜风患者外周血中Treg数量和nTreg数量均低于正常对照组，而且在进展期患者尤其显著（P＜0.05），随访结果显示，经治疗好转的患者血清Treg细胞水平显著升高（P＜0.05），这说明可能是由于Treg细胞的减少和活性的降低，使CD4+和CD8+T细胞的反应活性上调，引起自身免疫性反应，造成黑素细胞的损伤[7]，而治疗后Treg水平的升高，抑制了T细胞的细胞毒作用。有文献表明在Treg细胞在组织移植中可以减少移植组织周围CD8+T细胞和CD4+T细胞数量，抑制移植免疫排斥反应，延长移植物存活时间[8]。

综上所述，笔者认为白癜风患者体内Treg含量降低，Treg细胞表达的减少引起CD8+T细胞和CD4+T细胞局部浸润，损伤黑素细胞结构，导致细胞免疫功能紊乱，色素生成障碍可能是引起白癜风患者色素脱失的主要原因。

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[6] 李泓馨，王华，高天文.寻常型进展期白癜风患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞检测[J].临床皮肤科杂志，2008，37（11）：714-716.

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