大孔树脂法测定平肝降脂胶囊中绞股蓝总皂苷的含量方法研究

2012-02-03徐玥丁青龙李莹周其

中国现代药物应用 2012年10期

徐玥丁青龙李莹周其

徐玥丁青龙李莹周其

目的研究平肝降脂胶囊中绞股蓝总皂苷的大孔树脂吸附最佳提取工艺。方法大孔树脂吸附法及紫外分光光度测定法。结果样品水溶液上AB28大孔吸附树脂，上样量为20ml静置30min，以3BV水洗脱后，再以2BV70%乙醇洗脱可以达到理想的结果。(样品水溶液:取装量差异项下的本品内容物，研细，三批各取约12.5g，精密称定，加蒸馏水适量使溶解，过滤，分别定容至500ml，按上述结果进行柱分离，收集洗脱液，过滤，蒸干，用甲醇定容至10ml，即得三份供试液，备用。结论采取该方法可以很好测定平肝降脂胶囊中的绞股蓝总皂苷的含量。

平肝降脂胶囊;大孔树脂吸附法;UV法

平肝降脂胶囊为解放军第102医院与南京中医药大学海洋药物研究所制剂研究生联合研制的中药复方制剂，主要由白芍、丹参、绞股蓝、鳖甲等药组成，具有清热利胆，平肝养血，降低血清谷丙转氨酶;用于治疗迁延性、慢性肝炎;我们对平肝降脂胶囊中绞股蓝总皂苷进行含量测定控制，实验及结果如下。

1 实验方法［1-3］

1.1 仪器、材料 752型紫外可见分光光度计(上海仪器厂);10万分之一电子天平(上海仪器厂);恒温烘箱(沈阳利港净化设备厂)。平肝降脂胶囊(解放军第102医院制剂中心，批号 070622、070702、070703);对照品人参皂苷 Rb1(中国药品生物制品检定所，批号:110704-200217);大孔吸附树脂AB28(天津南开大学化工厂);甲醇、乙醇、正丁醇、乙醚、高氯酸、香草醛等均为分析纯。

1.2 对照品试液的配制精密称取人参皂苷Rb1对照品2.04mg，加甲醇制成每1ml含人参皂苷Rb11.02mg的溶液，作为对照品溶液。

1.3 测定波长的确定精密吸取供试液10μl，人参总皂苷对照品溶液50μl(1.02mg/m l)，分别置具塞试管中，在60℃水浴中蒸干，加5%香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，摇匀，密塞，于60℃水浴中加热15min，取出立即用冰水冷却，加冰醋酸5ml，摇匀，于400～800nm波长处扫描测定吸收度，结果均在550nm处有最大吸收波长，故选择550nm为测定波长。

1.4 空白干扰试验精密吸取甲醇液60μl，置具塞试管中，在60℃水浴中蒸干，加5%香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，摇匀，密塞，于60℃水浴中加热15min，取出立即用冰水冷却，加冰醋酸5m l，摇匀，用以上试剂为空白在550nm波长处测定吸收度，结果显示阴性无干扰，图谱见附录。

1.5 标准曲线的绘制精密吸取人参皂苷Rb1对照品(1.02mg/ml)50、100、200、300、400、500μl置具塞试管中，操作方法同“三”步骤，于550nm处测定各A值，结果见表1。

表1 吸光度与对照品含量关系

以对照品含量为横坐标，A值为纵坐标绘制标准曲线，曲线如下:

图1 人参皂苷Rb1标准曲线

2 结果

人参皂苷Rb1对照品含量在51～510μg间与吸光度成线性关系，计算回归方程为:A=0.0025C-0.0016;r=0.9998。

2.1 精密度试验取同一份对照品5份，分别在550nm处测其吸光度，结果RSD为1.12%，仪器精密度良好，数据见表2。

表2 精密度实验结果

结论:仪器精密度良好。

3 工艺参数的考察和优化［1，2］

3.1 大孔吸附树脂的选择及前处理参考相关文献［25］本实验选用AB28型大孔吸附树脂，以乙醇湿法装柱，继而用95%乙醇洗脱，不时检测流出的乙醇，当流出的乙醇与水(1∶1)混合不呈白色混浊即可，然后用大量的蒸馏水洗至无醇味，称取树脂时以树脂预处理后的质量(g)为单位备用。

3.2 上柱液的制备取装量差异项下的本品内容物(批号:070622)，研细，取约12.5g，精密称定，加蒸馏水适量使溶解，过滤，定容至500ml。

3.3 洗脱溶酶的确定考察不同体积分数的乙醇洗脱对绞股蓝总皂苷提取效果的影响。将绞股蓝总皂苷提取液通过树脂柱(2cm×10cm)。洗脱时分别用4BV的20%、40%、60%、70%、80%、95%及无水乙醇洗脱皂苷类成分，将洗脱液分别蒸干，用甲醇溶解并定容，分别测定洗脱液中绞股蓝总皂苷的含量。结果见图2。

图2 洗脱溶酶的考察结果

由以上结果可知，随着乙醇含量的提高，皂苷的含量相应的提高。但是，70%、80%、95%、无水乙醇的差别不是很大，再从经济角度考虑，选择70%醇作为洗脱溶剂。

3.4 70 %乙醇洗脱量的确定将绞股蓝提取液约15ml通过树脂柱(2cm×10cm)。静置30min后，先用3BV蒸馏水洗至流出液Molish反应呈阴性，再用4BV70%乙醇依次洗脱，洗脱液流速1ml/min，以1BV为1份，共收集4份，按上述高氯酸-香草醛显色方法测定绞股蓝总皂苷的含量。结果见表3。

表3 不同用量70%乙醇洗脱后皂苷的含量

结果显示，2BV洗脱溶媒绞股蓝总皂苷的累计百分含量达96%。基本洗尽，故确定洗脱溶媒为20ml。

3.5 最佳上柱量的确定分别吸取绞股蓝总皂苷提取液5、8、12、15、20、25、30m l上大孔吸附树脂柱(2cm ×10cm)，过柱流出液重吸附3次，且静置30min，依次用3BV蒸馏水、2BV70%乙醇溶液梯度洗脱，收集70%乙醇洗脱液，按上述高氯酸-香草醛显色方法测定绞股蓝总皂苷的含量。结果显示，20ml上柱量为饱和上柱量，超过20ml即超过了树脂的吸附容量，因此，20m l为最佳上柱量。

3.6 最佳吸附时间的确定分别吸取绞股蓝总皂苷提取液20ml上大孔吸附树脂柱(2cm×10cm)，过柱流出液重吸附3次，分别静置 5、15、30、60min，依次用 3BV 蒸馏水、2BV70%乙醇溶液梯度洗脱，收集70%乙醇洗脱液，按上述高氯酸-香草醛显色方法测定绞股蓝总皂苷的含量。结果显示，静置30min后洗脱最佳。