我国商业化SPF级小鼠病原体污染分析

葛文平，张 旭，高 翔，刘 宁，张海涛，张晓娟

（中国医学科学院，北京协和医学院，医学实验动物研究所，卫生部人类疾病比较医学重点实验室，国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室，北京 100021）

小鼠是现代医学研究和生命科学研究最常用的模式动物之一，其微生物质量会直接影响实验结果的准确性，而判断微生物质量的基础是对其携带的微生物和寄生虫进行定期检测，根据检测结果监督、改进、提高动物的饲养管理水平。ICR、KM、C57BL、BALB/c和 BALB/c-nu是我国目前需求量最大的几种小鼠品系，本文对五家实验动物生产单位生产的 ICR、KM、C57BL/6、BALB/c及 BALB/cnu等品系的无特殊病原体（SPF）小鼠进行随机抽检。按现行国标《实验动物微生物学检测方法》［1］和《实验动物寄生虫学检测方法》［2］进行检测，鉴定抽检小鼠所携带的微生物和寄生虫情况，进而为实验动物生产管理和质量评估提供参考。

1 材料和方法

1.1 材料

本实验所检测的实验小鼠均购自具有《实验动物生产许可证》的实验动物生产单位。单位名称以A、B、C、D、E为代码，购入动物的许可［A：SCXK （京）2009-0007；B：SCXK（京）2006-0009；C：SCXK （京）2007-0005；D：SCXK（京）2008-0016；E：SCXK （京）2008-0002］。其中，KM小鼠购自（C、D）两家生产单位；ICR小鼠品系购自（B、C、E）三家生产单位；C57BL/6购自（A、B、D、E）四家生产单位； BALB/c购自（A、B、D、E）四家生产单位；BALB/cnu购自（A、B、E）三家生产单位。每个生产单位，每种小鼠品系抽检数量为10只。

1.2 检测方法

按照《实验动物微生物学检测方法》（GB/T 14926.1。14926.64.2001）和《实验动物寄生虫学检测方法》（GB/T 18448.1～18448.10.2001），对所得到的样本进行微生物和寄生虫检测。按照《实验动物微生物学等级及监测》（GB 14922.2-2001）和《实验动物寄生虫学等级及监测》（GB 14922.1-2001），对检测结果进行综合判定。检测项目见表1。

2 结果

2.1 细菌检测结果

按方法1.2对来自5个不同生产单位的 KM、ICR、C57BL/6、BALB/c、BALB/c-nu，小鼠进行了细菌检测，检测结果见表2。以肺炎克雷伯杆菌感染的比例最高。金黄金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌亦见感染。

表1 微生物和寄生虫检测项目Tab.1 List of bacteria，virus and parasites

表2 细菌检测结果Tab.2 Results of bacteria detection

2.2 病毒检测结果

按方法1.2对来自5个不同生产单位的 KM、ICR、C57BL/6、BALB/c、BALB/c-nu，小鼠进行了病毒检测，检测结果见表3。以Reo-3、PVM、POLY和SV感染率较高，MHV和MVM亦见感染。

2.3 病毒检测结果

按方法1.2对来自5个不同生产单位的 KM、ICR、C57BL/6、BALB/c、BALB/c-nu小鼠进行了寄生虫检测，检测结果见表4。

3 讨论

根据我国国家标准，在抽检的5个生产单位的商 品 化 SPF 水 平 的 KM、ICR、C57BL/6、BALB/c、BALB/c-nu小鼠中，病毒方面主要是呼肠孤病毒Ⅲ型（Reo-3），小鼠肺炎病毒（PVM），多瘤病毒（POLY）；细菌方面主要是肺炎克雷伯杆菌金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌，总阳性率见表5。

表3 病毒检测结果Tab.3 Results of virus detection

表4 寄生虫检测结果Tab.4 Results of parasite detection

表5 携带病原微生物的阳性率Tab.5 Positive ratios of pathogenic microorganisms

一些国家的SPF级小鼠不排除绿脓杆菌，一是绿脓杆菌不易排除，二是绿脓杆菌为条件致病菌，对实验研究危害相对较小［3-5］。

在病毒性病原中，呼肠孤病毒Ⅲ型（Reo-3）感染的阳性率最高，在许多脊椎动物体内可分离获得呼肠孤病毒，包括马、牛、猪、绵羊、豚鼠、犬、猫、貂、禽类、蝙蝠以及人、黑猩猩和猴。除了感染啮齿动物和禽类之外，一般不引起明显的疾病，特别是对成年动物。呼肠孤病毒与动物和人类某些呼吸道及消化道疾病的发生有关［6］。

PVM属于副黏液病毒属（paramyxoviridae）的肺病毒（pneumovirus），其天然宿主是小鼠、大鼠和仓鼠。常见小鼠感染会引起慢性鼻炎和间质性肺炎，通常不会产生明显的临床症状，而多呈潜伏性感染［6］。

小鼠肝炎病毒MHV（mouse hepatitis viruc）可引起小鼠发生肝炎、脑炎和肠炎，一般呈亚临床感染或慢性感染，而机体抵抗力低时可引起急性发病死亡，导致实验失败。MHV可改变各种免疫应答参数，影响酶的活性，从而对实验产生严重的干扰［6］。克雷伯杆菌肺炎是由于一种常见的病原菌叫克雷伯菌引起的肺部炎症，存在于正常人的肠道和呼吸道，亦存在于水和谷物中。在免疫低下以及接受手术和侵袭性医源性操作的人群易患本属细菌感染，实验动物操作人员可能会将克雷伯杆菌传给小鼠，从而造成小鼠的感染，免疫缺陷动物尤其敏感［7-10］。

小鼠体外寄生虫常见的有螨、蚤、虱等。小鼠饲养环境与外界施行隔离控制，使得需在宿主体外完成部分生活史的虱、蚤的感染机会大大减少，而螨成为最主要的体外寄生虫。患鼠因寄生虫种类的不同而症状不同，一般可出现被毛粗乱、烦躁不安、消瘦、发育迟缓、种鼠生产能力下降、仔鼠成活率低等症状，感染严重部位可脱毛、结痂、瘙痒、溃疡或发生皮炎，影响实验结果。

通过检测，目前SPF级小鼠的微生物质量具有不稳定性，有一些国标中规定需要排除的病原体，这些病原体对药物评价、疫苗研制和免疫学研究的影响尤其严重。以上病原体均可通过移卵或剖腹产予以净化。

［1］GB 14922.2 2001，中华人民共和国国家标准—— 实验动物微生物学等级及监测［S］.北京：中国标准出版社，2001.

［2］GB 14922.1 2001，中华人民共和国国家标准——实验动物寄生虫学等级及监测［S］.北京：中国标准出版社，2001.

［3］Taconic Health Standards.http：//www.taconic.com/wmspage.cfm?parm1=265

［4］List of agentsmonitored and policy for communication of changes in health status.The Jackson Laboratory.http：//jaxmice.jax.org/health/agents_list.htm l

［5］Routine Health Monitoring of Isolator-Reared VAF/Elite? Animals. http：//www. criver. com/en-US/TrainEducation/ health/Pages/home.aspx

［6］殷震，刘景华.动物病毒学［M］.北京：科学出版社，1985

［7］Bleich A，Kirsch P，Sahly H，Fahey J，Smoczek A，Hedrich HJ，Sundberg JP，2008.Keebsiella oxytoca： opportunistic infections in laboratory rodent［J］.Lab Anim 42：369-375.

［8］Fox JG，Anderson LC，Lowe FM，Quimby FW，editors.Laboratory Animal Medicine.2nded［M］.San Diego：Academic PRESS：2002.1325 pp.

［9］Fox J，Barthold S，Daviss M，Newcomer C，Quimby F，and Smith A editors.The Mouse in Biomedical Research：Diseases： 2nded［M］.New York：Academic Press：2007.756 pp

［10］MacArthur CJ，Pillers DA，Pang J，Degagne JM，Kempton JB，Trune DR.2008.Gram-negative pathogen K lebsiella oxytoca is associated with spontaneous chronic otitis media in Toll-like receptor 4-deficient C3H/HeJ mice［J］.Acta-to-laryngologica 128：132-138.

［11］Percy DH，Barthold SW.pathology of Laboratory Rodents and Rabbits［J］.Ames：Lowa State University Press；2007.325 pp.