喉鳞状细胞癌患者癌组织Kindlin-2与整合素β表达的关系

鲁 杰 (天津市第五中心医院耳鼻喉科，天津 300450)

喉鳞状细胞癌患者癌组织Kindlin-2与整合素β表达的关系

鲁 杰 (天津市第五中心医院耳鼻喉科，天津 300450)

目的观察喉鳞状细胞癌组织中Kindlin-2与整合素β蛋白的表达及其临床意义，以指导预后判断及临床治疗。方法收集85例喉鳞状细胞癌标本为观察组，60例正常喉黏膜为对照组，应用免疫组织化学技术检测两组Kindlin-2与整合素β蛋白表达。结果喉鳞状细胞癌Kindlin-2与整合素β表达阳性率明显高于正常喉黏膜组织，Kindlin-2与整合素β表达与TNM分期、Ki67表达及淋巴结转移密切相关，喉鳞状细胞癌Kindlin-2与整合素β表达与患者生存密切相关。结论Kindlin-2与整合素β在喉鳞状细胞癌发生发展中具有重要作用，联合检测Kindlin-2与整合素β可能与喉鳞状细胞癌预后密切相关。

喉鳞状细胞癌;Kindlin-2;整合素β;免疫组织化学;生存分析

喉鳞状细胞癌发生与发展是多因素综合作用的结果。相关研究表明细胞黏附对肿瘤进展有重要作用。Kindlin-2是纽蛋白(黏着斑蛋白)家族重要成员，在肿瘤中高表达〔1〕。整合素β是黏附分子，通过介导细胞外基质蛋白、细胞之间的黏附和信号转导，在肿瘤进展中起重要作用〔2〕。本实验探讨喉鳞状细胞癌组织中Kindlin-2与整合素β表达的关系，关注其对判断预后的价值，以期为肿瘤生物学行为研究提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料 2005年1月至2007年2月我院存档的喉鳞状细胞癌标本蜡块为观察组，纳入均符合WHO关于喉鳞状细胞癌诊断标准，并经病理主任医师再次确诊。均排除术前放、化疗患者，共85例，男49例，女36例，年龄47～79(平均59.0)岁，临床随访资料完整。同时选取同期病理证实为正常喉黏膜组织60例为对照组，男33例，女27例，年龄48～78(平均59.2)岁。两组一般临床特征无明显差别，具有可比性。

1.2 Kindlin-2与整合素β检测 应用免疫组织化学技术SP法，Kindlin-2与整合素β试剂的浓缩液均购自武汉博士德生物技术公司，按不同配比预实验，选择最佳显色比例。具体步骤:石蜡切片脱蜡至水后，3%H2O2去离子水孵育10 min;抗原修复后分别滴加Kindlin-2或整合素β蛋白，4℃过夜，PBS冲洗3次;滴加生物素标记的二抗，室温孵育20 min，PBS冲洗3次;滴加辣根酶标记链霉卵白素，室温孵育20～30 min，PBS冲洗3次;DAB显色;自来水充分冲洗、复染、脱水、透明、封片。操作全过程由同一病理技师完成，以避免人为误差，严格质控。

1.3 结果判定标准 Kindlin-2与整合素β蛋白阳性染色主要位于细胞质，以细胞质有棕黄色颗粒为阳性，在每张切片中均仔细选择10个肿瘤区的高倍镜视野，根据染色部位和染色细胞所占百分比进行综合评分。不着色0分，着色淡者1分，着色深者2分;着色细胞占计数细胞百分率＜5%为0分，5% ～25%1分，26% ～50%2分，＞50%3分。将每张观察的切片着色强度得分和着色细胞百分率得分相乘，为其最后得分。0～1分阴性(－)，≥2分阳性。

1.4 统计学方法 应用SAS6.12统计软件进行定性资料的χ2检验，并进行生存分析。

2 结果

2.1 两组Kindlin-2与整合素β表达 观察组Kindlin-2〔50(58.8%)〕与整合素β表达阳性率〔55(64.7%)〕明显高于对照组〔16(26.7%)、19(31.7%)〕(χ2=14.666 1，P=0.000 1;χ2=15.346 1，P ＜0.000 1)。

2.2 观察组中不同临床特征中Kindlin-2与整合素β表达观察组Kindlin-2与整合素β表达与TNM分期、Ki67表达及淋巴结转移密切相关。见表1。

表1 观察组不同临床病理特征患者Kindlin-2与整合素β表达〔n(%)〕

2.3 喉鳞状细胞癌组织中Kindlin-2和整合素β表达与生存的关系 随访6～60个月，经生存分析显示，喉鳞状细胞癌中Kindlin-2(χ2=12.21，P=0.001 2)和整合素 β 表达(χ2=14.11，P＜0.000 1)与预后相关，即Kindlin-2与整合素β蛋白表达阳性组患者预后差。

3 讨论

喉鳞状细胞癌是头颈部最常见的恶性肿瘤之一，鳞状细胞癌细胞无限制地恶性增殖、大量新生血管形成和向周围侵袭性生长及淋巴结转移是其主要的恶性生物学行为。近来人们关注基因和蛋白表达对喉鳞状细胞癌发生发展的影响，发现肿瘤细胞黏附问题是影响肿瘤侵袭和转移的重要因素〔3〕，与其相关的有整合素家族〔4〕。整合素是一类由α、β二个亚基组成的跨膜糖蛋白，每个亚单位都有细胞外片段，跨膜片段和细胞内片段，胞外段介导细胞与细胞外基质之间黏附，还可介导细胞与细胞间黏附。整合素β1可以构成细胞外基质的绝大多数受体，是细胞与细胞外基质间不可缺少的黏附因子。Kindlin属纽蛋白家族，均与细胞内信号转导、细胞迁移、黏附及增殖有关，其中以Kindlin-2功能最广泛，其可能与整合素β1具有内在的共同作用位点。

本实验结果提示肿瘤发生过程中，Kindlin-2与整合素β在肿瘤进展中具有重要促进作用。由于Ki67表达、淋巴结转移及TNM分期均与患者预后相关，因此联合检测二者对患者预后判断可能有重要价值，生存分析结论直接证实了此观点。Kindlin-2作为胞内接头蛋白，影响整合素β胞内段，从深层次调节整合素活性。Kindlin-2还可促进转化生长因子β表达，进而促进细胞分化和进展，促进上皮细胞和间质细胞转分化。Kindlin-2还可以通过黏附分子作为中间分子，促进肿瘤血管生成〔5〕。但是有研究也显示Kindlin作用于整合素的过程也不是很稳定〔6〕，因此有时表现出的相关性并不是十分密切，其主要受细胞内Kindlin表达水平及活化态表达量的影响。

1 Shen Z，Ye Y，Dong L，et al.Kindlin-2:a novel adhesion protein related to tumor invasion，lymph nodemetastasis，and patient outcome in gastric cancer〔J〕.Am JSurg，2012;203(2):222-9.

2 Sin S，Bonin F，Petit V，et al.Role of the focal adhesion protein kindlin-1 in breast cancer growth and lung metastasis〔J〕.J Natl Cancer Inst，2011;103(17):1323-37.

3 刘爱东，刘士生，许志萍，等.E-Cadherin在胃癌中的表达及意义〔J〕.广东医学，2007;28(11):1806-7.

4 黄建松，陶岚岚，周玉兰，等.Kindlin与整合素的活化〔J〕.中国细胞生物学学报，2010;32(4):649-55.

5 Gong X，An Z，Wang Y，et al.Kindlin-2 controls sensitivity of prostate cancer cells to cisplatin-induced cell death〔J〕.Cancer Lett，2010;299(1):54-62.

6 Meves A，Stremmel C，Gottschalk K，et al.The Kindlin protein family:new members to the club of focaladhesion proteins〔J〕.Trends Cell Biol，2009;19(10):504-13.

R739.65

A

1005-9202(2012)12-2492-02;

10.3969/j.issn.1005-9202.2012.12.021

鲁 杰(1976-)，女，主治医师，主要从事耳鼻喉疾病研究。

〔2011-12-19收稿 2012-03-22修回〕

(编辑 袁左鸣/张 慧)