血浆中APC基因甲基化检测在早期肺癌诊断中的意义

贾红珍

肺癌是目前全世界癌症死因的第一名。1995年全世界有60万人死于肺癌，而且每年人数都在上升。本病多在40岁以上发病，而女性患肺癌的发生率上升趋势更明显，发病年龄高峰在60～79岁之间。男女患病率为2.3:1。以往研究发现，肺癌组织中APC基因的启动子区会发生高甲基化，并且对肺癌诊断可能有一定的价值。肿瘤患者血浆中DNA含量增高，主要来源于肿瘤细胞，因此若在血浆DNA中也能检测到这种甲基化改变，将有助于肺癌早期诊断。在本次研究中将对我院自2011年1月1日至2011年12月31日前来就诊的31例肺癌患者给予临床分析，从而探讨血浆中APC基因甲基化检测在早期肺癌诊断的临床意义，为提高肺癌疾病的诊断率从而使患者得到及时治疗以及提高患者生活与生存质量提供可靠临床依据，现结果如下。

资料与方法

1.一般资料:本文将对我院自2011年1月1日至2011年12月31日前来就诊的31例肺癌患者给予临床分析。31例肺癌患者作为研究组，其中男性患者为21例、女性患者为10例，年龄在29至71岁之间，平均为(52.1±1.3)岁;选取31例肺良性肿瘤患者作为对照组一，其中男性患者为19例、女性患者为12例，年龄在27至70岁之间，平均为(51.9±1.1)岁;选取31例健康人群为对照组二，其中男性为20例、女性为11例，年龄在28至71岁之间，平均为(52.0±1.2)岁。研究组、对照组一、对照组二患者在性别、年龄、教育背景以及社会经历等方面无显著性差异，且P＞0.05，三组人群一般资料具有临床可比性。

2.方法:研究组肺癌患者、对照组一肺部良性肿瘤患者以及对照组二健康人群分别进行血浆中APC基因甲基化检测，观察并记录三组人群检测结果，进行统计学分析，得出结论。

(1)样本采集:对研究组、对照组一、对照组二患者分别采集EDTA－K2抗凝全血，采集量为2毫升，之后将所采集到的血液样本进行离心，选用每分钟3000转的离心速度持续离心十分钟，分离血浆，之后对分离出的血浆采用每分钟12000转继续离心十分钟，将所得血浆置于零下70摄氏度保存备用。

(2)试剂及仪器:转甲基试剂盒选用NEB公司生产;DNA热启动聚合酶为TaKaRa公司生产;提取DNA选用磁珠法，使用上海浩源公司生产的相关试剂盒;选用MJ公司生产的PTC－100型号PCR扩增仪;选用KoDak公司制造的凝胶成像系统;选用美国ABI公司生产的7500荧光定量基因扩增仪;化学修饰试剂盒选用Chemicon公司生产。

(3)检测方法:使用磁珠法对上述提取血浆进行提取，具体操作步骤为血浆经裂解液处理后，加入磁珠以及结合液，促进血浆中DNA于磁珠表面吸附，吸附完成后使用磁体将磁珠从血浆中吸出，并使用洗液对磁珠进行多次清洗，最后将清洗所得溶液使用洗脱液进行DNA洗脱，将上清液吸出，上清液中所含物质即为血浆中DNA。将上清液进行化学修饰，之后使用实时荧光定量MSP进行扩增，即TaqMan探针，检测APC基因甲基化，将结果设定为阳性以及阴性两种。

3.统计学方法:所有数据均使用SPSS13.0软件包进行统计学分析，对于计量资料用(±s)表示，采用t检验，计数资料采用X2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

结果

研究组肺癌患者、对照组一肺部良性肿瘤患者以及对照组二健康人群血浆中APC基因甲基化检测结果对比分析，具体情况见表1。

表1 三组人群血浆中APC基因甲基化检测结果对比分析

由表一可知，研究组肺癌患者体内血浆中APC基因甲基化阳性率为100.00%，明显高于对照组一的3.23%以及对照组二的0.00%，且P＜0.05，三组人群对比结果具有统计学意义;研究组肺癌患者体内血浆中APC基因甲基化阴性率为0.00%，明显低于对照组的96.77%以及对照组二的100.00%，且P＜0.05，三组人群对比结果具有统计学意义。

讨论

APC基因，全称为adenomatous polyposis coli基因［1］，近年来随着医学水平的提高，该基因的染色体定位、蛋白质结构以及基因序列均已经明确［2］。研究发现［3］肺癌患者身体组织中APC基因的启动子区有高甲基化现象发生，因此能够为临床诊断肺癌疾病提供可靠的依据，但肺癌患者血浆中的DNA含量有所增高，且此类DNA的主要来源是患者自身的肿瘤细胞［4］，因此肺癌患者血浆中若能够检测出APC基因发生甲基化改变，将更有助于早期肺癌患者的病情诊断。

本次研究所选用的肺癌患者均经CT临床医学检查可知其体内含有肺部实体瘤，且肺部实体瘤直径均小于2厘米，患者均进行病理活检，确诊为肺癌患者，因此本文中研究组所有肺癌患者均为早期。经本文研究可知，早期肺癌患者体内血浆中APC基因甲基化阳性率与肺部良性肿瘤患者及健康人群检测结果具有明显差异，因此可对患者进行血浆中APC基因甲基化检测，根据患者检测结果对其病情进行判断，即血浆中APC基因甲基化检测结果为阳性，则综合患者临床医学影像检查结果以及实验室检查结果可判断其为肺癌疾病。

综上所述，对患者进行血浆中APC基因甲基化检测，能够根据患者检测结果，较为准确的判断患者是否患有肺癌疾病，使患者及时进行治疗，并制定具有针对性的治疗方案，从而提高患者治疗效果，提高患者生活质量与生存率。

1 Gmnau C，Clark SJ，Rosenthal A.Bisulfite genomic sequencing:systematic Investigation of critical experimental parameters［J］.Nucleic Acids Res，2011，29(13):65.

2 潘世扬，张寄南，魏源华，等.抑癌基因APC启动子甲基化检测及其在肺癌诊断中的应用［J］.临床检验杂志，2004，22(6):415－418.

3 张丽霞，潘世扬，谢而付，等.不同甲基化检测技术对模拟肺癌患者血浆中APC基因甲基化的检测［J］.临床检验杂志，2007，25(3):199－201.

4 Leon SA，Shapiro B，Sklaroff DM，et a1.Free DNA in the serum of cancer patients and the effect of therapy［J］.Cancer Res，1977，37(3):646－650.