HPLC法测定清热止带胶囊中盐酸小檗碱的含量

童学飞 王 浩 胡耀斐

湖北省十堰市中医医院药剂科，湖北十堰 442012

清热止带胶囊，为我院知名中医经验方，具有清热藻湿，收敛止带的作用。主要适应证为：盆腔炎、阴道炎、膀胱炎、慢性子宫内膜炎、阴道沾膜等妇科湿热型赤白带症。我们建立了高效液相色谱（HPLC）法用于测定方中黄柏有效成分盐酸小檗碱的含量[1]。本方法重现性好、简便且准确，可用于盐酸小檗碱的质量控制。

1 试药与仪器

清热止带胶囊（十堰市中医医院制剂室制备，批号：101001、101002、101003 ），乙腈（色谱纯，Fisher Scientific 公司），盐酸小檗碱（中国药品生物制品检定所提供，批号20090902）；水为重蒸馏水。2487双波长紫外检测器；Waters高效液相色谱仪；Kudos SK3200H超声仪(上海科导超声仪器有限公司)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件[2]

经实验研究选择用Inertil ODS-3色谱柱，检测波长为346nm；柱温 35℃；流速1mL/min；乙腈-0.1%磷酸（1000mL磷酸溶液中含2g十二烷基磺酸钠）(48:52)为流动相。

2.2 溶液制备

①盐酸小檗碱对照品适量需在100℃干燥5h的情况下精密称取，并加流动相制成每1mL中含0.1g的溶液，然后即得。

②取本品粉末约0.5g，精密称定，精密加入流动相50mL超声处理40min，放冷，再称定重量，用流动相补足减失的重量，过滤即得。

③阴性对照溶液的制备：按处方及制备工艺制成缺黄柏的阴性样品。

2.3 专属性实验

精密吸取供试品溶液、阴性对照溶液和对照品溶液各20μL，分别注入液相色谱仪，并记录色谱图，色谱见图1。

2.4 线性关系考察

分置于 10mL 量瓶中精密量取对照品溶液 1、2、3、4、5mL，并用甲醇稀释至刻度，分别吸取20μL，注入液相色谱仪测定峰面积积分值，得回归方程为 Y＝11512.55+4617276.53x，r＝0.9999，测定结果表明，在0.0848-0.4240（μg）范围内盐酸小檗碱的线性关系良好。

2.5 精密度试验

连续进样5次来精密吸取对照品溶液20μL，分别测定峰面积，结果表明，RSD 为 0.37%（n=5）。

图1 高效液相色谱A、对照品 B、样品 C、阴性对照品Fig 1 HLPCA、samples B、phloridzin control C、negative control

2.6 稳定性试验

取同一供试品溶液（批号：101001），每 0、2、4、6、8、10、12 小时，连续进样，依法测定峰面积，结果，RSD为0.89%（n=6）。

2.7 重复性试验

在依照此法制备供试品溶液中精密称取同一批号样品 （批号：101001）5份，然后测定样品中盐酸小檗碱含量。结果，平均含量为1.6885mg/g,RSD为0.53%(n=6)。

2.8 加样回收率试验

取同一批号(批号101001)样品适量，研细，取约1.0g，精密称定， 共 6份,1、2、3号样品加入 0.47mg对照品,4、5、6号样品加入0.94mg对照品,按供试品溶液的制备方法制备并进样测定，依据测得的含量计算回收率，结果详见表1。

表1 加样回收试验结果（n=6）Tab 1 Results of sample recovery test(n=6)

2.9 样品含量测定

3批样品中盐酸小檗碱的含量分别为：1.6908、1.7105、1.6949mg/g。

3 讨论

盐酸小檗碱为口服常释剂型。属甲类医保药品。具有清热藻湿，收敛止带的作用。主要适应证为：盆腔炎、阴道炎、膀胱炎、慢性子宫内膜炎、阴道沾膜等妇科湿热型赤白带症。本组实验平均回收率为98.9%，RSD=1.9%（n=6）。表明本方法简便、准确、重现性好，可用于盐酸小檗碱的质量控制。

[1]王玉杰.RP-HPLC法测定中药材黄柏中小檗碱的含量[J].中国中药杂志，1995,20(7):425-426.

[2]国家药典委员汇编.中华人民共和国药典（一部）（2005年版）[S].北京:化学工业出版社,2005.

[3]李方实，俞斌，无机与分析化学实验[M].江苏：东南大学出版社，2002.

[4]高素莲，周宁国.现代分离纯化与分析技术-在高分子材料研究中的应用[M].北京：中国科学技术大学出版社，2004.

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